一种脂肪干细胞制备方法技术

本发明专利技术公开了一种脂肪干细胞制备方法，属于干细胞制备方法技术领域，将50ml脂肪组织样本采集至采集瓶内，并喷洒酒精放入生物安全柜静置5min以上，准备相应的离心管若干5

【技术实现步骤摘要】
一种脂肪干细胞制备方法


[0001]本专利技术涉及一种干细胞制备方法，特别是涉及一种脂肪干细胞制备方法，属于干细胞制备方法


技术介绍

[0002]在再生医学中，成体干细胞是基于细胞疗法的最有希望的细胞类型，作为多能干细胞的新来源，人类脂肪组织已被引入，这些所谓的脂肪干细胞(ADSC)被认为是再生疗法应用的理想选择，与源自其他来源(例如骨髓)的间充质干细胞相比，它们的主要优势在于它们可以使用微创技术轻松且可重复地获取，并且发病率低。
[0003]ADSC是多能的并且可以分化成三胚系的各种细胞类型，包括例如骨细胞、脂肪细胞、神经细胞、血管内皮细胞、心肌细胞、胰腺β细胞和肝细胞，ADSCs的特点是免疫抑制特性和低免疫原性。它们分泌的营养因子在广泛的应用中加强了治疗和再生的结果。因此，ADSCs的治疗潜力是巨大的。
[0004]骨髓来源的MSC不适合临床使用，为了在21世纪初寻找替代干细胞来源，Zuk等人，介绍了一种多能、未分化、自我更新的祖细胞群，该祖细胞群从脂肪组织中分离出来，在形态和表型上与MSC相似，这些所谓脂肪组织衍本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂肪干细胞制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一：将50ml脂肪组织样本采集至采集瓶内，并喷洒酒精放入生物安全柜静置5min以上；准备相应的离心管若干5
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10个，每个离心管中加入生理盐水20ml，备用；步骤二：用25ml移液管吸取静置后分层的采集瓶中的脂肪样本中下层液体弃掉，再用25ml移液管吸取脂肪组织，每个离心管中加入等体积的脂肪组织每管加20
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25ml，盖好盖子，上下颠倒几次，摇匀；其中上层是油脂层，中层是脂肪组织层，下层是肿胀液层；步骤三：将上述处理分离完成的脂肪组织配平离心；其中配平采用电子天平配平，且离心旋转为1500rpm,离心5min；步骤四：将步骤三中的脂肪组织进行离心处理,离心后分上中下三层，上层的油脂和下层的清洗液吸出弃掉，再用25ml移液管吸取脂肪组织至干净的离心管中，每管加入等量脂肪组织，避开白色筋膜组织；步骤五：将加有脂肪组织的离心管里加入等体积的生理盐水总量不超过45ml，盖好盖子，上下颠倒几次摇匀，同上述操作进行第二次离心；步骤六：离心完后，同样是吸出脂肪油脂和下层清洗液，避开白色筋膜组织将脂肪组织用25ml移液管吸出到干净的离心管中；步骤七：将清洗的脂肪组织放入50mL离心管中，用弯尖头精细剪剪碎组织，约剪300次，，剪碎后组织1mL重0.8g，脂肪组织量为15
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25ml，加入生理盐水至总体积为40mL，混匀；步骤八：30mg胶原酶I溶解于10mlPBS溶液，0.22um过滤除菌后2倍稀释，获得浓度为1mg/ml的胶原酶I；步骤九：将洗涤后的脂肪加入1mg/ml的胶原酶I比例为1：1，置于恒温振荡培养床内，37℃，130rpm条件下消化40分钟；步骤十：消化完成后1300rpm离心10分钟，去上清，底部沉淀为脂肪干细胞，PBS重悬洗涤离心2次；重复上述步骤十操作，离心后将下清液转移至50mL离心管，并取1.5～2.0mL加入冻存管用于留样。2.根据权利要求1所述的一种脂肪干细胞制备方法，其特征在于：在步骤七中剪碎后组织1mL重0.8g。3.根据权利要求2所述的一种脂肪干细胞制备方法，其特征在于：在步骤九后消化完后1300rpm离心10分钟，去上清，底部沉淀为脂肪干细胞，PBS重悬洗涤离心2次，根据洗涤后获的脂肪组织，1ml脂肪组织接种一个T175细胞培养瓶进行接种培养，且每...

【专利技术属性】
技术研发人员：季子云，李杰，刘畅，贺燕玲，贺激光，
申请(专利权)人：杭州凤喆凰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：