放射性皮炎细胞模型及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种放射性皮炎细胞模型及其构建方法，该细胞模型的构建方法包括以下步骤：将处于对数生长期的HaCaT细胞进行消化后，放置在37℃，5％CO2培养箱中进行培养24h，取出经室温适应后，对其采用6MeV X射线20Gy单次照射，剂量率为500cGy/min，照射后的HaCaT细胞经过室温适应后再次放置在培养箱中进行培养，培养完成即得到放射性皮炎细胞模型。本发明专利技术探索出了X射线用于建立放射性皮肤损伤的HaCaT细胞模型的理想加载条件，为研究放射性皮肤损伤的发生、发展及抗辐射药物的研发提供了一个具有较高可靠性和可重复性的细胞模型，提高了实验结果的客观性和科学性。验结果的客观性和科学性。

【技术实现步骤摘要】
放射性皮炎细胞模型及其构建方法


[0001]本专利技术属于细胞模型构建
，特别涉及一种放射性皮炎细胞模型及其构建方法。

技术介绍

[0002]放射性皮肤损伤是指全身或局部受到一定剂量的某种射线照射后所产生的皮肤损伤，具有潜伏性、迁延性、反复性和难愈性等特点，多发于肿瘤放疗患者，在临床上约有95％的患者会出现放射性皮肤损伤的不良反应。
[0003]皮肤作为机体抵御外界刺激的第一道防线，对于机体保护具有重要意义，人永生化表皮细胞(Human keratinocytes,HaCaT)是皮肤表皮层中的主要构成细胞，约占表皮细胞总数的95％，它不仅有物理性保护屏障作用，而且还参与免疫、炎症、肿瘤转化等多种细胞生物学过程，可以很好模拟皮肤的生理病理过程。因此HaCaT细胞适宜用于建立放射性皮肤损伤的细胞模型。
[0004]目前关于放射性皮肤损伤细胞模型的建立研究尚少，多以临床实际病例或动物实验为主，关于放射性皮肤损伤的细胞生物学研究缓慢。因此建立有效的细胞模型，研究放射性皮肤损伤的发生发展机制，具有重要意义。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种放射性皮炎细胞模型及其构建方法。
[0006]本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：
[0007]一种放射性皮炎细胞模型的构建方法，包括以下步骤：
[0008]将处于对数生长期的HaCaT细胞进行消化后，放置在37℃，5％ CO2培养箱中进行培养24h，取出经室温适应后，对其采用6MeV X射线20Gy单次照射，照射后的HaCaT细胞经过室温适应后再次放置在37℃，5％ CO2培养箱中进行培养24h，培养完成即得到放射性皮炎细胞模型。
[0009]作为优选的技术方案，所述室温适应的温度为15
‑
20℃，室温适应的时间为0.5
‑
1h。本专利技术在操作中增加了室温适应这一过程，可以防止细胞在培养箱快速拿进拿出时，因环境变化对细胞产生影响，室温适应这一过程有助于温度缓冲过渡。
[0010]作为优选的技术方案，所述X射线的剂量率为500cGy/min。
[0011]本专利技术的有益效果如下：
[0012]1、本专利技术探索出了X射线用于建立放射性皮肤损伤的HaCaT细胞模型的理想加载条件，即利用直线加速器释放的X射线在20Gy剂量、500cGy/min剂量率照射条件下可建立放射性皮肤损伤的HaCaT细胞模型。
[0013]2、本专利技术通过在相同剂量率条件下对HaCaT细胞加载不同剂量的X射线，基本明确了在选定剂量区间内细胞电离辐射损伤效应随剂量变化的趋势，筛选出500cGy/min剂量
率、20Gy剂量这一可较好应用于放射性皮肤损伤相关实验研究的理想参数。
[0014]3、本专利技术所述放射性皮肤损伤细胞模型的构建方法，为探究放射性皮肤损伤细胞模型中氧化、凋亡、炎症损伤的机制，为研究放射性皮肤损伤的发生、发展及抗辐射药物的研发提供了一个具有较高可靠性和可重复性的细胞模型，提高了实验结果的客观性和科学性。
具体实施方式
[0015]下面结合实施例对本专利技术作更进一步的说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0016]此外，以下实施例中的制备过程中如无特别说明的，均为本领域现有技术中的常规手段，因此，不再详细赘述；以下实施方式中的份数均指重量份数。
[0017]实施例1
[0018]将处于对数生长期的HaCaT细胞消化后，以1
×
