一种新型的间充质干细胞无血清培养基及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种新型的间充质干细胞无血清培养基，由基础培养液和添加成分构成，DMEM/F12培养液为基础，添加成分包括人转铁蛋白、重组人胰岛素、纤连蛋白、血小板衍生生长因子PDGF

【技术实现步骤摘要】
一种新型的间充质干细胞无血清培养基及其制备方法


[0001]本专利技术涉及培养基
，尤其涉及一种新型的间充质干细胞无血清培养基及其制备方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一类来源于中胚层的多能干细胞，具有高度的自我更新能力和多向分化潜能。间充质干细胞广泛存在于各种人体组织中，可在体外培养。在特定条件下，MSCs可分化为成骨细胞、神经细胞、上皮细胞、脂肪细胞、肌肉细胞和心肌细胞，具有促进血管形成、保护神经和细胞替代治疗作用，还能抑制免疫，缓解炎症，抵抗纤维化。因此，这些细胞在组织工程修复和细胞替代治疗中具有潜在的临床应用前景。
[0003]目前，MSCs的体外扩增培养一直是个难题。间充质干细胞的体外培养使用的培养基不可避免的需要添加一定浓度的血清。但是血清培养基中由于含动物来源血清成分，容易引起外源性污染，细胞形态变异等，且存在引起排斥反应的潜在安全隐患，而且含血清培养基培养不同批次细胞的批间差异较大，增加了生产质量控制的难度。因此，发展无血清培养基是干细胞走向临床应用的必然趋势。

