一种脐带间充质干细胞提取冻干粉及制备方法技术

本发明专利技术提供了一种脐带间充质干细胞提取冻干粉及制备方法。采用本发明专利技术的细胞冻存液制备的脐带间充质干细胞冻干粉的水化复苏率可达到96.5％，并且本发明专利技术的细胞冻存液之间也存在协同增效的技术效果，尤其是联合海藻糖、脱脂乳和葡聚糖的组合。采用本发明专利技术的细胞冻存液制备的脐带间充质干细胞冻干粉能有效促进人皮肤成纤维细胞在的增殖，有利于皮肤创面愈合，在组织修复和再生领域具有广阔的应用前景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种脐带间充质干细胞提取冻干粉及制备方法


[0001]本专利技术涉及冻干粉技术加工领域，更具体地，涉及一种脐带间充质干细胞提取冻干粉及制备方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一类具有显著的自我更新和多向分化的细胞，其来源丰富，主要存在于骨髓、脐血、脐带、全身结缔组织和器官间质，脐带作为一种MSCs的来源有着无法比拟的优势，其与骨髓来源的MSCs比较亦有较明显的优势，如取材容易、来源广、易收集、保存、冷冻及相对纯净等。
[0003]成纤维细胞是皮肤真皮组织中的主要细胞类型，可以分泌胶原、弹性蛋白、纤维粘连蛋白等细胞基质成分，对维持皮肤健康至关重要。随着年龄增长，组织中成纤维细胞胶原合成量减少、胶原类型和含量比例改变、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)水平增加、弹性蛋白和纤维粘连蛋白等含量降低或出现结构性异常交联，是皮肤衰老、皱纹产生的重要原因。多项研究指出，MSCs能够向创伤皮肤组织及炎症部位归巢迁移，促进皮肤组织再生、创面修复、减少瘢痕形成，在缓解皮肤炎症、改善纤维化、治疗系统性硬皮病、减轻皮肤放射性损伤等方面均具有很好的效果。
[0004]为了使得脐带间充质干细胞便于保存和使用，现有技术是将脐带间充质干细胞制成冻干粉。但是传统的冻干技术容易损伤细胞因子的活性，如果冻干不彻底，脐带间充质干细胞冻干粉极易在保存过程中失去活性，其水化复苏率相对较低，不利于后续的临床施用。

