一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法技术

本发明专利技术提出一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，包括先准备试验所需要的材料，并对材料进行处理，之后采用热水浸提法提取偏翅唐松草多糖，再利用单因素试验和正交试验对影响偏翅唐松草多糖提取率的四个影响因素进行对比研究，并以多糖提取率为参考指标，其中四个影响因素分别为料液比、提取时间、提取温度和提取次数，继而得出最佳提取工艺，再根据最佳提取工艺进行偏翅唐松草多糖提取，之后并进行抗氧化活性分析，分析出不同浓度多糖溶液对DPPH的清除能力，为偏翅唐松草多糖的药理学活性研究提供数据支持。糖的药理学活性研究提供数据支持。糖的药理学活性研究提供数据支持。

【技术实现步骤摘要】
一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法


[0001]本专利技术涉及偏翅唐松草多糖提取
，尤其涉及一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法。

技术介绍

[0002]偏翅唐松草是四川、云南和西藏地区的一种唐松草，毛茛科唐松草属植物，清热燥湿，降火解毒，偏翅唐松草根及根茎短细，直径约1cm，表面褐色，有一层褐色的纤维，木质的中心部分是淡黄色，味道苦涩，主要用于治疗湿热泻痢、黄疸、白带、风火牙痛、眼睛红肿等。多于春秋两季挖采，清洗其身上泥沙，除去苗和茎后入药。具有多种化学成分，各有不同功效，如多糖，具有抗病毒、抗肿瘤降血糖、降血压、调节免疫力等功效，是偏翅唐松草的重要活性物质之一。
[0003]现阶段常用的植物多糖提取方法有水提醇沉、酸碱浸提、离子交换等方法，这些方法各有优劣，如酶辅助法提取条件温和，可明显提高植物成分的提取效率，但成本较高，微波辅助法能够提升释放多糖的速度，但超声作用时间过长会导致多糖的降分解，影响提取效率，因此本专利技术提出一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法以解决现有技术中存在的问题。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术的目的在于提出一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，该种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法具有成本低、制备效率高的优点，解决现有技术中存在的问题。
[0005]为实现本专利技术的目的，本专利技术通过以下技术方案实现：一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，包括以下步骤：r/>[0006]步骤一：将采集的偏翅唐松草进行风干，再通过粉碎机对风干后的偏翅唐松草进行粉碎，制得偏翅唐松草粉末，再准备提取实验相关的化学试剂，其中化学试剂包括葡萄糖标准品、苯酚、硫酸、无水乙醇、DPPH和甲醇；
[0007]步骤二：称取试验所需的葡萄糖标准品放入容器中，加入纯水并搅拌，直至完全溶解，得到葡萄糖溶液，再吸取不同容量的溶液，分别滴加于试管中，再依次滴加苯酚溶液和硫酸，之后轻微振荡混匀，制得混合溶液；
[0008]步骤三：将混合溶液通过水浴锅进行水浴，水浴后进行自然冷却，冷却后再取各试管中混合溶液置于96孔型细胞培养板，使用酶标仪测定吸光度，根据测定的吸光度以及各试管中葡萄糖不同浓度值绘制标准曲线；
[0009]步骤四：称取试验所需的偏翅唐松草粉末放入容器中，加入纯水，再利用水浴锅进行反复浸提，在多次浸提后收集浸提液并进行过滤，之后使用旋蒸仪将滤液浓缩，再加入乙醇进行混合，混合均匀后静置，待多糖沉降后，进行离心，之后再将沉降物经真空冷冻干燥后即得偏翅唐松草多糖粗提物；
[0010]步骤五：采用苯酚硫酸法进行偏翅唐松草多糖的含量测定；
[0011]步骤六：进行单因素试验，并以多糖提取率为参考指标，采用水提醇沉法研究料液比、提取时间、提取温度和提取次数四个影响因素对偏翅唐松草多糖提取率的影响，并利用正交设计试验优化偏翅唐松草多糖提取工艺。
[0012]进一步改进在于：所述步骤一中，对制得的偏翅唐松草粉末通过干燥机进行干燥。
[0013]进一步改进在于：所述步骤四中，在水浴锅内单次浸提时间为30
‑
60min。
[0014]进一步改进在于：所述步骤六中，研究不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
[0015]在多组不同料液比(1：20，1：30，1：40，1：50，1：60)的条件下，80℃煎煮2次，每次70min，滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
[0016]进一步改进在于：所述步骤六中，研究不同提取时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
