一株耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌及其应用，本发明专利技术的耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌，其苹果酸的耐受度可达到30g/L，在MRS培养基中产苯乙醇的能力达到168mg/L，并将其应用于果蔬汁的发酵生产。该菌株能在果蔬汁中的高浓度苹果酸环境下正常生长繁殖并高产苯乙醇，生产过程可控，操作简单、方便；并且提高成品果蔬汁中的乳酸含量，大大提高成品果蔬汁的感官品质。汁的感官品质。汁的感官品质。

【技术实现步骤摘要】
一株耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌及其应用


[0001]本专利技术涉及一株耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌及其应用，属于微生物


技术介绍

[0002]乳酸菌是可以利用碳水化合物在发酵过程中产生乳酸的一类细菌，其均含有一定的蛋白酶和某些肽酶，能分解原料中的大分子酪蛋白，使其降解，或者分解蛋白质形成小肽或氨基酸；乳酸菌代谢产生的乳酸、乳酸乙酯、乙醛和双乙酰及其衍生物等物质可以极大程度改善乳酸菌发酵产品的风味；乳酸菌发酵产生的乳酸使pH值下降，在抑制其他细菌生长中起着主要作用，产生的其他少量物质，如过氧化氢、细菌素和乳链菌肽对其他细菌都有一定的抑制作用，能延长食品的保存期。
[0003]乳酸菌发酵果蔬制品由于其独特的风味和益生性能，受到越来越多的关注。乳酸菌发酵可以利用果蔬原料中的营养成分，积累乳酸、酯类物质等风味化合物，赋予发酵果蔬汁丰富的滋味和香气感官特征；同时，还可以增加果蔬汁中的生物活性物质，提高其抗氧化和抗菌等性能；同时乳酸菌发酵对部分果汁具有护色作用，例如在胡萝卜汁和苹果汁发酵后，颜色变得更加鲜艳亮丽，这与发酵过程中产生的还原力有关。
[0004]但是在不同果蔬原料中，有机酸组成差异非常显著，其对乳酸菌的生长和发酵存在显著抑制。在苹果、荔枝和水蜜桃汁中，苹果酸的含量通常高达10g/L以上，大部分乳酸菌在这个浓度下生长和发酵性能受到显著抑制。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一株耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌(L.plantarum)P
‑
>4及其应用，本专利技术通过菌种分离和筛选，得到了一株耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌P
‑
4，其苹果酸的耐受度可达30g/L，在MRS培养基上产苯乙醇的能力达到168mg/L，并将其应用于苹果、荔枝和水蜜桃等这类苹果酸浓度较大的水果中发酵。该菌株能在苹果、荔枝和水蜜桃等高苹果酸环境下正常生长繁殖并高产苯乙醇，还能提高果蔬发酵终产品的乳酸含量，可大大提高发酵后果蔬的感官品质，生产出营养、安全并含有活性乳酸菌的发酵产品。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一株耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌，分类命名为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2022年11月4日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.26048。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供所述耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌在发酵食品中的应用。
[0008]进一步地，所述食品为果蔬制品。
[0009]进一步地，所述果蔬制品为苹果汁、荔枝或水蜜桃汁。
[0010]进一步地，所述应用是将所述植物乳杆菌的种子液接种至果蔬汁中进行发酵。
[0011]进一步地，所述植物乳杆菌的种子液按照每千克发酵液添加0.05～2
×
10
10
个植物乳杆菌的接种量进行接种。
[0012]进一步地，所述发酵是在35～38℃培养36h
‑
48h。
[0013]本专利技术的第三个目的是提供一种包含所述植物乳杆菌的微生物菌剂。
[0014]进一步地，所述微生物菌剂为液态菌剂或固态菌剂。
[0015]本专利技术的第四个目的是提供一种采用所述植物乳杆菌发酵制备得到的果蔬汁。
[0016]本专利技术的有益效果是：
[0017]本专利技术的耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌，其苹果酸的耐受度可达到30g/L，在MRS培养基中产苯乙醇的能力达到168mg/L，并将其应用于果蔬汁的发酵生产。该菌株能在果蔬汁中的高浓度苹果酸环境下正常生长繁殖并高产苯乙醇，生产过程可控，操作简单、方便；并且提高成品果蔬汁中的乳酸含量，大大提高成品果蔬汁的感官品质。
[0018]生物材料保藏
[0019]植物乳杆菌P
‑
4，分类命名为植物乳杆菌L.plantarum，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2022年11月4日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.26048。
附图说明：
[0020]图1为植物乳杆菌P
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4在MRS固体培养基上的菌落特征。
[0021]图2为植物乳杆菌P
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4在显微镜下的菌体形态。
[0022]图3为植物乳杆菌P
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4与实验室分离的其他植物乳杆菌(L.plantarum)JN
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7、M、L030、L031和F在添加苹果酸15g/L和30g/L的MRS体系下菌体生长状况。
[0023]图4为植物乳杆菌P
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4基于16S rRNA基因发育树图。
[0024]图5为植物乳杆菌P
‑
4基于16S rRNA基因电泳图。
具体实施方式
[0025]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0026]实施例1：耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌P
‑
4和植物乳杆菌F的获得
[0027]分别称取10g醋醅加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，并加入灭菌的玻璃珠，旋涡振荡10min，充分散开醋醅。取上清液10倍梯度稀释，稀释梯度分别为10
‑3、10
‑4、10
‑5、10
‑6、10
‑7，10
‑8，用移液枪吸取0.5mL样液，采用平板涂布法，将样液均匀涂布于15g/L和30g/L苹果酸浓度的MRS筛选培养基上，将制备好的平板倒置于36℃恒温培养箱中培养3d，观察记录菌落特征形态。挑取能够在15g/L和30g/L苹果酸添加量的培养基上生长良好的菌株，进行多次划线分离出单克隆菌株，在15g/L苹果酸MRS平板上挑选出一株植物乳杆菌F，在30g/L苹果酸MRS平板上挑选出一株植物乳杆菌P
‑
4，然后将在MRS斜面培养基上划线，保藏于4℃冰箱中备用。植物乳杆菌P
‑
4的菌落形态、特征如图1和图2所示。
[0028]将植物乳杆菌P
‑
4与实验室分离的其他植物乳杆菌(L.plantarum)JN
‑
7、M、L030、L031和F在添加苹果酸15g/L和30g/L的MRS体系下进行培养，48小时后，菌体生长状况如图3所示。
[0029]实施例2：耐高浓度苹果酸植物乳杆菌P
‑
4的16S rRNA鉴定实验
[0030]采用16S rDNA基因法对分离筛选的菌进行分子生物学的鉴定。根据原核生物体16SrDNA基因序列的高度保守性设计通用引物，以分离菌的DNA为模板扩增出细菌的16SrDNA基因片段，测定分离菌的16S rDNA基因序列(SEQ ID NO.1)，同GenBank中的基因序列进行同本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌，其特征在于，分类命名为植物乳杆菌L.plantarum，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2022年11月4日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.26048。2.权利要求1所述耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌在发酵食品中的应用。3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述食品为果蔬制品。4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述果蔬制品为苹果汁、荔枝或水蜜桃汁。5.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述应用是将所述植物乳杆菌的种子液...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘瑞山，张晓娟，林文雄，许正宏，
申请(专利权)人：福建绿泉食品有限公司，
类型：发明
国别省市：