一种诱导剂、巨噬细胞及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种诱导剂、巨噬细胞及其应用，涉及免疫学、细胞生物学和再生医学交叉领域。本发明专利技术使用骨桥素OPN及其他细胞因子组成的组合物对单核细胞进行培养诱导，能够形成具有较强修复功能的巨噬细胞，这些局势细胞能够应用于组织创面修复，促进慢性难愈合创伤的愈合和组织再生，具有较好的修复效果，适用于推广应用。广应用。广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种诱导剂、巨噬细胞及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫学、细胞生物学和再生医学交叉领域，具体而言，涉及一种诱导剂、巨噬细胞及其应用。

技术介绍

[0002]糖尿病及其并发症严重危害全球人类健康。其中，俗称“糖尿病足”的下肢溃疡，是一种难愈合甚至不愈合的皮肤创伤，已成为下肢截肢的首要原因。然而，对于糖尿病足目前尚无针对性治疗策略或药物，以常规护理和清创为主，治疗效果不佳，复发率高。
[0003]在创伤修复过程中，作为固有免疫系统核心成员的巨噬细胞(及其前体单核细胞)，发挥着关键作用。例如，在创伤早期，这类细胞发挥吞噬病原体、招募细胞、促进血管新生等作用；在修复后期，这类细胞促进成纤维细胞增殖、血管成熟、基质重塑。大量病理学研究表明，在糖尿病创伤局部，巨噬细胞功能的紊乱直接导致该类创伤愈合受阻。在体外对自体来源单核/巨噬细胞的功能进行塑造后移植至创面部位，有望成为促进创面修复的治疗策略。
[0004]目前，国际国内尚无能够有效修复床上的巨噬细胞，鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种诱导剂、巨噬细胞及其应用。
[0006]本专利技术是这样实现的：
[0007]第一方面，本专利技术实施例提供了一种诱导剂，其包括：骨桥素和细胞因子，所述细胞因子选自MIP
‑
2、CCL8、VEGF
‑
B和M
‑
CSF中的至少一种。
[0008]第二方面，本专利技术实施例提供了一种培养基，其包括如前述实施例所述的诱导剂。
[0009]第三方面，本专利技术实施例提供了一种巨噬细胞的制备方法，其包括：采用如前述实施例所述的诱导剂对单核细胞进行诱导分化或采用如前述实施例所述的培养基对单核细胞进行分化培养，以获得用于组织创伤修复的巨噬细胞。
[0010]第四方面，本专利技术实施例提供了一种巨噬细胞，其由前述实施例所述的巨噬细胞的制备方法制备获得。
[0011]第五方面，本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的诱导剂、或如前述实施例所述的培养基，或如前述实施例所述的巨噬细胞在制备用于组织创伤修复的药物中的应用。
[0012]第六方面，本专利技术实施例提供了如前述实施例所述的诱导剂、或如前述实施例所述的培养基，或如前述实施例所述的巨噬细胞在制备用于促血管新生的药物中的应用。
[0013]第七方面，本专利技术实施例提供了一种用于组织创伤修复的药物，其包括如前述实施例所述的巨噬细胞。
[0014]本专利技术具有以下有益效果：
[0015]本专利技术使用骨桥素OPN及其他细胞因子组成的组合物对单核细胞进行培养诱导，能够形成具有较强修复功能的巨噬细胞，这些局势细胞能够应用于组织创面修复，促进慢
性难愈合创伤的愈合和组织再生，具有较好的修复效果，适用于推广应用。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0017]图1为OPN及其他细胞因子的浓度配比；
[0018]图2为试验例1中通过实施例12
‑
14步骤诱导人外周血单核细胞所得的11种修复型巨噬细胞的形态图(与未诱导M0对比)；
[0019]图3为试验例1中的主要基因表达；
[0020]图4为试验例2中可体外促进血管新生；
[0021]图5为试验例3中促进成纤维细胞活化；
[0022]图6为试验例4中在体内促进糖尿病小鼠皮肤创面愈合；
[0023]图7为试验例4中可促进糖尿病小鼠伤口处成纤维细胞的胶原分泌；
[0024]图8为试验例4中可促进糖尿病小鼠伤口处血管新生及成熟。
具体实施方式
