形成补体结合增强的有序多聚化免疫球蛋白FC组合物的人类蛋白质片段融合蛋白质制造技术

本发明专利技术涉及一系列完全重组的多聚化形式的免疫球蛋白Fc，由其向免疫细胞受体呈递多价免疫球蛋白Fc。融合蛋白质以同型二聚和高度有序多聚级分两者的形式存在，所述高度有序多聚级分被称为斯特拉多体。本发明专利技术涉及增加多聚化并优先结合于补体并且适用于治疗和预防疾病的斯特拉多体。的斯特拉多体。

【技术实现步骤摘要】
形成补体结合增强的有序多聚化免疫球蛋白FC组合物的人类蛋白质片段融合蛋白质
[0001]本专利技术是申请日：2016年7月22日，申请号：201680042311.1，专利技术名称“形成补体结合增强的有序多聚化免疫球蛋白FC组合物的人类蛋白质片段融合蛋白质”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉参考
[0003]本申请要求2015年7月24日提交的美国临时申请第62/196,478号的优先权，其内容以全文引用的方式并入本文中。
[0004]用电子方式提交的文本文件的描述
[0005]用电子方式提交的文本文件的内容特此以全文引用的方式并入本文中：序列表的计算机可读格式拷贝(文件名：GLIK_015_01WO_SeqList_ST25.txt，记录日期：2016年7月22日，文件大小193千字节)。


[0006]本专利技术大体上涉及免疫学、自身免疫性、炎症和肿瘤免疫学的领域。更具体来说，本专利技术涉及展现Fc受体结合改变并保持或增强与补体系统元件的结合的包含免疫球蛋白Fc结构域的生物活性仿生分子、包含此类仿生物质的组合物以及制造和使用此类仿生物质的方法。本专利技术进一步涉及治疗或预防如以下的病理学病状：补体介导的疾病、自身免疫性疾病、发炎性疾病、血液病以及癌症。