105个/mL的细胞浓度每孔100μL接种于96孔板中培养作为实验组，置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h后，20℃适应0.5h后，置于直线加速器下分别进行5Gy、10Gy、15Gy、20Gy、30Gy剂量的X射线照射，剂量率为500cGy/min；同时设置空白组(只有培养基，无细胞)和正常对照组，正常对照组细胞同样置于直线加速器下相同时间，但不接受射线照射。将照射后的实验组细胞及正常对照组细胞再次20℃适应0.5h后，置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h；将96孔板进行CCK
‑
8染色，在λ＝450nm条件下测定OD值，计算不同组别HaCaT细胞的增殖率。
[0019]结果如表1所示，表1中结果显示与正常对照组相比，实验组中随着吸收剂量的增加，细胞增殖率降低，细胞的损伤加重。当吸收剂量为20Gy时，与正常对照组相比，HaCaT增殖率下降至67.16％，降低显著，能够作为检测药物对其损伤逆转的重要指标，因此该吸收剂量和培养时间适宜作为放射性皮肤损伤HaCaT细胞模型的条件。当吸收剂量继续增至30Gy时，HaCaT增殖率仅为17％，损伤太严重并不适宜药物应用实验。
[0020]表1
[0021][0022]实施例2
[0023]将处于对数生长期的HaCaT细胞消化后，以1
×
105个/mL的细胞浓度每孔2mL接种于6孔板中培养，同时设置正常对照组及空白组，每组设3个复孔，将6孔细胞培养板置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h后，15℃适应1h分别进行10Gy、20Gy射线照射，正常对照组细胞同样置于直线加速器下相同时间，但不接受射线照射。将照射后的实验组细胞及正常对照组细胞再次15℃适应1h后置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h；取上清，按照ELISA试剂盒操
作说明检测上清液中的炎症因子(IL
‑
1β、TNF
‑
α)。
[0024]结果如表2所示，可看出随着吸收剂量的增加，照射后24h，与正常对照组相比，X射线造成异常的炎症因子释放，使IL
‑
1β和TNF
‑
α分泌增加，细胞出现炎症损伤。
[0025]表2
[0026][0027]实施例3
[0028]放射性皮肤损伤细胞模型模型验证
[0029]将处于对数生长期的HaCaT细胞消化后，以1
×
105个/mL的细胞浓度每孔2mL接种于6孔板中，分为正常对照组(正常培养，但后期不进行射线照射)和实验组，将其置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h后，15℃适应1h分别进行X射线照射(正常对照组不进行照射)，射线剂量为20Gy，剂量率为500cGy/min；照射后将其置于15℃适应1h后，实验组分为两组，一组进行蛇药油用药，另一组照射后不给药，然后放置在37℃，5％CO2培养箱中培养24h结束后，取上清液，进行IL
‑
6含量检测，结果如下表3。
[0030]上述所用蛇药油为申请号为202211557105.8的专利中实施例1所公开的放疗防护用蛇药油，制备方法为：按6.0：0.6：0.6：6.0：0.01：3.0：3.0：2.0：3.0：3.0：6.0：5.0：5.0：2.0重量比称取凤丹皮、冰片、薄荷、黄连、乳香、紫珠叶、鱼腥草、当归、金银花本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种放射性皮炎细胞模型的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：将处于对数生长期的HaCaT细胞进行消化后，放置在培养箱中进行培养，取出经室温适应后，对其采用6MeV X射线20Gy单次照射，照射后的HaCaT细胞经过室温适应后再次放置在培养箱中进行培养，培养完成即得到放射性皮炎细胞模型。2.根据权利要求1所述的放射性皮炎细胞模型的构建方法，其特征在于：所述培养箱内培养的时间为24h。3.根据权利要求1所述的放射性皮炎细胞模型的构建方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑艳，陈艳茹，付荣慧，李明会，施媚，杜冬生，陈意红，段宗锦，代帮雨，
申请(专利权)人：安徽师范大学，
类型：发明
国别省市：