一种人脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于自身免疫性疾病防治技术领域，公开了一种人脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用。本发明专利技术制备方法包括以下步骤：获取原代人脐带间充质干细胞；所述原代人脐带间充质干细胞来自足月剖宫产新生儿脐带组织；所述新生儿的母亲年龄为20～25；所述脐带组织为脐带新生儿一端8～12cm的位置截取的长度为5～10cm的脐带组织；培养和扩增所述原代人脐带间充质干细胞，得传代人脐带间充质干细胞；将所述传代人脐带间充质干细胞制备细胞悬液，即成。本发明专利技术所制备的人脐带间充质干细胞对早期或轻症SLE具有优异的疗效，具有调节紊乱的免疫功能，减缓或改变疾病进程的效果，为早期或轻症SLE的治疗提供了一种新的治疗策略。轻症SLE的治疗提供了一种新的治疗策略。轻症SLE的治疗提供了一种新的治疗策略。

【技术实现步骤摘要】
一种人脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及自身免疫性疾病防治
，具体涉及一种人脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]系统性红斑狼疮(SLE)是一种以B淋巴细胞异常激活和自身抗体产生为特征的自身免疫性疾病,致病性自身抗体与相应的自身抗原结合，然后沉积在皮肤、关节、肾小球和其他部位，导致多器官和系统损伤(如狼疮肾炎，LN)。激素联合环磷酰胺是SLE治疗的经典疗法，可有效缓解SLE的进展，改善SLE患者的生存和预后，然而，长期用药的副作用显著，可诱发如感染、骨髓抑制、继发恶性肿瘤和停药后疾病复发等副作用致患者死亡。
[0003]SLE的诊断分型对治疗方案的选择有重要意义。特异性抑制B淋巴细胞激活因子(BAFF)的B细胞靶向生物制剂，如贝利木单抗(belimumab)，已被证实可缓解SLE患者的临床症状，减少免疫异常的产生，用于中重度SLE的治疗，但Belimumab使用单一靶点，不能抑制浆细胞和记忆B细胞的转化。目前，如何成功治疗早期轻症SLE患者而不产生副作用，仍然是一个很大的挑战。对早期/轻症狼疮(早期是指针对动物模型8
‑
11周龄的MRL/lpr狼疮小鼠(Brain Behav Immun.2002,16(1):46
‑
61)；轻症是指针对临床诊断为5≤SLEDAI
‑
2000评分≤9的SLE患者(J Rheumatol.2002,29(2):288
‑
291)的治疗包括使用低剂量皮质类固醇和抗疟药物(抗疟药)、维生素D、他汀类药物等。虽然这些药物对早期/轻症SLE的治疗似乎有效，但一些SLE的表现不能完全控制，即不能充分阻止疾病的进展，甚至进展到终末期肾病(ESRD)。此外，长期使用羟氯喹(HCQ)等药物的副作用已引起广泛关注，HCQ对预防严重SLE表现的发生也无效。因此，要成功治疗早期/轻症狼疮还需要其他替代或附加的策略。迫切需要寻找新的、更安全、更有效的SLE治疗策略。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种人脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
[0006]第一方面，本专利技术提供一种人脐带间充质干细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)获取原代人脐带间充质干细胞；
[0008]所述原代人脐带间充质干细胞来自足月剖宫产新生儿脐带组织；所述新生儿的母亲年龄为20～25；所述脐带组织为脐带新生儿一端8～12cm的位置截取的长度为5～10cm的脐带组织；
[0009](2)培养和扩增所述原代人脐带间充质干细胞，得传代人脐带间充质干细胞；
[0010](3)将所述传代人脐带间充质干细胞制备细胞悬液，即成。
[0011]本专利技术的脐带来源于20
‑
25岁之间、无传染性疾病或遗传病的健康母亲足月顺产的新生儿(长度在40
‑
60cm)，以及脐带的位置位于新生儿一端约10cm的位置(向母体方向)
的一段长为5
‑
10cm的脐带组织所制备的hUC
‑
MSCs，具有更高的活性和优异的疗效。
[0012]作为所述的制备方法的优选实施方式，所述步骤(1)中，所述获取原代人脐带间充质干细胞的方法为：
[0013]取所述脐带组织，清洗消毒，剔除动脉和静脉，剪成表面积约为10～25mm2的组织块，静置15～30min后加入培养液，置于37℃、5％ CO2下培养，即为原代人脐带间充质干细胞。
[0014]作为所述的制备方法的优选实施方式，所述步骤(2)中，所述培养和扩增所述原代人脐带间充质干细胞的方法为：
