一株产酸克雷伯氏菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，特别涉及一株产酸克雷伯氏菌及其应用。该菌株于2022年1月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.24286。实验表明，该菌株能够耐受氯离子等金属离子，并能在3％氯离子存在的条件下进行反硝化作用，有效去除水体中的硝态氮，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一株产酸克雷伯氏菌及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，特别涉及一株产酸克雷伯氏菌及其应用。

技术介绍

[0002][0003]目前对于废水中氮素污染的治理多采取脱氮处理。根据脱氮原理，将脱氮技术分为物理脱氮、化学脱氮和生物脱氮。其中，生物脱氮因其投资及运行成本低、适用范围广、操作简单、无二次污染、稳定性强等优势，成为了脱氮的最佳处理方式。
[0004]目前已知的反硝化细菌多是从淡水环境中分离得来，能用常规水处理，用于高氯离子废水案例少见，尤其是高浓度氯化钠废水，成为困扰氯化钠废水处理的关键。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一株产酸克雷伯氏菌及其应用，能够耐受氯离子等金属离子，并能在3％氯离子存在的条件下进行反硝化作用，有效去除水体中的硝态氮。
[0006]本专利技术从渤海湾滩涂中分离获得菌株LZST 2022
‑
02，其形态学特征为：革兰氏阴性小杆菌，菌落呈圆形，边缘整齐，乳脂色，半透明，表面光滑。培养温度：31～37℃，最适温度为34℃；在pH 6～8范围内生长；革兰氏染色检测呈阳性；葡萄糖发酵呈阳性，克氏柠檬酸盐呈阳性，H2S呈阳性，NO3还原呈阳性。该菌株的16SrDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。经形态学和ITS rRNA鉴定为产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)，其保藏编号为CGMCCNO.24286。
[0007]本专利技术还提供一种反硝化菌剂，其原料包括保藏编号为CGMCC NO.24286的产酸克雷伯氏菌。
[0008]本专利技术还提供了所述的反硝化菌剂的制备方法，将保藏编号为CGMCCNO.24286的产酸克雷伯氏菌活化后制备种子液，然后接种于发酵培养基中发酵，收集发酵后的菌体依次进行吸附、干燥和粉碎。
[0009]其中，所述菌种活化为室温条件下活化4h
‑
8h。
[0010]所述种子液的制备包括：将活化后的菌种接种至液体培养基中，于温度为28～33℃，摇床转速为100
‑
200r/min的条件下，振荡培养12
‑
18h。
[0011]所述发酵为：将产酸克雷伯菌种子液按体积百分比1％
‑
5％的接种量接种于发酵培养基中进行液体深层发酵；所述液体深层发酵的条件为：温度为28～33℃，转速为100
‑
200r/min，时间为12～18h。
[0012]所述发酵培养基配方为：按重量计(w/w)组成为：豆粕1
‑
3％，玉米粉1
‑
3％，葡萄糖1
‑
3％，玉米浆干粉0.2
‑
1％，磷酸二氢钾0.01
‑
0.1％，pH70
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7.2。
[0013]按照本专利技术以上方法制得的反硝化菌剂，其有效活菌数达100亿/g以上。
[0014]本专利技术还提供了所述的产酸克雷伯氏菌、所述的反硝化菌剂或所述的制备方法制得的反硝化菌剂，在处理硝化废水中的应用。
[0015]其中，所述硝化废水包括含氯离子的高盐硝化废水和不含氯离子的硝化废水，其中，高盐硝化废水中氯离子含量高达3％。
[0016]实验表明，本专利技术产酸克雷伯菌LZST 2022
‑
02能够耐受氯离子等金属离子，并能在3％氯离子存在的条件下进行反硝化作用，有效去除水体中的硝态氮。
[0017]本专利技术还提供一种硝化废水的处理方法，将所述的产酸克雷伯氏菌、所述的反硝化菌剂加入到硝化废水中。
[0018]其中，按照硝化废水中有效活菌菌量为105‑
107cfu/mL的比例添加所述产酸克雷伯氏菌或所述反硝化菌剂。
[0019]本专利技术具体实施方案中，于缺氧池中对硝化废水进行处理，缺氧池的处理条件为：温度31
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37℃，优选34℃；pH6
‑
8，优选pH7。
[0020]本专利技术提供的产酸克雷伯菌LZST 2022
‑
02对硝态氮具有显著的降解特性，尤其在3％氯离子存在的条件下依然能够进行反硝化作用，有效地去除了水体中的硝态氮，显著缓解了高浓度氯离子对污水处理系统的抑制作用，具有广阔的应用前景。
[0021]生物保藏说明
[0022]LZST 2022
‑
02，分类命名：产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca，于2022年1月10日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.24286。
附图说明
[0023]图1为菌株耐受氯离子的实验结果；
[0024]图2为实施例3菌株在皮革废水中的脱氮效果趋势图。
具体实施方式
[0025]本专利技术公开了一株产酸克雷伯菌及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0026]下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：
[0027]实施例1菌株的获得
[0028]从渤海湾滩涂所取的样品中分离出5株对反硝化功能的菌株，并分别进行分离纯化。
[0029]对5株待选菌株分别进行后续的耐氯离子实验的研究，最终筛选出一株降解效率高、耐受氯离子且有稳定的传代特性的菌株(见图1)，将其命名为LZST 2020
‑
02。
[0030]该菌株：革兰氏阴性小杆菌，菌落呈圆形，边缘整齐，乳脂色，半透明，表面光滑。培养温度：31～37℃，最适温度为34℃；在pH6～8范围内生长；革兰氏染色检测呈阳性；葡萄糖发酵呈阳性，克氏柠檬酸盐呈阳性，H2S呈阳性，NO3还原呈阳性。
[0031]对菌株进行了16SrDNA测序，该16SrDNA序列进行BLAST比对，结果显示，该菌株的16SrDNA的核苷酸序列与产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)不同菌株的核苷酸序列有大
于99％的同源性，与其中明确标记为产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)的菌株有100％的同源性，因此，鉴定菌株LZST 2002
‑
02为产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)。
[0032]实施例2菌株的发酵
[0033]1)菌种活化：将产酸克雷伯菌试管菌种移至室温条件下活化4h
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8h；
[0034]2)种子液制备：将活化后的试管菌种分别接种到相应液体培养基中，1支试管菌种接种25
‑
500mL液体培养基，振荡培养12
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.保藏编号为CGMCC NO.24286的产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)。2.根据权利要求1所述的产酸克雷伯氏菌，其特征在于，其16SrDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。3.一种反硝化菌剂，其特征在于，其原料包括保藏编号为CGMCC NO.24286的产酸克雷伯氏菌。4.权利要求3所述的反硝化菌剂的制备方法，其特征在于，将保藏编号为CGMCC NO.24286的产酸克雷伯氏菌活化后制备种子液，然后接种于发酵培养基中发酵，收集发酵后的菌体依次进行吸附、干燥和粉碎。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述菌种活化为室温条件下活化4h
‑
8h。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述种子液的制备包括：将活化后的菌种接种至液体培养基中，于温度为28～33℃，摇床转速为100
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200r/min的条件下，振荡培养12
‑
18h。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王清，周德国，张映，袁晓曼，孙伟霞，
申请(专利权)人：山东龙泽盛通环保工程有限公司，
类型：发明
国别省市：