[0025]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0026]本专利技术提供了一种诱导剂，其包括：骨桥素和细胞因子，所述细胞因子选自MIP
‑
2、CCL8、VEGF
‑
B和M
‑
CSF中的至少一种。
[0027]骨桥素，(又称骨桥蛋白，英文osteopontin，英文为OPN)是一种糖基化蛋白，作为一种“非胶原”的细胞外基质成分，广泛存在与多种细胞外基质中。
[0028]经一系列创造性劳动，专利技术人发现将OPN和细胞因子组合后用于单核细胞的诱导分化，能获得巨噬细胞相对于通常的巨噬细胞而言，具有较强的修复功能，能够促进创面愈合和组织修复再生。
[0029]当所述诱导剂包括MIP
‑
2时，骨桥素与MIP
‑
2的质量比为(80～120)：(27～47)；
[0030]当所述诱导剂包括CCL8时，骨桥素与CCL8的质量比为(80～120)：(9～29)；
[0031]当所述诱导剂包括VEGF
‑
B时，骨桥素与VEGF
‑
B的质量比为(80～120)：(5～20)；
[0032]当所述诱导剂包括M
‑
CSF时，骨桥素与M
‑
CSF的质量比为(80～120)：(1～18)。
[0033]优选地，按重量份数计，所述诱导剂包括以下组分：80～120份骨桥素，27～47份MIP
‑
2，9～29份CCL8，5～20份VEGF
‑
B以及1～18份M
‑
CSF。在该限定下，诱导剂诱导分化的具有更好的修复功效。
[0034]在一些实施例中，骨桥素的份数可以为80份、85份、90份、95份、100份、105份、110
份、115份或120份；MIP
‑
2的份数可以为27份、30份、35份、40份、45份或47份；CCL8的份数可以为9份、10份、15份、20份、25份或29份；VEGF
‑
B的份数可以为5份、10份、15份或20份；M
‑
CSF的份数可以为1份、5份、10份、15份或18份。
[0035]优选地，所述诱导剂还包括：IL
‑
31、IL
‑
10、TGF
‑
β2和bFGF中的至少一种组分。
[0036]优选地，当所述诱导剂包括IL
‑
31时，IL
‑
31与骨桥素的重量比为(0.06～0.10)：1。在一些实施例中，IL
‑
31与骨桥素的重量比可以为0.06：1、0.08：1或0.10：1。
[0037]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导剂，其特征在于，其包括：骨桥素和细胞因子，所述细胞因子选自MIP
‑
2、CCL8、VEGF
‑
B和M
‑
CSF中的至少一种。2.根据权利要求1所述的诱导剂，其特征在于，按重量份数计，当所述诱导剂包括MIP
‑
2时，骨桥素与MIP
‑
2的质量比为(80～120)：(27～47)；当所述诱导剂包括CCL8时，骨桥素与CCL8的质量比为(80～120)：(9～29)；当所述诱导剂包括VEGF
‑
B时，骨桥素与VEGF
‑
B的质量比为(80～120)：(5～20)；当所述诱导剂包括M
‑
CSF时，骨桥素与M
‑
CSF的质量比为(80～120)：(1～18)。3.根据权利要求1所述的诱导剂，其特征在于，所述诱导剂还包括：IL
‑
31、IL
‑
10、TGF
‑
β2和bFGF中的至少一种组分；优选地，当所述诱导剂包括IL
‑
31时，IL
‑
31与骨桥素的重量比为(0.06～0.10)：1；优选地，当所述诱导剂包括IL
‑
10时，IL
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10与骨桥素的重量比为(0.04～0.08)：1；优选地，当所述诱导剂包括TGF
‑
β2时，TGF
‑
β2与骨桥素的重量比为(0.02～0.06)：1；优选地，当所述诱导剂包括bFGF时，bFGF与骨桥素的重量比为(0.01～0.05)：1。4.一种培养基，其特征在于，其包括如权利要求1～3任一项所述的诱导剂。5.一种修复型巨噬细胞的制备方法，其特征在于，其包括：采用如权利要求1～3任一项所述的诱导剂对待诱导的巨噬细胞进行诱导分化或采用如权利要求4所述的培养基对待诱导的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王春明，母若雨，张哲，
申请(专利权)人：澳门大学，
类型：发明
国别省市：