一种封闭蛋白及制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种封闭蛋白及制备方法和应用，涉及封闭剂技术领域。本发明专利技术以原核表达的方式构建封闭蛋白，所述封闭蛋白可阻断反应体系中的非特异性抗体与固相载体上的靶标结合。本发明专利技术还将该封闭蛋白引入自身抗体的检测体系时，可降低阳性样本及阴性样本中的非特异性背景信号，使待检样本的检测结果呈现出更真实的信号，降低假阳性和假阴性的发生率，进而提高了检测的灵敏度及特异性。提高了检测的灵敏度及特异性。提高了检测的灵敏度及特异性。

【技术实现步骤摘要】
一种封闭蛋白及制备方法和应用


[0001]本专利技术属于封闭剂
，具体涉及一种封闭蛋白及制备方法和应用。

技术介绍

[0002]在体外诊断领域常用的方法学中，常常会用到封闭剂以提高诊断的灵敏度和特异性，如采用封闭剂来阻止反应体系中的蛋白质或生物分子与固相介质间的非特异性吸附，常见的蛋白质类的封闭剂有脱脂奶粉、BSA、酪蛋白、鱼胶及血清等，非蛋白物质有甲醛、Polyvinylpyrrolidone(PVP)、去污剂(吐温
‑
20)等；又如使用封闭剂阻止反应体系中非特异性的蛋白质或生物分子与靶标物质相结合，常见的封闭剂(或阻断物质)为非特异性的鼠、兔、羊、牛等来源的Ig或抗血清，也有使用与靶标物质相同来源的空细胞或转染了空载的细胞制备成的封闭剂以降低非特异性的吸附(申请号：2019107384768，人体液中抗AMPA1自身抗体的检测材料、制备方法及应用)。然而，很多时候，封闭剂未必会起到好的封闭效果，且价格较贵，不易获得。因此，需要进行不断的尝试以找出性价比高的封闭剂。尤其是在现有技术中，尚无一种具有普遍适用性且性价比高的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种封闭蛋白的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将构建得到的过表达外源基因的原核表达载体转入原核细胞，进行诱导表达，收集菌体，得过表达细胞；所述外源基因包括GAPDH或GST；(2)破碎步骤(1)所述过表达细胞，离心取上层悬浊液，将上层悬浊液与保护剂混合，得封闭蛋白。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述原核表达载体包括pET30a、pET22a、pET28a或pET40a。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述原核细胞包括BL21(DE3)、Rosetta
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gami(DE3)或Arctic。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述诱导表达的条件，包括：诱导剂的浓度为0.1～1.5mM；诱导温度为14～22℃；诱导时菌体的OD
600
为0...

【专利技术属性】
技术研发人员：李科，闫亚平，封雪，吴洋，冯昆，刘瑞曼，
申请(专利权)人：陕西脉元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：