技术介绍

[0007]补体系统是免疫系统中参与标靶细胞溶解和抗原吞噬作用的部分。存在三种目前已知的主要补体路径：经典路径、替代性路径和凝集素结合路径。一旦蛋白质C1q结合于一个或多个完整免疫球蛋白IgM分子或至少两个完整免疫球蛋白IgG1、IgG2或IgG3分子，激活经典补体路径(《詹韦氏免疫生物学(Janeway's Immunobiology)》,第8版,Murphy编,Garland Science,2012,第10章)。补体激活导致补体依赖性细胞毒性(complement
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dependent cytotoxicity；CDC)。已经展示单克隆抗体Fc区中的改变增强或降低补体结合亲和力(Moore等人,《MAbs》2(2):181
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9(2010)。然而，此工作在单克隆抗体的情形下进行，并且因此至少部分地依赖于Fab的标靶特异性并且不具有结合亲合力的情形。
[0008]过量的补体激活和/或沉积可能有害，并且与许多疾病相关联，包括重症肌无力、溶血性尿毒症综合征(hemolytic uremic syndrome；HUS)和阵发性夜间血红蛋白尿(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria；PNH)。大脑老化与显著增加的补体组分C1q水平相关联(Stephan等人,《神经科学杂志(J.Neuroscience)》,2013年8月14日,33(33):13460
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13474)。补体系统深度参与乙酰胆碱受体抗体相关重症肌无力的致病机制(和Christadoss,《自身免疫性评论(Autoimmun Rev.)》2013年7月；12(9):904
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11.doi:10.1016/j.autrev.2013.03.003)。来自免疫、遗传和蛋白质生化研究的多种发现指示补体系统在年龄相关性黄斑变性的病源学中起主要作用(Weber等人,《德国医学杂志国际版
(Dtsch Arztebl Int.)》,2014年2月；111(8):133
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138.doi:10.3238/arztebl.2014.0133)。存在关于以下的强有力证据：补体的经典和替代性路径都在类风湿性关节炎期间以及在类风湿性关节炎动物模型中得到病理学激活(Okroj等人,《医学年鉴(Ann Med.)》2007；39(7):517
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30)。
[0009]以依序方式激活经典、替代性和凝集素路径，并且所有三个路径都参与全身性疾病。补体系统的激活参与全身性自身免疫性疾病的致病机制。长期以来已经在免疫复合物介导的疾病(如冷球蛋白性脉管炎和全身性红斑狼疮)中认识到经由经典路径的激活(Chen等人,《自身免疫性杂志(Journal of Autoimmunity)》,2009；doi:10.1016/j.jaut.2009.11.014)。在患有亨诺
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许兰紫癜性肾炎(Henoch
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purpura nephritis)和IgA肾病变的患者中发现通过替代性和凝集素路径两者的补体激活(Hisano等人,《美国肾病杂志(Am JKidney Dis)》2005；45:295e302)。充分描述补体在膜性肾病变(成人肾病综合征最常见原因之一)中的重要性。膜性肾病变以肾小球上皮下免疫沉淀为特点。对膜性肾病变实验模型海曼肾炎(Heymann nephritis)的研究已经证实，这些沉积局部激活补体以造成足细胞损伤，最终引起细胞骨架重组、裂孔隔膜(slit diaphragms)损失和蛋白尿(Beck等人,补体在膜性肾病变中的作用(The Role of Complement in Membranous Nephropathy).《肾病学研讨会(Semin Nephrol)》2013Nov；33(6):531
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42)。
[0010]补体激活是非常复杂的过程，其中在最初认为理解所述过程之后数十年后仍发现新级联组分。经典路径补体级联中的第一步骤是C1q与抗体的结合。(《自然(Nature)》.1988年4月21日；332(6166):738
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40；IgG上C1q的结合位点(The binding site for C1q on IgG).Duncan AR,Winter G.)。
[0011]不认为非聚集抗体与C3或与C3b的结合在血浆中通过补体激活进行，但认为其主要由激活产物C3b2与IgG的复合物维持(《分子免疫学(Mol Immunol)》.2006年1月；43(1
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2):2
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12.补体扩增重新讨论(Complement amplification revisited).Lutz HU,Jelezarova E)。然而，在补体替代性路径由含有IgG抗体的免疫聚集物激活期间，C3b的α'
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链可以变为共价结合在IgG重链Fd部分中的一个或两个位点处(即，重链中包括于Fab片段中的所述部分)(《生物化学杂志(Biochem J.)》1981年5月1日；195(2):471
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480).在人类血清中激活替代性路径之后，补体组分C3与抗体
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抗原聚集物的结合(The binding of complement component C3 to antibody
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antigen aggregates after activation of the alternative pathway in human serum).K J Gadd和K B Reid)。补体组分C4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肽同型二聚体，其包含：(a)至少一个具有点突变的IgG1 Fc结构域，所述点突变对应于基于SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3的IgG1 Fc结构域的EU索引的位置S267E,H268F,N297A和S324T；和(b)至少一个多聚化结构域，其中所述肽同型二聚体保留与C1q的结合。2.根据权利要求1所述的肽同型二聚体，其中所述IgG1 Fc结构域包含IgG1的EEM或DEL多晶型物。3.根据权利要求1所述的肽同型二聚体，其中所述多聚化结构域选自下组：IgG2铰链、异亮氨酸拉链和GPP结构域，并且能够多聚化所述肽同型二聚体。4.根据权利要求1所述的肽同型二聚体，其中所述多聚化结构域形成所述肽同型二聚体的多聚体。5.根据权利要求4所述的肽同型二聚体，其中所述肽同型二聚体的多聚体是高阶多聚体。6.根据权利要求1所述的肽同型二聚体，其中所述肽同型二聚体相对于FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb和/或FcγRIII展现与补体的结合优先。7.根据权利要求1所述的肽同型二聚体，其中所述肽同型二聚体展现与低亲和力Fcγ受体的结合减少。8.