一种适用于微囊藻培养的培养液、制备方法和培养方法技术

本申请涉及一种适用于微囊藻培养的培养液、制备方法和培养方法。一种适用于微囊藻培养的培养液，所述培养液由营养工作液和维生素液组成，所述营养工作液以50000重量份计，包括如下组分：硝酸钠40

【技术实现步骤摘要】
一种适用于微囊藻培养的培养液、制备方法和培养方法


[0001]本申请涉及微生物培养
，更具体地说，它涉及一种适用于微囊藻培养的培养液、制备方法和培养方法。

技术介绍

[0002]铜绿微囊藻(Microcysis aeruginosa)隶属于蓝藻门、球藻目、微囊藻属，是一种全球广泛分布的淡水蓝藻，其易在富营养化的湖泊、溪流中形成“水华”，对生态环境具有较强的破坏能力。铜绿微囊藻可产生微囊藻毒素(Microcystin，MC)，该毒素是一种肝毒素，不仅破坏生态环境，还可通过食物链传播危害人类健康。目前微囊藻毒素多用于食品或环境质量的检测、监控。
[0003]在铜绿微囊藻培养的过程中，普遍使用BG11培养液，常规的BG11培养基的组分一般包括：NaNO3、MgSO4、K2HPO4、CaCl2·
2H2O、Na2CO3、柠檬酸、柠檬酸铁铵、EDTA钠盐、H3BO3、MnCl2·
4H2O、Na2MoO4·
2H2O、ZnSO4·
7H2O、CuSO4·
5H2O、Co(NO3)2·
6H2O等。这种BG11培养液由大量元素、微量元素以及维生素等组成，其具有很好的普适性，但针对性不足。
[0004]此外，目前的BG11培养基在使用时经过高温灭菌处理后，很容易产生沉淀，其原因比较复杂，一般认为是由于钙离子、铁离子、铜离子等成分的存在，易与硫酸根、碳酸根等反应，从而形成沉淀；而沉淀的产生意味着原溶解状态的营养成分变成了固态，即原有培养基成分被破坏，一方面不利于培养液的保存和某一营养盐的定量研究，另一方面也不利于铜绿微囊藻次级代谢产物的产生和积累。
[0005]基于此，需要一种适用于微囊藻培养且不易产生沉淀、便于储存的培养液。

