基于CRISPR技术进行靶核酸多重检测的方法技术

本发明专利技术基于不同Cas蛋白的温度耐受性，提供了一种基于CRISPR技术进行靶核酸多重检测的方法，具体地，提供了一种检测靶核酸的方法、系统和试剂盒，所述的检测方法包括向含有靶核酸的反应体系中加入第一核酸检测组合物、第二核酸检测组合物、第三核酸检测组合物和第四核酸检测组合物中的任意一种、任意两种、任意三种或四种，基于不同Cas蛋白的温度耐受性，可以实现对于靶核酸的多重检测。实现对于靶核酸的多重检测。

【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR技术进行靶核酸多重检测的方法
[0001]本申请是申请日为2020年9月18日、申请号为202010987874.6、专利技术名称为“基于CRISPR技术进行靶核酸多重检测的方法”的专利技术专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及核酸检测领域，涉及基于CRISPR技术进行靶核酸多重检测的方法，具体涉及基于CRISPR技术进行靶核酸检测的方法、系统和试剂盒，尤其涉及一种基于CRISPR技术进行多重靶核酸检测的方法。

技术介绍

[0003]特异性检测核酸分子(Nucleic acid detection)方法具有重要的应用价值，例如病原体的检测，遗传病检测等。在病原体检测方面，由于每种病原体微生物都有其独一无二的特征核酸分子序列，因此可以开发出针对特定物种的核酸分子检测，也称为核酸诊断(NADs,nucleic acid diagnostics)，在食品安全、环境微生物污染检测，人体病原菌感染等领域具有重要义。另一个方面是对人或其他物种的单核苷酸多态性(SNPs,single nucleotide polymorph本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测样品中靶核酸的方法，所述方法包括将样品与核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，所述核酸检测组合物包括Cas蛋白和gRNA；所述gRNA包括与所述Cas蛋白结合的区域和与靶核酸上的靶序列杂交的导向序列；其特征在于，所述方法包括将样品进行以下I
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IV中的任意一种、任意两种、任意三种或四种的反应：I、将样品与第一核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，在第一温度下反应第一时间段；II、将样品与第二核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，在第二温度下反应第二时间段；III、将样品与第三核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，在第三温度下反应第三时间段；IV、将样品与第四核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，在第四温度下反应第四时间段；所述第一核酸检测组合物包括Cas12i、可以结合Cas12i以及与靶核酸上的第一靶序列杂交的第一gRNA；所述第二核酸检测组合物包括Cas12a、可以结合Cas12a以及与靶核酸上的第二靶序列杂交的第二gRNA；所述第三核酸检测组合物包括Cas12j、可以结合Cas12j以及与靶核酸上的第三靶序列杂交的第三gRNA；所述第四核酸检测组合物包括Cas12b、可以结合Cas12b以及与靶核酸上的第四靶序列杂交的第四gRNA；所述第一温度为4℃
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50℃；所述第二温度为4℃
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48℃；所述第三温度为4℃
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56℃；所述第四温度为4℃
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80℃；检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测靶核酸；所述任意两种的反应选自以下任意一种组合：(1)I和III，其中，第三温度高于第一温度；(2)I和IV，其中，第四温度高于第一温度；(3)III和IV，其中，第四温度高于第三温度；(4)II和III，其中，第三温度高于第二温度；(5)II和IV，其中，第四温度高于第二温度；所述任意三种的反应选自以下任意一种组合：(a)I、III和IV，其中，第四温度高于第三温度，第三温度高于第一温度；(b)II、III和IV，其中，第四温度高于第三温度，第三温度高于第二温度。2.一种对样品中靶核酸进行多重检测的方法，所述方法包括将样品在以下i
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vii任一条件下与核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，所述核酸检测组合物包括Cas蛋白和gRNA；所述gRNA包括与所述Cas蛋白结合的区域和与靶核酸上的靶序列杂交的导向序列；检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测靶核酸；所述i
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vii的条件如下：i、将样品与权利要求1中的第一核酸检测组合物和第三核酸检测组合物接触，在第一温度下反应第一时间段，然后在第三温度下再反应第三时间段；所述第三温度高于第一温
度；ii、将样品与权利要求1中的第一核酸检测组合物和第四核酸检测组合物接触，在第一温度下反应第一时间段，然后在第四温度下再反应第四时间段；所述第四温度高于第一温度；iii、将样品与权利要求1中的第三核酸检测组合物和第四核酸检测组合物接触，在第三温度下反应第三时间段，然后在第四温度下再反应第四时间段；所述第四温度高于第三温度；iv、将样品与权利要求1中的第二核酸检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：段志强，陈莹，
申请(专利权)人：山东舜丰生物科技有限公司，
类型：发明
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