经修饰的T细胞、药物组合物、其制备方法，及其使用方法技术

本公开提供了具有细胞杀伤功能与抗原呈递细胞功能的经修饰的T细胞及其培养方法。通过施用所述经修饰的T细胞，可通过细胞介导免疫作用有效地抑制受试者的癌细胞。疫作用有效地抑制受试者的癌细胞。

【技术实现步骤摘要】
经修饰的T细胞、药物组合物、其制备方法，及其使用方法
专利

[0001]本公开涉及经修饰的T细胞，特别是γδT细胞，以及包含其的药物组合物。本公开还提供了鉴定所述经修饰的T细胞以及培养所述经修饰的T细胞的方法。

技术介绍

[0002]免疫监视在对抗癌症方面发挥关键的作用，并且代表一种非常有吸引力的治疗方式，特别是有鉴于常规手术、放射线和化学疗法在癌症管理中的许多缺点。
[0003]伽马德他(γδ)T细胞为“非常规”T细胞的原型，并代表了周边血中相对小的T细胞亚群。它们由γ链与δ链组成的异二聚体T细胞受体(TCR)的表达所定义。这使它们不同于表达αβTCR的典型且更广为人知的CD4
+
辅助T细胞与CD8
+
细胞毒性T细胞。
[0004]Vγ9Vδ2(也称为Vγ2Vδ2)T细胞为人类周边血γδT细胞亚群，其以TCR依赖性方式识别微生物(E)
‑4‑
羟基
‑3‑
甲基丁
‑2‑
烯基二磷酸酯与内源性异戊烯基二磷酸酯。识别不需要特别的辅助细胞、抗原摄取、抗原加工或MHC第I类、第II类或第Ib类表达。
[0005]γδT细胞被视为代表先天免疫与后天免疫之间的连结。它们表达自然杀手受体，例如NKG2D，其对Vγ9Vδ2T细胞的肿瘤反应性具有重要贡献。此外，它们也表达γδT细胞受体。活化的γδT细胞表达高含量的抗原呈递细胞相关的分子，并可将衍生自经破坏的细胞的肽抗原呈递至αβT细胞。利用γδT细胞的这些抗微生物与抗肿瘤性质，已进行临床前与临床试验，以开发针对感染与恶性肿瘤的新颖免疫疗法。
[0006]由于仍然没有满足有效治疗和/或预防癌症的需求，这些发现支持了开发针对癌细胞的基于T细胞的疗法以及产生更多用于临床应用的具有治疗能力的T细胞的培养方法的理论依据。本公开提供了具有独特表型的经修饰的T细胞，以满足这些和其他需求。所述细胞可用于自体疗法或非自体疗法。