技术实现思路

[0006]为了解决上述技术问题，本申请提供一种适用于微囊藻培养的培养液、制备方法和培养方法。
[0007]第一方面，本申请提供一种适用于微囊藻培养的培养液，采用如下的技术方案：
[0008]一种适用于微囊藻培养的培养液，包括所述培养液由营养工作液和维生素液组成，所述营养工作液以50000重量份计，包括如下组分：硝酸钠40
‑
50份、磷酸二氢钾1
‑
3份、碳酸钠2
‑
5份、硫酸镁1
‑
3份、硫酸亚铁2
‑
5份、L
‑
精氨酸6
‑
10份、硼酸0.1
‑
0.5份、硫酸锌0.05
‑
0.2份、硫酸铜0.01
‑
0.1份以及乙二胺四乙酸二钠0.01
‑
0.1份，余量为水。
[0009]通过采用上述技术方案，通过调整培养液的组分及用量，可以降低体系中离子的相互反应，降低培养液中沉淀的产生；并且相较于常规的BG11培养基，本申请的培养液通过氮元素、铁元素、精氨酸等组分及含量的调整，使其更适合于微囊藻的培养，对其次级代谢产物的产生以及积累具有促进作用。
[0010]可选的，所述维生素液以500重量份计，包括如下组分：维生素B10.01
‑
0.05份、维生素B2 0.001
‑
0.005份以及维生素B12 0.001
‑
0.005份，余量为水。
[0011]可选的，所述维生素液与营养工作液的体积比为1:1000。
[0012]第二方面,本申请提供一种适用于微囊藻培养的培养液的制备方法，采用如下的技术方案：
[0013]一种适用于微囊藻培养的培养液的制备方法，包括如下步骤：
[0014]配制a液：取硝酸钠、磷酸二氢钾以及碳酸钠，加水溶解后，得到a液；
[0015]配制b液：取硫酸镁以及硫酸亚铁，加水溶解后，得到b液；
[0016]配制c液：取L
‑
精氨酸，加水溶解后，得到c液；
[0017]配制d液：取硼酸、硫酸锌以及硫酸铜，加水溶解后，得到d液；
[0018]配制e液：取乙二胺四乙酸二钠，加水溶解后，得到e液；
[0019]混合：取一定量的水，按照比例加入a液、b液、c液、d液、e液后，搅拌溶解，得到营养工作液；将营养工作液灭菌冷却后，加入维生素液，得到培养液。
[0020]为了降低培养液沉淀的产生以及提高使用的便利性，通过采用上述技术方案，本申请在配制培养液时，经过多次验证，将相互之间不易发生反应的物质配制成同一储备液，a液、b液、c液、d液以及e液，上述储备液可以长时间储存；在使用培养液时，再将已经配制好的a液、b液、c液、d液以及e液按照比例进行混合，由此可以降低培养液中因离子的相互反应而导致的沉淀现象。并且本申请的培养液配方组成简单，配制方便，便于储存，节省了时间成本。
[0021]此外，本申请将原料配制成不同的储备液，在进行不同种属的藻类研发时，更容易进行变量的控制，也便于进行某一营养盐(例如碳源)的定量研究。
[0022]可选的，所述灭菌方法包括如下步骤：将营养工作液在121℃的温度下，加热15
‑
30min。
[0023]可选的，所述维生素液在使用前经过抽滤灭菌处理。
[0024]第三方面,本申请提供一种微囊藻的培养方法，采用如下的技术方案：
[0025]一种微囊藻的培养方法，采用本申请的培养液进行培养。
[0026]可选的，一种微囊藻的培养方法，包括如下步骤：
[0027]将微囊藻种子液接种至培养液中，在温度为25
‑
28℃、光照时间为10
‑
16h/d、光照强度为6000
‑
8500lx的条件下培养7
‑
15天，当藻细胞密度>109cells/mL时停止培养。
[0028]通过采用上述技术方案，在上述培养条件下对微囊藻进行培养，可以提高微囊藻的细胞密度以及次级代谢产物的产量，具有快速、高效以及降低生产成本的作用。在本申请中，通过培养天数以及藻细胞密度这两个条件作为确认停止培养的指标，这两个条件基本是相互匹配和协调的，即在该条件下，培养7
‑
15天，藻细胞密度应该达到109cells/mL；通过这两个条件可以起到“监控”该步骤操作的稳定性的作用，即：如果在培养7
‑
15天内，细胞密度没有达到109cells/mL，则该环节操作可能出现问题，继续培养，可能最终不会达到预期毒素目标。
[0029]可选的，所述微囊藻种子液与培养液的体积比为1:8
‑
10。
[0030]可选的，所述微囊藻种子液的藻细胞密度>106cells/mL。
[0031]综上所述，本申请具有以下有益效果：
[0032]1.通过调整培养液的组分以及用量，可以降低体系中离子间的相互反应，降低培养液中沉淀的产生；并且相较于常规的BG11本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适用于微囊藻培养的培养液，其特征在于，所述培养液由营养工作液和维生素液组成，所述营养工作液以50000重量份计，包括如下组分：硝酸钠40
‑
50份、磷酸二氢钾1
‑
3份、碳酸钠2
‑
5份、硫酸镁1
‑
3份、硫酸亚铁2
‑
5份、L
‑
精氨酸6
‑
10份、硼酸0.1
‑
0.5份、硫酸锌0.05
‑
0.2份、硫酸铜0.01
‑
0.1份以及乙二胺四乙酸二钠0.01
‑
0.1份，余量为水。2.根据权利要求1所述的一种适用于微囊藻培养的培养液，其特征在于，所述维生素液以500重量份计，包括如下组分：维生素B1 0.01
‑
0.05份、维生素B2 0.001
‑
0.005份以及维生素B12 0.001
‑
0.005份，余量为水。3.根据权利要求1所述的一种适用于微囊藻培养的培养液，其特征在于，所述维生素液与营养工作液的体积比为1:1000。4.权利要求1所述的一种适用于微囊藻培养的培养液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：配制a液：取硝酸钠、磷酸二氢钾以及碳酸钠，加水溶解后，得到a液；配制b液：取硫酸镁以及硫酸亚铁，加水溶解后，得到b液；配制c液：取L

【专利技术属性】
技术研发人员：刘红兵，高伟，白应皓，于秋香，
申请(专利权)人：青岛普瑞邦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：