检测Hers病的引物组合、试剂和试剂盒、突变体蛋白、PYGL基因突变体及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种检测Hers病的引物组合、试剂和试剂盒、突变体蛋白、PYGL基因突变体及应用，所述PYGL突变体蛋白相较于野生型PYGL基因编码的蛋白，第427位氨基酸由精氨酸突变为终止密码，和/或，第649位氨基酸由酪氨酸突变为半胱氨酸。本发明专利技术首次发现PYGL突变体蛋白和PYGL基因突变体可以导致Hers病，且与Hers病的发病密切相关，通过检测该突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测患者是否因此患Hers病，明确患者的分子遗传学或产前诊断、指导患者的精准治疗和优生优育。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测试剂领域，尤其涉及一种检测hers病的引物组合、试剂和试剂盒、突变体蛋白、pygl基因突变体及应用。

技术介绍

1、糖原累积病(gsd)是一组先天性酶缺陷导致的糖原代谢障碍性疾病。由于糖原分解障碍，在肝脏、肌肉和肾脏等组织中异常堆积，引起受累组织功能障碍及代谢异常，导致肝脏肿大、生长发育迟缓、转氨酶升高、低血糖和高脂血症等表现。目前已经证实由糖原合成和分解代谢中所必需的酶缺陷所造成的糖原累积病共12型，其中i、iii、iv、vi和ix型累及肝脏。gsdvi型糖原累积病/糖原累积病vi型(glycogen storage disease vi，gsd6；mim232700)，又称为hers病，该病是一种常染色体隐性遗传病，发病率约1/60000至1/85000。pygl基因突变是导致hers病的病因；该病临床表现多在婴幼儿期出现临床症状，大部分患儿有肝脏肿大和肝脏转氨酶增高，部分有生长迟缓，典型表现还有低血糖，高乳酸血症、高脂血症和血酮体增高，部分患儿肝脏病理检查发现肝硬化。

2、pygl基因(mim 613741)定位于染色体14q22.1，包括20个外显子和19个内含子，基因长39.3kb，编码847个氨基酸的pygl(磷酸化酶)蛋白。该基因主要在肝脏、肾脏、小肠等组织中表达，pygl基因突变后因肝磷酸化酶缺陷，导致葡萄糖-6-磷酸酶活性不足，导致肝细胞内糖原分解不足、atp生成不足和功能障碍，糖原在肝脏、肾脏和小肠中过度累积，患者常有空腹低血糖、肝肿大、矮小及肾脏病变等多系统损害，引起hers病。

3、因此，基因突变是导致疾病发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊hers病的重要遗传学标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断。

技术实现思路

1、本专利技术的主要目的是提供一种检测hers病的引物组合、试剂和试剂盒、突变体蛋白、pygl基因突变体及应用，旨在解决hers病病变的筛查和检测的技术问题。

2、为实现上述目的，本专利技术提供一种pygl突变体蛋白，所述pygl突变体蛋白相较于野生型pygl基因编码的蛋白，第427位氨基酸由精氨酸突变为终止密码，和/或，第649位氨基酸由酪氨酸突变为半胱氨酸。

3、本专利技术还提供了一种编码如上所述的pygl突变体蛋白的pygl基因突变体，所述pygl基因相较于野生型pygl基因第11号外显子的第1279位碱基由碱基a突变为碱基t：和/或所述pygl基因相较于野生型pygl基因第16号外显子的第1946位碱基由碱基a突变为碱基g。

4、本专利技术还提供了一种如上述的pygl突变体蛋白或如上述的pygl基因突变体作为靶点在制备试剂或试剂盒中的应用，所述试剂包括检测hers病的引物组合、探针、抗体或质谱检测试剂中的一种或多种；所述试剂盒包括分子遗传学诊断和/或筛查试剂盒、产前基因诊断和/或筛查试剂盒、孕前基因诊断和/或筛查试剂盒、辅助防治hers病试剂盒中的一种或多种。

5、本专利技术还提供了一种检测hers病的扩增引物，所述扩增引物包括上游引物pygl-f1、pygl-f2和下游引物pygl-r1、pygl-r2；所述pygl-f1的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述下游引物pygl-r1的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述pygl-f2的核苷酸序列如seqid no.3所示，所述下游引物pygl-r2的核苷酸序列如seq id no.4所示。

6、本专利技术提供了一种检测hers病的测序引物，所述测序引物包括所述测序引物包括上游引物pygl-seqf1、pygl-seqf2和下游引物pygl-seqr1、pygl-seqr2；所述上游引物pygl-seqf1的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述下游引物pygl-seqr1的核苷酸序列如seq id no.6所示；所述上游引物pygl-seqf2的核苷酸序列如seq id no.7所示，所述下游引物pygl-seqr2的核苷酸序列如seq id no.8所示。

7、本专利技术还提供了一种检测hers病的引物组合，包括如上所述的扩增引物和/或如上所述的测序引物。

8、本专利技术还提供了一种如上所述的引物组合在制备检测hers病的试剂中的应用。

9、进一步地，所述hers病的检测靶点包括pygl基因突变体，所述pygl基因相较于野生型pygl基因第11号外显子的第1279位碱基由碱基a突变为碱基t：和/或所述pygl基因相较于野生型pygl基因第16号外显子的第1946位碱基由碱基a突变为碱基g。

