胎盘干细胞高效提取试剂盒制造技术

本发明专利技术属于干细胞技术领域，涉及胎盘干细胞高效提取试剂盒。本试剂盒包括胎盘保存液、胎盘洗涤液Ⅰ、胎盘洗涤液Ⅱ、组织分解液Ⅰ、组织分解液Ⅱ、消化终止液、细胞分离液、细胞冻存液。利用本发明专利技术的试剂盒可在较短时间内提取获得大量胎盘干细胞，使用方便。使用方便。

【技术实现步骤摘要】
胎盘干细胞高效提取试剂盒


[0001]本专利技术属于干细胞
，涉及胎盘干细胞高效提取试剂盒。

技术介绍

[0002]胎盘干细胞指的是存在于胎盘组织中的一类混合干细胞，包括造血干细胞、间充质干细胞等多种干细胞。
[0003]胎盘造血干细胞为造血干细胞移植提供了新的来源。造血干细胞是红细胞、白细胞、血小板等的鼻祖，是高度未分化的细胞，是一切血细胞和免疫细胞的原始细胞。造血干细胞移植可治疗恶性血液病，部分恶性肿瘤，部分遗传性疾病等十几种致死性疾病。胎盘中造血干细胞数量丰富，是脐带血的5
‑
10倍，突破了脐带血来源造血干细胞30kg体重使用的瓶颈，可以提供自体干细胞足够的数量重建成年人的造血系统。
[0004]胎盘造血干细胞目前已经在临床上广泛开展应用研究，治疗相关的疾病包括：重型再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征、白血病等恶性或非恶性血液疾病，还有二型糖尿病、特发性肺纤维化、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎等非血液系统疾病。
[0005]胎盘间充质干细胞也为间充质干细胞提供了新的来源。间充质干细胞是一种具有多向分化潜能的干细胞，在胚胎发育中来源于中胚层，具有分化为多种中胚层细胞系的潜能，包括成骨细胞，脂肪细胞，软骨细胞，神经细胞，肝脏细胞，表皮细胞等。间充质干细胞来源广泛且没有伦理限制，易于分离和体外扩增，在经过多次分裂传代后仍保持多向分化潜能，至今为止的临床试验研究未发现间充质干细胞有严重副作用，是一种非常理想的细胞治疗和再生医学的种子细胞。胎盘间充质干细胞还具有以下优势：一是具有低免疫原性以及免疫抑制作用，这就使得治疗用的间充质干细胞不仅可以来源于自体，也可以来源于异体；二是具有强大的免疫调节作用，使得移植的间充质干细胞在修复受损组织的同时，还可以调节患者的免疫状态；三是具有向特定细胞定向分化的特性，避免了胚胎干细胞等全能干细胞致瘤性风险。
[0006]近些年间充质干细胞被大量应用于实验和临床研究中，已有大量研究揭示了它在心血管、神经系统、运动系统、消化系统、自身免疫病、血液系统、泌尿系统、眼科、骨科等系统疾病的诊断和治疗上的应用价值。
[0007]综上，胎盘干细胞具有广阔的临床应用前景。因此，开发简单、快速、高效、安全获得大量胎盘干细胞方法成为当务之急，而目前现有技术中还未有用于提取胎盘干细胞的试剂盒，使得相关科研工作进展缓慢。