[0015]取所述原代人脐带间充质干细胞，加入胰酶，37℃消化，得细胞悬液；将所得细胞悬液离心弃上清，加入新鲜培养液重悬细胞，置于37℃、5％ CO2下培养。
[0016]作为所述的制备方法的优选实施方式，所述步骤(3)中，所述制备细胞悬液的方法为：
[0017]取所述传代人脐带间充质干细胞，清洗后加入胰酶，37℃消化，细胞筛过滤，得细胞悬液；将所得细胞悬液离心弃上清，加入细胞制剂悬液重悬细胞，分装，即成；所述细胞制剂悬液为含1％人白蛋白的生理盐水。
[0018]作为所述的制备方法的优选实施方式，所述步骤(1)～(3)中，所述细胞的培养基为含5％血清替代物的MEM
‑
α培养基，pH值为7.2～7.4。
[0019]作为所述的制备方法的优选实施方式，所述消化采用不含EDTA、含0.25％胰蛋白酶的PBS。
[0020]第二方面，本专利技术提供一种人脐带间充质干细胞制剂，由上述的制备方法制备而成。
[0021]本专利技术的人脐带间充质干细胞制剂免疫原性弱，不诱导免疫排斥反应；不涉及社会、伦理、法律方面的更多争论；来源充足；分离方法简单，细胞活力很强，容易扩增；脐带间质干细胞来源于人脐带组织，是一种更原始的干细胞群。
[0022]第三方面，本专利技术将所述的制备方法、所述的人脐带间充质干细胞制剂在制备治疗或预防早期或轻症系统性红斑狼疮的移植药物中应用。
[0023]本专利技术的人脐带间充质干细胞制剂给处于疾病早期(8～11周)的MRL/lpr小鼠单独移植hUC
‑
MSCs，可显著抑制其自身免疫反应强度，降低血清炎症因子水平，改善肾脏病理，保护肾脏功能，且未发现感染等副作用。
[0024]作为本专利技术所述的应用的优选实施方式，所述移植药物的移植计量为0.4
×
106～1.2
×
106人脐带间充质干细胞/10g；输注次数为1～3次，每次200μL～300μL。
[0025]第四方面，本专利技术所述的制备方法、所述的人脐带间充质干细胞制剂在制备人脐带间充质干细胞与早期或轻症系统性红斑狼疮患者外周血B细胞共培养药物中应用。
[0026]将hUC
‑
MSCs与轻症SLE患者(5≤SLEDAI
‑
2000评分≤9)外周B淋巴细胞共培养显示，本专利技术的hUC
‑
MSCs可显著抑制轻症SLE患者外周CD138
+
CD19
+
B细胞增殖，显著降低B细胞产生IgG总抗体水平。具有调节紊乱的免疫功能，减缓或改变疾病进程的作用，对病患效果十分明显，且安全有效、无任何不良副作用。
[0027]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0028]本专利技术的人脐带间充质干细胞(hUC
‑
MSCs)制备方法中，所制备的hUC
‑
MSCs来源于
20～25岁之间、无传染性疾病或遗传病的健康母亲足月顺产的新生儿脐带(长度在40～50cm)，脐带的位置位于新生儿一端约10cm的位置(向母体方向)的一段长为5～10cm的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人脐带间充质干细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)获取原代人脐带间充质干细胞；所述原代人脐带间充质干细胞来自足月剖宫产新生儿脐带组织；所述新生儿的母亲年龄为20～25；所述脐带组织为脐带新生儿一端8～12cm的位置截取的长度为5～10cm的脐带组织；(2)培养和扩增所述原代人脐带间充质干细胞，得传代人脐带间充质干细胞；(3)将所述传代人脐带间充质干细胞制备细胞悬液，即成。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述获取原代人脐带间充质干细胞的方法为：取所述脐带组织，清洗消毒，剔除动脉和静脉，剪成表面积约为10～25mm2的组织块，静置15～30min后加入培养液，置于37℃、5％CO2下培养，即为原代人脐带间充质干细胞。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述培养和扩增所述原代人脐带间充质干细胞的方法为：取所述原代人脐带间充质干细胞，加入胰酶，37℃消化，得细胞悬液；将所得细胞悬液离心弃上清，加入新鲜培养液重悬细胞，置于37℃、5％CO2下培养。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述制备细胞悬液的方法为：取所述传代人脐带间充质干细胞，清洗后加入胰...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭丰彪，潘庆军，潘权任，刘华锋，李爱芬，廖淑珍，肖增智，
申请(专利权)人：广东医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：