技术实现思路

[0007]鉴于本领域的迫切需要，本文提供在癌症治疗中安全有效的经修饰的T细胞和包含其的药物组合物。
[0008]在一个具体实施例中，本公开提供了包含CD3
Hi
TCR γ9
Hi
TCR δ2
Hi
CXCR4
Hi
表型的经修饰的T细胞。在一个优选的具体实施例中，所述经修饰的T细胞可进一步包含CD69
Dim
CD11c
Hi
CXCR3
Dim
的表型，即所述经修饰的T细胞可包含CD3
Hi
TCR γ9
Hi
TCR δ2
Hi
CD69
Dim
CD11c
Hi
CXCR4
Hi
CXCR3
Dim
的表型。在另一优选具体实施例中，经修饰的T细胞可进一步包含IFN
‑
γ
Hi
的表型。
[0009]某些具体实施例提供药物组合物，包含本文所述的经修饰的γδT细胞以及药学上可接受的载体或赋形剂。
[0010]某些具体实施例提供一种治疗癌细胞的方法，包含对有此需要的受试者施用有效量的本文所述的经修饰的T细胞或药物组合物。
[0011]在一个优选的具体实施例中，所述有效量可以是每剂约1
×
103至约1
×
109个细胞。
[0012]在一个优选的具体实施例中，所述经修饰的T细胞可以是自体的或同种异体的。
[0013]在一个优选的具体实施例中，所述经修饰的T细胞可衍生自周边血、脐带血，或骨髓。
[0014]在一个优选的具体实施例中，所述方法可进一步包含体外扩增所述经修饰的T细胞。
[0015]其他具体实施例提供一种培养具有NK细胞功能以及抗原呈递细胞功能的经修饰的T细胞的方法，所述方法包含
[0016]获得包含单核细胞的体液；
[0017]使所述单核细胞与包含IL
‑
2与唑来膦酸(zoledronic acid)的诱导培养基接触以获得第一培养的细胞群；
[0018]使所述第一培养的细胞群与包含IL
‑
2的第一培养基接触以获得第二培养的细胞群；以及
[0019]使所述第二培养的细胞群与包含IL
‑
2与IL
‑
12的第二培养基接触以获得第三培养的细胞群。
[0020]在一个优选的具体实施例中，所述单核细胞可衍生自周边血、脐带血，或骨髓。
[0021]在一个优选的具体实施例中，所述诱导培养基、所述第一培养基和所述第二培养基可进一步包含造血细胞培养基，优选为AIM
‑
V培养基。
[0022]在一个优选的具体实施例中，所述诱导培养基、所述第一培养基和所述第二培养基可进一步包含血清蛋白，优选为人类血小板裂解物。
[0023]在一个优选的具体实施例中，所述单核细胞可与所述诱导培养基接触约1至3天。
[0024]在一个优选的具体实施例中，所述第一培养的细胞群可与所述第一培养基接触约1至6天。
[0025]在一个优选的具体实施例中，所述第二培养的细胞群可与所述第二培养基接触约1至3天。
[0026]在一个优选的具体实施例中，所述方法可进一步包含在与所述第二培养基接触之后，使所述第三培养的细胞群与包含IL
‑
2、IL
‑
12和IL
‑
18的第三培养基接触以获得第四培养的细胞群。
[0027]在一个优选的具体实施例中，所述第三培养基可进一步包含造血细胞培养基，优选为AIM
‑
V培养基。
[0028]在一个优选的具体实施例中，所述第三培养基可进一步包含血清蛋白，优选为人类血小板裂解物。
[0029]在一个优选的具体实施例中，所述第三培养的细胞群可与所述第三培养基接触约1至3天。
[0030]在一个优选的具体实施例中，所述方法可进一步包含分离具有CD3
Hi
TCR γ9
Hi
TCR δ2
Hi
CXCR4
Hi
表型的经修饰的T细胞。
[0031]本文所述的培养方法允许从固定量的样品(例如，10mL的血液)中分离出大量的经修饰的T细胞。
附图说明
[0032]本申请的说明性具体实施例详细说明如下，并参阅下列图式：
[0033]图1说明确定在表型与功能发展中发挥主要作用的细胞激素混合物的实验设计。
[0034]图2说明在具有单独的IL
‑
2的培养基中培养的用于表达CD69、CD11c、CXCR4和CXCR3的T细胞的流式细胞术图像的集合。特别是，经分离的PBMC首先以唑来膦酸与IL
‑
2进行体外培养。每隔3天将额外的IL...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种经修饰的T细胞，包含CD3
Hi
TCRγ9
Hi
TCRδ2
Hi
CXCR4
Hi
的表型。2.根据权利要求1所述的经修饰的T细胞，进一步包含CD69
Dim
CD11c
Hi
CXCR3
Dim
的表型。3.根据权利要求1所述的经修饰的T细胞，进一步包含IFN
‑
γ
Hi
的表型。4.一种药物组合物，包含(a)根据权利要求1所述的经修饰的T细胞；以及(b)药学上可接受的载体或赋形剂。5.一种治疗癌细胞的方法，包含将有效量的包含根据权利要求1所述的经修饰的T细胞的组合物施用于有需要的受试者。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述有效量为每剂约l
×
103至约l
×
109个细胞。7.根据权利要求5所述的方法，其中所述经修饰的T细胞为自体的或同种异体的。8.根据权利要求5所述的方法，其中所述经修饰的T细胞衍生自周边血、脐带血，或骨髓。9.根据权利要求5所述的方法，进一步包含体外扩增所述经修饰的T细胞。10.一种培养经修饰的T细胞的方法，包含获得包含单核细胞的体液；使所述单核细胞与包含IL
‑
2和唑来膦酸的诱导培养基接触以获得第一培养的细胞群；使所述第一培养的细胞群与包含IL
‑
2的第一培养基接触以获得第二培养的细胞群；以及使所述第二培养的细胞群与包含IL
‑
2和IL
‑
12的第二培养基接触以获得第三培养的细胞群。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述单核细胞衍生自周边血、脐带血，或骨髓。...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建谋，游淳惟，方志豪，郑雅方，
申请(专利权)人：富禾生医股份有限公司，
类型：发明
国别省市：