一种用于鉴别冬青品种的引物组合及其应用制造技术

本申请涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于鉴别冬青品种的引物组合及其应用方法。

【技术实现步骤摘要】
一种用于鉴别冬青品种的引物组合及其应用


[0001]本申请涉及生物
，尤其涉及一种用于鉴别冬青品种的引物组合及其应用。

技术介绍

[0002]冬青属（Ilex）植物为冬青科（Aquifoliaceae）常绿或落叶乔木或灌木，叶色青翠，树姿优美，花朵芳香，果实红艳，材质优良，生长迅速，适应性较强，不少树种根、枝、叶及树皮可入药，具有很高的观赏、用材和药用价值。此外，冬青属植物主要观赏期在秋冬季节，能够极大程度地弥补冬季园林景观单调萧条的缺陷，其红色果实还能吸引鸟类栖息和取食，增加生物多样性，提高生态系统稳定性。
[0003]优良的冬青品种苗，不仅生长速度快，而且果量大、果色鲜红艳丽。随着人们对生活环境的更好要求，越来越多的冬青品种广泛地应用于道路、公园、庭院、校园等园林绿化、美化中。优良的冬青品种主要通过扦插的方式进行繁殖，在高涨的市场需求下，工厂化大规模冬青扦插繁育成为常态。然而在冬青苗木生产过程中，常常会遇到品种混杂，而且难以通过外观辨别等问题，最终导致难以保障出圃苗木质量。
[0004]叶绿体因其基因组结构保守，遗传性变异小等特点，越来越广泛地应用在系统发育分析、物种界定、纯度鉴定等方面。本申请以市场上常见的6个冬青品种：
‘
高挑
’
、
‘
贝绿
’
、普通冬青、
‘
爱美丽
’
、
‘
Wirt L. Winn
’
和代茶冬青的叶绿体基因组中多态性位点为标记，设计鉴定引物；旨在为这6个常见冬青品种提供高效、精准的方法，解决生产和销售过程中的质检问题。

技术实现思路

[0005]本申请提供了一种用于鉴别冬青品种的引物组合及其应用，以解决目前没有快速、准确鉴别冬青的品种的技术问题。
[0006]本申请提供了用于鉴别冬青品种的引物组合，所述引物组合包括引物组P1，所述引物组P1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示。
[0007]可选的，所述引物组合还包括引物组P2，所述引物组P2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3
‑
4所示。
[0008]可选的，所述引物组合还包括引物组P3，所述引物组P3的核苷酸序列如SEQ ID NO.5
‑
6所示。
[0009]可选的，所述引物组合还包括引物组P4，所述引物组P4的核苷酸序列如SEQ ID NO.7
‑
8所示。
[0010]可选的，所述引物组合还包括引物组P5，所述引物组P5的核苷酸序列如SEQ ID NO.9
‑
10所示。
[0011]可选的，所述引物组合还包括引物组P6，所述引物组P6的核苷酸序列如SEQ ID NO.11
‑
12所示。
[0012]可选的，所述引物组合还包括引物组P7，所述引物组P7的核苷酸序列如SEQ ID NO.13
‑
14所示。
[0013]本申请提供了所述的引物组合在检测冬青品种方法中的应用。
[0014]本申请提供了检测冬青品种的方法，所述方法包括使用所述的引物组合，并通过对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳后的条带进行判断。
[0015]可选的，扩增反应中，引物组合的浓度为5
‑
10μM，模板的浓度为0.5
‑
1μg/μL。
[0016]可选的，所述扩增反应包括变性、退火和引物延伸；所述变性的温度为98℃；所述退火的温度为54
‑
62℃；所述引物延伸的温度为72℃。
[0017]可选的，所述PCR扩增产物使用2%琼脂糖凝胶电泳检测，120V电压，电泳时间25
‑
30min。
[0018]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：本申请建立了适用于检测6个冬青品种的引物组合及检测方法，利用这组特异性引物鉴定区分冬青品种时，可以快速、准确的鉴定出结果；所用方法为常规的PCR反应，成功率高；结果以琼脂糖凝胶电泳图的形式呈现，操作方法简单，且成本低廉。
附图说明
[0019]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，展示出了符合本专利技术的实施例，并与说明书一起用于解释本专利技术的原理。
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为本申请实施例2提供的电泳图；图2为本申请实施例3
‑
8提供的电泳图；其中，1代表
‘
高挑
’
、2代表
‘
贝绿
’
、3代表普通冬青、4代表
‘
爱美丽
’
、5代表
‘
Wirt L. Winn
’
和6代表代茶冬青。
具体实施方式
[0022]为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0023]根据本专利技术一种典型的实施方式，提供了一种用于检测冬青品种的引物组合，所述引物组合包括引物组P1，所述引物组P1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示。
[0024]引物组P1根据冬青叶绿体基因组的保守位点设计，通过使用正向引物SEQ ID NO.1和反向引物SEQ ID NO.2；所有待测冬青品种均可扩增出条带，从而提示试验前期准备是否完备，包括：DNA提取是否成功，PCR工作液是否正常工作等。
[0025]引物组P2，所述引物组P2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3
‑
4所示，引物组P2可以有效地从6个品种中鉴别出
‘
高挑
’
冬青品种。
[0026]引物组P3，所述引物组P3的核苷酸序列如SEQ ID NO.5
‑
6所示，引物组P3可以有效
地从6个品种中鉴别出普通冬青品种。
[0027]引物组P4，所述引物组P4的核苷酸序列如SEQ ID NO.7
‑
8所示，引物组P4可以有效地从6个品种中鉴别出
‘
爱美丽
’
冬青品种。
[0028]引物组P7，所述引物组P7的核苷酸序列如SEQ ID NO.13
‑
14所示，引物组P7可以有效地从6个品种中鉴别出代茶冬青品种。
[0029]引物组P本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测冬青品种的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括引物组P1，所述引物组P1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示。2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于，所述引物组合还包括引物组P2，所述引物组P2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3
‑
4所示。3.根据权利要求2所述的引物组合，其特征在于，所述引物组合还包括引物组P3，所述引物组P3的核苷酸序列如SEQ ID NO.5
‑
6所示。4.根据权利要求3所述的引物组合，其特征在于，所述引物组合还包括引物组P4，所述引物组P4的核苷酸序列如SEQ ID NO.7
‑
8所示。5.根据权利要求4所述的引物组合，其特征在于，所述引物组合还包括引物组P5，所述引物组P5的核苷酸序列如SEQ ID NO.9
‑
10所示。6.根据权利要求5所述的引物组合，其特征在于，所述引...

【专利技术属性】
技术研发人员：张凡，种昕冉，陈红，周艳威，周婷，李云龙，王传永，陆小清，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：