技术实现思路
r/>[0005]针对现有技术所存在的技术问题，本专利技术提供了一种脐带间充质干细胞提取冻干粉及制备方法。采用本专利技术的细胞冻存液制备的脐带间充质干细胞冻干粉的水化复苏率可达到96.5％，并且本专利技术的细胞冻存液之间也存在协同增效的技术效果，尤其是联合海藻糖、脱脂乳和葡聚糖的组合。采用本专利技术的细胞冻存液制备的脐带间充质干细胞冻干粉能有效促进人皮肤成纤维细胞在的增殖，有利于皮肤创面愈合，在组织修复和再生领域具有广阔的应用前景。
[0006]本专利技术的目的之一是一种脐带间充质干细胞冻干粉的制备方法，具体操作如下：
[0007]1)、将脐带间充质原代干细胞接种至DMEM/F12培养基中，在低氧条件下进行传代培养，待原代干细胞融合至90％时，采用1
×
PBS清洗细胞，胰蛋白酶消化，完全培养基终止，4℃1000
×
g离心5min后重悬细胞，按照1:1传代，即可获得第1代脐带间充质原代干细胞；后续逐次传代，并收集第10代的细胞；
[0008]2)将第10代细胞采用1
×
PBS清洗细胞，胰蛋白酶消化，DMEM/F12完全培养基终止，4℃1000
×
g离心5min后，采用细胞冻存液重悬后加入细胞冻存管，并进行封口处理；其中所述细胞冻存液为含有10％(w/v)海藻糖、5％(w/v)脱脂乳和10％(w/v)葡聚糖的1
×
PBS溶液；
[0009]3)将步骤2)中的细胞冻存管先至于4℃下静置30min后，按10℃/h的速率降温至
‑
20℃，并于
‑
20℃下放置1h；然后以10℃/h的速率降温至
‑
80℃，并保持该温度1h，最后以2℃/h的速率降温至
‑
196℃，并于该温度下静置过夜，即可制成冻干粉。
[0010]本专利技术的另一目的在于提供一种脐带间充质干细胞冻干粉，所述冻干粉包括脐带间充质干细胞以及细胞冻存液。
[0011]进一步地，所述细胞冻存液为含有海藻糖、脱脂乳和葡聚糖的1
×
PBS溶液；
[0012]优选地，所述细胞冻存液为含有10％(w/v)海藻糖、5％(w/v)脱脂乳和10％(w/v)葡聚糖的1
×
PBS溶液；
[0013]本专利技术的另一目的在于提供一种脐带间充质干细胞冻干粉在制备用于皮肤创面愈合或组织修复和再生试剂或产品中的用途。
[0014]本专利技术的优点如下：
[0015]1)采用本专利技术的细胞冻存液制备的脐带间充质干细胞冻干粉的水化复苏率可达到96.5％，远超过其他实验组，并且本专利技术的细胞冻存液之间也存在协同增效的技术效果，尤其是联合海藻糖、脱脂乳和葡聚糖的组合。
[0016]2)采用本专利技术的细胞冻存液制备的脐带间充质干细胞冻干粉能有效促进人皮肤成纤维细胞在的增殖，有利于皮肤创面愈合，在组织修复和再生领域具有广阔的应用前景。
具体实施方式
[0017]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本专利技术。
[0018]以下各实施例，仅用于说明本专利技术，并不用来限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本专利技术的保护范围。
[0019]在本专利技术实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本专利技术实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0020]实施例1
[0021]一种脐带间充质干细胞冻干粉的制备方法，具体操作如下：
[0022]1)、将脐带间充质原代干细胞接种至DMEM/F12培养基中，在低氧条件下进行传代培养，待原代干细胞融合至90％时，采用1
×
PBS清洗细胞，胰蛋白酶消化，完全培养基终止，4℃1000
×
g离心5min后重悬细胞，按照1:1传代，即可获得第1代脐带间充质原代干细胞；后续逐次传代，并收集第10代的细胞；
[0023]2)将第10代细胞采用1
×
PBS清洗细胞，胰蛋白酶消化，DMEM/F12完全培养基终止，4℃1000
×
g离心5min后，采用细胞冻存液重悬后加入细胞冻存管，并进行封口处理；其中所述细胞冻存液为含有10％(w/v)海藻糖、5％(w/v)脱脂乳和10％(w/v)葡聚糖的1
×
PBS溶液；
[0024]3)将步骤2)中的细胞冻存管先至于4℃下静置30min后，按10℃/h的速率降温至
‑
20℃，并于
‑
20℃下放置1h；然后以10℃/h的速率降温至
‑
80℃，并保持该温度1h，最后以2℃/h的速率降温至
‑
196℃，并于该温度下静置过夜，即可制成冻干粉。
[0025]实施例2
[0026]与实施例1的制备方法相同，区别仅在于步骤2)中采用的细胞冻存液为含有10％(w/v)海藻糖的1
×
PBS溶液。
[0027]实施例3
[0028]与实施例1的制备方法相同，区别仅在于步骤2)中采用的细胞冻存液为含有5％(w/v)脱脂乳的1
×
PBS溶液。
[0029]实施例4
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脐带间充质干细胞冻干粉的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1)、将脐带间充质原代干细胞接种至培养基中，进行传代培养，待原代干细胞融合至90％时，采用1
×
PBS清洗细胞，胰蛋白酶消化，完全培养基终止，4℃1000
×
g离心5min后重悬细胞，按照1:1传代，即可获得第1代脐带间充质原代干细胞；后续逐次传代，并收集第10代的细胞；2)将第10代细胞采用1
×
PBS清洗细胞，胰蛋白酶消化，完全培养基终止，4℃1000
×
g离心5min后，采用细胞冻存液重悬后加入细胞冻存管，并进行封口处理；3)将步骤2)中的细胞冻存管经冷冻干燥即可制成冻干粉。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中是在低氧条件下进行传代培养。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中采用的培养基为DMEM/F12。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中采用的细胞冻存液为含有海藻糖、脱脂乳和葡聚糖的1
×
PBS溶液。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中采用的细胞冻存液为含有10％(w/v)海藻糖、5％(w/v)脱脂乳和10％(w/v...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈松彬，黄肖，杨银，李楼英，
申请(专利权)人：广东省科玮智丽生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：