ALS疾病模型犬的建立方法技术

本发明专利技术涉及通过转基因技术制备肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)疾病模型犬的方法，具体提供了利用转基因技术制备hSOD1

【技术实现步骤摘要】
ALS疾病模型犬的建立方法


[0001]本专利技术涉及利用转基因技术制备肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)疾病模型犬的方法，尤其是涉及利用转基因技术制备hSOD1
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G93A转基因的ALS疾病模型犬的方法。

技术介绍

[0002]肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)是一种破坏性的运动神经元疾病，主要由脊髓中异常积聚的包涵体引起。ALS患者在发病3至5年后会出现广泛的肌肉萎缩和萎缩，导致瘫痪和死亡。这种情况可能是家族性的(fALS 10％)或散发性的(salALS 90％)。绝大多数的fALS病例是由于超氧化物歧化酶1基因(SOD1)的基因突变和编码C9ORF72基因的重复核苷酸扩增。
[0003]超氧化物歧化酶1(SOD1)编码胞质Cu/Zn超氧化物歧化酶，其显性突变已被确定为家族性ALS的主要遗传原因之一。已知SOD1突变蛋白以不溶性包裹体的形式在SOD1相关的ALS患者的受影响脊髓运动神经元(MNs)内异常积累。
[0004]动物模型是研究肌萎缩性脊髓侧索硬化症病理机制和筛选相关药物的重要手段，但已有动物模型存在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)疾病模型犬的建立方法，所述方法包括利用转基因技术获得hSOD1
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G93A转基因的犬受精卵或犬体细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)根据hSOD1基因的CDS区设计扩增引物，并进行PCR扩增获得hSOD1基因的CDS片段；(2)对步骤(1)得到的hSOD1基因的CDS片段进行酶切，获得酶切产物，将获得的酶切产物与线性化的骨架载体连接构建hSOD1重组质粒；(3)根据hSOD1重组质粒设计hSOD1
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G93A突变的扩增引物，通过扩增制备hSOD1
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G93A重组质粒；(4)将hSOD1
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G93A重组质粒和转座酶表达质粒共同导入犬受精卵或犬体细胞中，获得hSOD1
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G93A犬受精卵或犬体细胞。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述扩增引物包括：正向引物：CGGCTAGCatggcgacgaaggccgtgt(SEQ ID NO：2)；反向引物：TTGCGGCCGCttattgggcgatcccaattacac(SEQ ID NO：3)。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述骨架载体选自PiggyBac Dual promoter(PB513B
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1)载体。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述hSOD1
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G93A突变的扩增引物包括：正向引物：GACTGCTGACAAAGATGCTGTGGCCGATGTGTCTATT(SEQ ID NO：4)；反向引物：AATAGACACATCG...

【专利技术属性】
技术研发人员：米继东，赵建平，贾怡昌，郭炜，齐辉辉，彭林，
申请(专利权)人：神济昌华北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：