技术实现思路

[0004]本申请的目的在于提供一种新型的间充质干细胞无血清培养基，旨在一定程度上解决现有间充质干细胞培养基主要采用含血清的培养基的问题。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是：本专利技术提供了一种新型的间充质干细胞无血清培养基，包括包括基础培养液和添加成分，该培养基以DMEM/F12培养液为基础，添加成分包括人转铁蛋白、重组人胰岛素、纤连蛋白、PDGF
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BB、bFGF、TGF
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β1、黄芪、当归和黄连素。
[0006]进一步地说，人转铁蛋白的浓度为10
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20μg/mL，重组人胰岛素的浓度为15
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25μg/mL，纤连蛋白的浓度为60
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80μg/mL，PDGF
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BB的浓度为5
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15ng/mL、bFGF的浓度为10
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30ng/mL、TGF
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β1的浓度为3
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7ng/mL、黄芪的浓度为5
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80mg/mL、当归的浓度为1
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100mg/mL和黄连素的浓度为25
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300nM。
[0007]nM代表的单位是nmol/l，读作：纳摩尔每升。
[0008]进一步地说，人转铁蛋白的浓度为10
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20μg/mL，重组人胰岛素的浓度为15
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25μg/mL，纤连蛋白的浓度为60
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80μg/mL，PDGF
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BB的浓度为5
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15ng/mL、bFGF的浓度为10
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30ng/mL、TGF
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β1的浓度为3
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7ng/mL、黄芪的浓度10mg/mL、当归的浓度5mg/mL和黄连素的浓度50nM。
[0009]进一步地说，所述人转铁蛋白的浓度为15μg/mL，所述重组人胰岛素的浓度为20μg/mL，所述纤连蛋白的浓度为70μg/mL，所述PDGF
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BB的浓度为10μg/L，所述bFGF的浓度为20ng/mL，所述TGF
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β1的浓度为5ng/mL，黄芪的浓度10mg/mL、当归的浓度5mg/mL和黄连素的
浓度50nM。
[0010]本专利技术还提供了一种所述的新型的间充质干细胞无血清培养基的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
[0011](1)将所有添加成分的原料混合，得到浓缩液；
[0012](2)将步骤(1)所述浓缩液加入至DMEM/F12的基础培养基内，均匀搅拌，得到预培养基原料；
[0013](3)将步骤(2)所述预培养基原料经滤膜过滤除菌，即得到一种新型的间充质干细胞无血清培养基。
[0014]进一步地说，所述基础培养基DMEM/F12的产品型号为L340KJ。
[0015]进一步地说，所述无血清培养基为用于体外培养间充质干细胞的培养基，其pH值为7.2
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7.4，渗透压为260
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320mosm，且内毒素为0
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0.5EU/mL。
[0016]优选的，步骤(1)中，所述浓缩液于
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20℃条件下保存待用。
[0017]优选的，步骤(2)中，所述DMEM/F12培养基保存温度为0
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8℃。
[0018]优选的，步骤(3)中，所述预培养基原料，采用0.22μm针头式过滤头过滤。
[0019]本申请第一方面：提供的间充质干细胞的无血清培养基，不含血清，且添加了黄芪、当归和黄连素等中药药材，无异源性污染，不存在引起排斥反应的潜在安全隐患，培养基性能稳定，质量可靠，符合临床应用的安全性要求。其中，DMEM/F12基础培养基通过与人转铁蛋白配合，为间充质干细胞提供足够的营养物质，促进细胞生长。重组人胰岛素和PDGF
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BB能够促进间充质干细胞的分裂和增殖能力。纤连蛋白能够介导间充质干细胞贴壁、增殖和运动迁移。bFGF、TGF
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β1、纤连蛋白、黄芪和当归能够相互协同作用于各种组织对调节间充质干细胞细胞生长、增殖和分化起着重要作用。而黄连素具有杀菌、抑菌、抗氧化等作用，能提高无血清培养基的抗病原微生物作用，提高间充质干细胞的存活率。
[0020]本申请第二方：提供的间充质干细胞的无血清培养基的制备方法，分别获取人转铁蛋白、重组人胰岛素、纤连蛋白、PDGF
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BB、bFGF、TGF
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β1、黄芪、当归和黄连素等添加成分后，与DMEM/F12基础培养基进行混合处理，便可得到间充质干细胞的无血清培养基。制备工艺简单，效率高，适用于商业化大规模生成和应用。且制备的间充质干细胞的无血清培养基，通过DMEM/F12基础培养基、人转铁蛋白、重组人胰岛素、纤连蛋白、PDGF
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BB、bFGF、TGF
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β1、黄芪、当归和黄连素等各组分的协同配合作用，对调节间充质干细胞细胞生长、增殖和分化起着重要作用，从而提高间充质干细胞体外扩增能力。
[0021]本申请第三方面提供的无血清培养基在间充质干细胞培养中的应用，该无血清培养基同时包含有DMEM/F12基础培养基和人转铁蛋白、重组人胰岛素、纤连蛋白、PDGF
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BB、bFGF、TGF
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β1、黄芪、当归和黄连素等添加成分，通过各组分的协同配合作用，对调节间充质干细胞细胞生长、增殖和分化起着重要作用，从而提高间充质干细胞体外扩增能力。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0023](1)本专利技术培养基不含血清，且添加了黄芪本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于：包括基础培养液和添加成分，该培养基以DMEM/F12培养液为基础，添加成分包括人转铁蛋白、重组人胰岛素、纤连蛋白、PDGF
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BB、bFGF、TGF
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β1、黄芪、当归和黄连素。2.根据权利要求1所述的新型的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于：人转铁蛋白的浓度为10
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20μg/mL，重组人胰岛素的浓度为15
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25μg/mL，纤连蛋白的浓度为60
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80μg/mL，PDGF
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BB的浓度为5
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15ng/mL、bFGF的浓度为10
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30ng/mL、TGF
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β1的浓度为3
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7ng/mL、黄芪的浓度为5
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80mg/mL、当归的浓度为1
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100mg/mL和黄连素的浓度为25
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300nM。3.根据权利要求2所述的新型的间充质干细胞无血清培养基，其特征在于：人转铁蛋白的浓度为10
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20μg/mL，重组人胰岛素的浓度为15
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25μg/mL，纤连蛋白的浓度为60
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80μg/mL，PDGF
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BB的浓度为5
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15ng/mL、bFGF的浓度为10
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30ng/mL、TGF
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β1的浓度为3
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7ng/mL、黄芪的浓度10mg/mL、当归的浓度5mg/mL和黄连素的浓度50nM。4.根据权利要求3所述的新型的间充质干细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：哈玉杰，张军东，刘璐，李玉柱，唐秋洁，李智慧，汤晓涵，吕慧娟，
申请(专利权)人：上海利康瑞生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：