一种可替代CRISPR系统的核酸试纸条检测方法及新冠病毒检测试剂盒技术方案

本申请公开了一种可替代CRISPR系统的核酸试纸条检测方法及新冠病毒检测试剂盒，涉及检测技术领域。本申请包括以下步骤：1)基于不同的活性，设计合成不同类型用于扩增靶基因的引物，并在相关区域设计对应的探针；2)将基于不同活性以及不同类型引物酶系及其buffer、引物和DNA探针进行混合，得到反应混合物，并加入至相应模板即可；3)反应混合物进行反应后，以稀释液稀释10倍后插入CAS核酸试纸条，进行检测结果可视化判读。本申请相比于市面上现有的核酸试纸条检测技术，本发明专利技术具有以下优点：更快速：从取样到结果判断仅需22min，其中样本处理5min以内，扩增15min，试纸条检测2min。试纸条检测2min。试纸条检测2min。

【技术实现步骤摘要】
一种可替代CRISPR系统的核酸试纸条检测方法及新冠病毒检测试剂盒


[0001]本申请涉及检测
，具体涉及一种可替代CRISPR系统的核酸试纸条检测方法及新冠病毒检测试剂盒。

技术介绍

[0002]核酸诊断技术具有快速、灵敏的优势，能够检测处于潜伏期的病原体。目前，大多数实验室采用聚合酶链式反应(PCR)作为分子检测的金标准，被广泛应用于医学诊断、食品安全检测等领域。采用PCR扩增后，微量的待测物可被放大为初始浓度的约108倍，大大提高了检测灵敏度。但是PCR扩增需要集成精密温控热块，价格昂贵，非便携，不适用于现场检测。此外，PCR扩增通常需要1～2小时，非常耗时。
[0003]近年来出现了如RPA(RecombinasePolymeraseAmplification，重组酶聚合酶等温扩增)，LAMP等多种恒等温扩增技术，可用于现场检测，但如何准确特异地检测扩增产物一直是制约其发展的因素。目前RPA扩增可结合探针检测扩增产物，探针的引入可阻碍扩增反应的进行，因此该方法对引物探针组合筛选要求极高，难以达到快速应对突发疫情的目的。并且本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可替代CRISPR系统的核酸试纸条检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)基于不同的活性，设计合成不同类型用于扩增靶基因的引物，并在相关区域设计对应的探针；2)将基于不同活性以及不同类型引物酶系及其buffer、引物和DNA探针进行混合，得到反应混合物，并加入至相应模板即可；3)反应混合物进行反应后，以稀释液稀释10倍后插入CAS核酸试纸条，进行检测结果可视化判读。2.根据权利要求1所述的一种可替代CRISPR系统的核酸试纸条检测方法，其特征在于，所述步骤1)中不同的活性包括5
’→3’
核酸外切酶活性、ExonucleaseIII活性或EndonucleaseIV活性。3.根据权利要求2所述的一种可替代CRISPR系统的核酸试纸条检测方法，其特征在于，所述步骤1)中不同的活性还包括RNaseHII活性。4.根据权利要求3所述的一种可替代CRISPR系统的核酸试纸条检测方法，其特征在于，当活性为5
’→3’
核酸外切酶活性时，此时引物类型为PCR引物和LAMP引物、RCA引物中的一种或几种；当活性为ExonucleaseIII活性或EndonucleaseIV活性时，此时引物类型为RPA引物；当活性为RNaseHII活性时，此时引物类型为PCR引物、RPA引物、LAMP引物和RCA引物中的一种或几种。5.根据权利要求2所述的一种可替代CRISPR系统的核酸试纸条检测方法，其特征在于，所述步骤2)中，DNA探针两端的标记基团FAM、TAMRA、DIG及Biotin可两两自由组合，当活性为ExonucleaseIII活性或EndonucleaseIV活性时，DNA探针中间某碱基以四氢呋喃THF替代。6.一种新冠病毒检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1
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5任意一项所述的一种可替代CRISPR系统的核酸试纸条检测方法，至少还包括引物、DNA探针和CAS核酸试纸条。7.根据权利要求6所述的一种新冠病毒检测试剂盒，其特征在于，当活性为5
’→3’
核酸外切酶活性时，试剂盒还包括完整的Bst聚合酶及其buffer；当活性为ExonucleaseIII活性或EndonucleaseIV活性时，试剂盒还包括RPA酶系及其buffer、醋酸镁；当活性为RNas...

【专利技术属性】
技术研发人员：许萍，
申请(专利权)人：许萍，
类型：发明
国别省市：