根据权利要求1所述的肽同型二聚体，其中所述肽同型二聚体结合Clq，抑制CDC，并保持与FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb和/或FcγRIII的结合。9.根据权利要求1所述的肽同型二聚体，其中所述肽同型二聚体展现相对于不包含处于位置S267E,H268F,N297A,和/或S324T中一个或多个处的点突变的相同结构的同型二聚体，与FcγRI、FcγRII和/或FcγRIII的结合减少。10.根据权利要求1所述的肽同型二聚体，其中所述肽同型二聚体从氨端基到羧基端包含：前导序列；包含IgG1铰链、IgG1 CH2和IgG1 CH3的Fc结构域；以及IgG2铰链。11.根据权利要求10所述的肽同型二聚体，其中所述肽同型二聚体包含选自由SEQ ID NO：14和15组成的组的氨基酸序列。12.分子，其包含两个或更多个根据权利要求1至11中任一项所述的肽同型二聚体。13.根据权利要求1所述的肽同型二聚体，用于治疗或预防抗体介导的疾病、自身免疫性疾病、补体介导的疾病、发炎性疾病、过敏、血液免疫疾病、神经免疫疾病、风湿性疾病、皮肤免疫疾病、肌骨骼免疫疾病或胃肠免疫疾病的方法中使用。14.根据权利要求13使用的肽同型二聚体，其中(a)所述抗体介导的疾病选自由以下组成的群组：古德帕斯丘氏病(Goodpasture's disease)；实体器官移植排斥反应；视神经脊髓炎；神经性肌强直；边缘性脑炎；莫尔万氏综合征(Morvan's syndrome)；重症肌无力；兰伯特伊顿肌无力综合征(Lambert Eaton myasthenic syndrome)；刚人综合征；反复性自然流产；休斯综合征(Hughes syndrome)；全身性红斑狼疮；自身免疫性小脑共济失调；硬皮病、休格连氏综合征(Sjogren's syndrome)；多发性肌炎，包括抗Ro、抗La、抗Scl 70、抗Jo
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1；类风湿性关节炎；结节性多动脉炎；CREST综合征；心内膜炎；桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)；混合结缔组织疾病；离子通道病；与链球菌感染相关联的儿童自身免疫性神经精神病(PANDAS)；抗双链
DNA；抗单链DNA；抗RNA；抗SM；具有抗β细胞抗体的1型糖尿病；阿狄森氏病(Addison's disease)；格雷夫斯氏病(Graves'disease)；韦格纳氏肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)；丘
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施二氏综合征(Churg
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Strauss syndrome)；高雪氏病(Gaucher's disease)；强直性脊柱炎和其它脊椎关节病；和与针对N
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甲基
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D
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天冬氨酸酯受体尤其是NR1、接触蛋白相关蛋白质2、AMPAR、GluR1/GluR2、谷氨酸脱羧酶、GlyRα1a、乙酰胆碱受体、VGCC P/Q型、VGKC、MuSK、GABA(B)R、水通道蛋白
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4、烟碱型乙酰胆碱受体、磷脂、心磷脂、β2糖蛋白I、谷氨酸脱羧酶和NMDA的抗体相关联的临床病状；(b)所述自身免疫性疾病选自由以下组成的群组：身体的免疫系统错误攻击身体自身的所有疾病病状，其中身体的主要攻击系统包括结缔组织、神经、肌肉、内分泌系统、皮肤、血液、呼吸系统和胃肠系统；(c)所述补体介导的疾病选自由以下组成的群组：溶血性尿毒症综合征；非典型溶血性尿毒症综合征；阵发性夜间血红蛋白尿；视神经脊髓炎；抗体介导的同种异体移植排斥；肾病变疾病，包括膜性肾病变；以及肾炎疾病，包括膜增生性肾小球肾炎、狼疮肾炎；和黄斑变性；(d)所述发炎性疾病选自由以下组成的群组：肌肉萎缩性侧索硬化、心肌梗塞、中风、B型肝炎、C型肝炎、人类免疫缺陷病毒相关炎症、肾上腺脑白质营养不良、和癫痫病症，尤其被认为与病毒后脑炎相关联的那些癫痫病症，包括拉斯穆森综合征(Rasmussen Syndrome)、韦斯特综合征(West Syndrome)、伦
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加综合征(Lennox
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Gastaut Syndrome)、移植物抗宿主疾病；骨髓移植后排斥；感染后疾病炎症；II型糖尿病；沃格特
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小柳
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原田综合征(Vogt
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Koyanagi
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Harada Syndrome)；多毛细动脉炎(micropolyarteritis)；多系统器官衰竭；脊椎病；骨质流失；佩吉特氏病(Paget's disease)；废用性骨质减少；牙周病；朗格汉斯氏细胞组织细胞增多病(Langerhans'cell histiocytosis)；脊髓损伤；骨质软化；库欣氏综合征(Cushing's syndrome)；单骨性纤维性结构不良；多骨性纤维性结构不良；牙周重构；骨折；结节病；骨骼疼痛控制；子宫内膜异位症；涂布在假体关节或类似植入装置上；和与装置植入相关的炎症；(e)所述血液免疫疾病选自由以下组成的群组：镰形细胞疾病、特发性血小板减少性紫癜、同种免疫性/自身免疫性血小板减少症、获得性免疫性血小板减少症、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性血细胞减少症、细小病毒B19相关红细胞发育不全、获得性抗因子VIII自身免疫性、抗因子VIII自身免疫性疾病、获得性范维勒布兰德氏病(acquired von Willebrand disease)、意义不明的单克隆丙种球蛋白病、败血症、再生障碍性贫血、纯红细胞发育不全、戴
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布二氏贫血(Diamond
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Blackfan anemia)、初生儿溶血性疾病、免疫介导的嗜中性白细胞减少症、对血小板输注的不应性、输注后紫癜、血管炎、血栓性血小板减少性紫癜和埃文氏综合征(Evan's syndrome)；(f)所述神经免疫疾病选自由以下组成的群组：吉兰
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巴雷综合征(Guillain
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Barr
éꢀ
syndrome)、慢性发炎性脱髓鞘多神经根神经病、病变蛋白性IgM脱髓鞘多发性神经病、多灶性运动神经病变、与抗/GMl相关联的低运动神经元综合征、脱髓鞘、多发性硬化症和视神经炎、刚人综合征、具有抗Yo抗体的副肿瘤小脑退化症、副肿瘤脑脊髓炎、具有抗Hu抗体的感觉性神经病变、癫痫症、脑炎、脊髓炎、尤其与人类T细胞嗜淋巴细胞的病毒
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1相关联的脊髓病、自身免疫性糖尿病性神经病变、阿兹海默氏病、帕金森氏病、亨廷顿氏病、自身免疫性葡
萄膜炎、自身免疫相关视力丧失、自身免疫相关听力丧失、莱姆神经根神经炎和急性特发性自主神经病变；(g)所述风湿性疾病选自由以下组成的群组：川崎氏病、费尔蒂氏综合征、ANCA阳...

【专利技术属性】
技术研发人员：DS布洛克，H奥尔森，
申请(专利权)人：格利克尼克股份有限公司，
类型：发明
国别省市：