10、本专利技术还提供了一种检测hers病的试剂，所述试剂包括如上所述的引物组合。

11、本专利技术还提供了一种如上所述的试剂在试剂盒及其制备中的应用，所述试剂盒包括分子遗传学诊断和/或筛查试剂盒、产前基因诊断和/或筛查试剂盒、孕前基因诊断和/或筛查试剂盒、辅助防治hers病试剂盒中的一种或多种。

12、本专利技术达到的有益效果：

13、本专利技术提供的导致hers病的pygl突变体蛋白包括p.r427*或p.y649c。所述pygl突变体蛋白中的p.r427*与野生型pygl基因编码的蛋白相比，第427位氨基酸由精氨酸(r)突变为终止密码(*)，即无义突变；所述pygl突变体蛋白中的p.y649c与野生型pygl基因编码的蛋白相比，第649位氨基酸由酪氨酸(y)突变为半胱氨酸(c)。即本专利技术首次发现pygl突变体蛋白可以导致hers病，且与hers病的发病密切相关，通过检测该pygl突变体蛋白在生物样品中是否存在，可以有效地检测患者是否因此患hers病，明确患者的分子遗传学或产前诊断、指导患者的精准治疗和优生优育。

14、本专利技术还提供了编码上述所述pygl突变体蛋白的pygl基因突变体，所述pygl基因突变体包括c.1279a>t或c.1946a>g。本专利技术所述c.1279a>t突变指野生型pygl基因第11号外显子的第1279位碱基a突变为t，形成pygl基因突变体；所述c.1946a>g指野生型pygl基因的第16号外显子的第1946位碱基a突变为g，形成pygl基因突变体。本专利技术通过检测上述pygl基因突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测患者是否因此患hers病。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种PYGL突变体蛋白，其特征在于，所述PYGL突变体蛋白相较于野生型PYGL基因编码的蛋白，第427位氨基酸由精氨酸突变为终止密码，和/或，第649位氨基酸由酪氨酸突变为半胱氨酸。

2.一种编码如权利要求1所述的PYGL突变体蛋白的PYGL基因突变体，其特征在于，所述PYGL基因相较于野生型PYGL基因第11号外显子的第1279位碱基由碱基A突变为碱基T：

3.一种如权利要求1所述的PYGL突变体蛋白或如权利要求2所述的PYGL基因突变体作为靶点在制备试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂包括检测Hers病的引物组合、探针、抗体或质谱检测试剂中的一种或多种；

4.一种检测Hers病的扩增引物，其特征在于，所述扩增引物包括上游引物PYGL-F1、PYGL-F2和下游引物PYGL-R1、PYGL-R2；所述PYGL-F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物PYGL-R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述PYGL-F2的核苷酸序列如SEQID NO.3所示，所述下游引物PYGL-R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

5.一种检测Hers病的测序引物，其特征在于，所述测序引物包括所述测序引物包括上游引物PYGL-SeqF1、PYGL-SeqF2和下游引物PYGL-SeqR1、PYGL-SeqR2；所述上游引物PYGL-SeqF1的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述下游引物PYGL-SeqR1的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示；所述上游引物PYGL-SeqF2的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述下游引物PYGL-SeqR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

6.一种检测Hers病的引物组合，其特征在于，包括如权利要求4所述的扩增引物和/或如权利要求5所述的测序引物。

7.一种如权利要求6所述的引物组合在制备检测Hers病的试剂中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述Hers病的检测靶点包括PYGL基因突变体，

9.一种检测Hers病的试剂，其特征在于，所述试剂包括如权利要求6所述的引物组合。

10.一种如权利要求9所述的试剂在试剂盒及其制备中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括分子遗传学诊断和/或筛查试剂盒、产前基因诊断和/或筛查试剂盒、孕前基因诊断和/或筛查试剂盒、辅助防治Hers病试剂盒中的一种或多种。

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【技术特征摘要】

1.一种pygl突变体蛋白，其特征在于，所述pygl突变体蛋白相较于野生型pygl基因编码的蛋白，第427位氨基酸由精氨酸突变为终止密码，和/或，第649位氨基酸由酪氨酸突变为半胱氨酸。

2.一种编码如权利要求1所述的pygl突变体蛋白的pygl基因突变体，其特征在于，所述pygl基因相较于野生型pygl基因第11号外显子的第1279位碱基由碱基a突变为碱基t：

3.一种如权利要求1所述的pygl突变体蛋白或如权利要求2所述的pygl基因突变体作为靶点在制备试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂包括检测hers病的引物组合、探针、抗体或质谱检测试剂中的一种或多种；

4.一种检测hers病的扩增引物，其特征在于，所述扩增引物包括上游引物pygl-f1、pygl-f2和下游引物pygl-r1、pygl-r2；所述pygl-f1的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述下游引物pygl-r1的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述pygl-f2的核苷酸序列如seqid no.3所示，所述下游引物pygl-r2的核苷酸序列如seq id no.4所示。

5.一种检测hers病的测序引物，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭小军，曾桥，徐霞，薛雪冰，
申请(专利权)人：湖南家辉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：