一种适用于工业化水平的外泌体纯化方法和质量控制方法技术

本发明专利技术属于外泌体纯化和表征技术领域，具体涉及一种适用于工业化水平的外泌体纯化方法和质量控制方法。本发明专利技术建立了一个结合TFF和整体强阴离子交换色谱的外泌体纯化过程，选用核酸酶去除染色质污染，旨在为工业水平大规模制备可用于临床的天然外泌体或工程化外泌体纯化提供一个可选择的参考。同时，本发明专利技术还建立了一个结合NTA，WB，TEM，ExoView和FFF

【技术实现步骤摘要】
一种适用于工业化水平的外泌体纯化方法和质量控制方法


[0001]本专利技术属于外泌体纯化和表征
，具体涉及一种适用于工业化水平的外泌体纯化方法和质量控制方法。

技术介绍

[0002]外泌体是生物制药行业治疗领域内迅速增长的一个方向，外泌体来源细胞包括间充质干细胞，这是外泌体在再生医学领域特别受到关注的原因。最近的研究记录了间充质干细胞外泌体逆转严重中风影响的能力，强调了它们的治疗潜力。同时也强调了需要可扩展的纯化技术来推动这些产品通过临床试验并获得许可生产。
[0003]外泌体的最终目的是作为生物制剂应用于临床，因此必须符合现有生物制剂安全性标准，宿主蛋白质、DNA、病毒和内毒素必须减少到安全水平。同时外泌体产品必须保持活性和可进行浓缩以保持剂量可控。工业化外泌体纯化必须考虑选用工艺的可放大性，以及对外泌体结构和生物学完整性的保护，减少外泌体的聚集，非外泌体颗粒及其他蛋白污染，提高外泌体产量和纯度，同时，这个过程必须是经济的和可扩展的，但是目前并没有可供工业化大规模生产并纯化外泌体的方案，且缺乏统一的质量控制体系。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适用于工业化水平的外泌体纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对外泌体供体细胞的上清液通过双层玻璃纤维过滤器，得外泌体澄清液；(2)将步骤(1)得到的所述外泌体澄清液通过聚醚砜液体过滤器，得无菌澄清液；(3)将步骤(2)得到的所述无菌澄清液过纤维素基膜进行切向流过滤，得切向流过滤液；(4)将步骤(3)得到的所述切向流过滤液经中空纤维切向流过滤后结合核酸酶孵育，得无染色质外泌体液；(5)将步骤(4)得到的所述无染色质外泌体液经整体强阴离子交换色谱柱，收集纯化峰，得纯化的外泌体。2.根据权利要求1所述外泌体纯化方法，其特征在于，步骤(1)中使用SartoriusGF预过滤器对收集的外泌体供体细胞的上清液进行恒流过滤；所述SartoriusGF的滤径为0.65μm。3.根据权利要求1所述外泌体纯化方法，其特征在于，步骤(2)中使用Sartorius2XLG过滤器对外泌体澄清液进行除菌过滤；Sartorius2XLG过滤器的孔径为0.8/0.2μm。4.根据权利要求1所述外泌体纯化方法，其特征在于，步骤(3)中使用Sartorius300kDa 0.1m2超滤膜包对所述无菌澄清液进行切向流过滤。5.根据权利要求1所述外泌体纯化方法，其特征在于，步骤(4)中使用Sartorius Single
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use hollow fiberTFF，将核酸酶Kryptonase和切向流过滤液进行溶液短循环后孵育1h；所述Sartorius Sin...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷欣华，金倞，梁磊，高雷，
申请(专利权)人：北京吉中科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：