技术实现思路

[0008]本专利技术目的是为了弥补现有技术中存在的不足，提供一种使用方便，成本低廉的用于提取获得大量胎盘干细胞的试剂盒。
[0009]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：胎盘干细胞高效提取试剂盒，包括胎盘保存液、胎盘洗涤液Ⅰ、胎盘洗涤液Ⅱ、组织分解液Ⅰ、组织分解液Ⅱ、消化终止液、细胞分
离液、细胞冻存液。
[0010]所述试剂盒内各组分的量是：胎盘保存液1瓶（500ml/瓶）；胎盘洗涤液
Ⅰꢀ
2瓶（500ml/瓶）；胎盘洗涤液
Ⅱꢀ
2瓶（500ml/瓶）；组织分解液
Ⅰꢀ
1瓶（500ml/瓶）；组织分解液
Ⅱꢀ
1瓶（300ml/瓶）；消化终止液1瓶（20ml/瓶）；细胞分离液1瓶（100ml/瓶）；细胞冻存液1瓶（50ml/瓶）。
[0011]所述胎盘保存液为含青霉素100
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200ug/ml、链霉素100
‑
200ug/ml、两性霉素2.5
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5μg/ml、肝素钠注射液0.5
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1.5mg/ml、人血白蛋白5
‑
10mg/ml、盐酸巴马汀2
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4ng/ml、磷酸氯喹2
‑
4ng/ml、羟基红花黄色素A 2
‑
4ng/ml、麦冬皂苷D 5
‑
10ng/ml、决明子苷C 5
‑
10ng/ml的DMEM、DMEM/F12、MEM或RPMI
‑
1640培养基。
[0012]所述胎盘洗涤液Ⅰ为含青霉素100
‑
200ug/ml、链霉素100
‑
200ug/ml、两性霉素2.5
‑
5μg/ml、肝素钠注射液0.5
‑
1.5mg/ml、盐酸巴马汀2
‑
4ng/ml、磷酸氯喹2
‑
4ng/ml、羟基红花黄色素A 2
‑
4ng/ml、麦冬皂苷D 5
‑
10ng/ml、决明子苷C 5
‑
10ng/ml的生理盐水、PBS、D
‑
Hanks或HBSS。
[0013]所述胎盘洗涤液Ⅱ为含青霉素100
‑
200ug/ml、链霉素100
‑
200ug/ml、两性霉素2.5
‑
5μg/ml、肝素钠注射液0.5
‑
1.5mg/ml、人血白蛋白5
‑
10mg/ml、盐酸巴马汀2
‑
4ng/ml、磷酸氯喹2
‑
4ng/ml、羟基红花黄色素A 2
‑
4ng/ml、麦冬皂苷D 5
‑
10ng/ml、决明子苷C 5
‑
10ng/ml的生理盐水、PBS、D
‑
Hanks或HBSS。
[0014]所述组织分解液Ⅰ为含Ⅳ型胶原酶0.5
‑
2.5mg/ml、盐酸巴马汀2
‑
4ng/ml、磷酸氯喹2
‑
4ng/ml、羟基红花黄色素A 2
‑
4ng/ml、麦冬皂苷D 5
‑
10ng/ml、决明子苷C 5
‑
10ng/ml的DMEM、DMEM/F12、MEM或RPMI
‑
1640培养基。
[0015]所述组织分解液Ⅱ为含胰蛋白酶0.5
‑
2.5mg/ml、盐酸巴马汀2
‑
4ng/ml、磷酸氯喹2
‑
4ng/ml、羟基红花黄色素A 2
‑
4ng/ml、麦冬皂苷D 5
‑
10ng/ml、决明子苷C 5
‑
10ng/ml的DMEM、DMEM/F12、MEM或RPMI
‑
1640培养基。
[0016]所述消化终止液为0.2g/ml的人血白蛋白。
[0017]所述细胞分离液为60mg/ml的羟乙基淀粉。
[0018]所述细胞冻存液为含麦冬皂苷D 5
‑
10ng/ml、决明子苷C 5
‑
10ng/ml、DMSO 100
‑
200mg/ml的KnockoutTM SR、Keratinocyte
‑
SFM培养基、TheraPEAK
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MSCGM...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.胎盘干细胞高效提取试剂盒，其特征是，包括胎盘保存液、胎盘洗涤液Ⅰ、胎盘洗涤液Ⅱ、组织分解液Ⅰ、组织分解液Ⅱ、消化终止液、细胞分离液、细胞冻存液。2.根据权力要求1所述的胎盘干细胞高效提取试剂盒，其特征是，所述试剂盒内各组分的量是：胎盘保存液1瓶（500ml/瓶）；胎盘洗涤液
Ⅰꢀ
2瓶（500ml/瓶）；胎盘洗涤液
Ⅱꢀ
2瓶（500ml/瓶）；组织分解液
Ⅰꢀ
1瓶（500ml/瓶）；组织分解液
Ⅱꢀ
1瓶（300ml/瓶）；消化终止液1瓶（20ml/瓶）；细胞分离液1瓶（100ml/瓶）；细胞冻存液1瓶（50ml/瓶）。3.根据权力要求1或2所述的胎盘干细胞高效提取试剂盒，其特征是，所述胎盘保存液为含青霉素100
‑
200ug/ml、链霉素100
‑
200ug/ml、两性霉素2.5
‑
5μg/ml、肝素钠注射液0.5
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1.5mg/ml、人血白蛋白5
‑
10mg/ml、盐酸巴马汀2
‑
4ng/ml、磷酸氯喹2
‑
4ng/ml、羟基红花黄色素A 2
‑
4ng/ml、麦冬皂苷D 5
‑
10ng/ml、决明子苷C 5
‑
10ng/ml的DMEM、DMEM/F12、MEM或RPMI
‑
1640培养基。4.根据权力要求1或2所述的胎盘干细胞高效提取试剂盒，其特征是，所述胎盘洗涤液Ⅰ为含青霉素100
‑
200ug/ml、链霉素100
‑
200ug/ml、两性霉素2.5
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5μg/ml、肝素钠注射液0.5
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1.5mg/ml、盐酸巴马汀2
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4ng/ml、磷酸氯喹2
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4ng/ml、羟基红花黄色素A 2
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4ng/ml、麦冬皂苷D 5
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10ng/ml、决明子苷C 5
‑
10ng/ml的生理盐水、PBS、D
‑
Hanks或HBSS。5.根据权力要求1或2所述的胎盘干细胞高效提取试剂盒，其特征是，所述胎盘洗涤液Ⅱ为含青霉素100
‑
200ug/ml、链霉素100
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200ug/ml、两性霉素2.5
‑
5μg/ml、肝素...

【专利技术属性】
技术研发人员：张炳强，陈梦梦，谢中玉，付华丽，王福斌，孙新茹，刘翠娟，
申请(专利权)人：青岛瑞思德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：