[0017]料液比为1：20，温度80℃时分别煎煮30min、50min、70min、90min、110min，2次水煎，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后即得偏翅唐松草多糖，测定不同煎煮时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
[0018]进一步改进在于：所述步骤六中，研究不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
[0019]料液比为1：20，单次煎煮时间为70min时，将煎煮温度设置为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃，煎煮2次，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同提取温度对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
[0020]进一步改进在于：所述步骤六中，研究不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：
[0021]料液比为1：20，水煎温度为80℃，单次煎煮时间为70min，分别提取1、2、3、4、5次，收集滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同提取次数对偏翅唐松草多糖提取率的影响。
[0022]进一步改进在于：所述步骤六中，以单因素试验结果为依据，选取最佳的单因素水平作为正交设计试验的优化条件，在此基础上采用正交表进行正交设计试验，通过对正交试验的结果进行分析，筛选出最佳提取条件。
[0023]一种翅唐松草多糖的抗氧化活性分析方法，包括以下步骤：
[0024]S1：取试验所需的偏翅唐松草多糖，分别配制20、40、60、80、100、120mg/mL偏翅唐松草多糖溶液；
[0025]S2：称取2mgDPPH粉末，再加入40mL无水乙醇摇匀配制为0.5mg/mL的DPPH溶液；
[0026]S3：吸取100μL不同浓度的偏翅唐松草多糖提取液于96孔细胞培养板中，向其中加入100μLDPPH溶液，其中空白对照组以100μL纯水替代，之后将96孔型细胞培养板放于37℃避光条件下30min，结束后于酶标仪517nm处测定光密度OD值；
[0027]S4：测定空白对照在517nm处的光密度OD，测定不同浓度多糖溶液在517nm处的光密度OD0，测定DPPH溶液在517nm处的光密度OD1，再根据如下公式计算出不同浓度多糖溶液对DPPH的清除能力：
[0028][0029]本专利技术的有益效果为：该种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法操作简单，成本低，通过热水浸提法提取偏翅唐松草多糖，采用单因素试验和正交试验对影响偏翅唐松草多糖提取率的四个影响因素进行对比研究，得出最佳提取工艺，再根据最佳提取工艺进行偏翅唐松草多糖提取并进行抗氧化活性分析，继而确保了偏翅唐松草多糖的提取效率，同时，抗氧化活性分析结果可为偏翅唐松草多糖的药理学活性研究提供数据支持。
附图说明
[0030]图1是本专利技术的流程示意图。
[0031]图2是本专利技术的葡萄糖浓度标准曲线示意图。
[0032]图3是本专利技术的不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响示意图。
[0033]图4是本专利技术的不同提取时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响示意图。
[0034]图5是本专利技术的不同提取本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：将采集的偏翅唐松草进行风干，再通过粉碎机对风干后的偏翅唐松草进行粉碎，制得偏翅唐松草粉末，再准备提取实验相关的化学试剂，其中化学试剂包括葡萄糖标准品、苯酚、硫酸、无水乙醇、DPPH和甲醇；步骤二：称取试验所需的葡萄糖标准品放入容器中，加入纯水并搅拌，直至完全溶解，得到葡萄糖溶液，再吸取不同容量的溶液，分别滴加于试管中，再依次滴加苯酚溶液和硫酸，之后轻微振荡混匀，制得混合溶液；步骤三：将混合溶液通过水浴锅进行水浴，水浴后进行自然冷却，冷却后再取各试管中混合溶液置于96孔型细胞培养板，使用酶标仪测定吸光度，根据测定的吸光度以及各试管中葡萄糖不同浓度值绘制标准曲线；步骤四：称取试验所需的偏翅唐松草粉末放入容器中，加入纯水，再利用水浴锅进行反复浸提，在多次浸提后收集浸提液并进行过滤，之后使用旋蒸仪将滤液浓缩，再加入乙醇进行混合，混合均匀后静置，待多糖沉降后，进行离心，之后再将沉降物经真空冷冻干燥后即得偏翅唐松草多糖粗提物；步骤五：采用苯酚硫酸法进行偏翅唐松草多糖的含量测定；步骤六：进行单因素试验，并以多糖提取率为参考指标，采用水提醇沉法研究料液比、提取时间、提取温度和提取次数四个影响因素对偏翅唐松草多糖提取率的影响，并利用正交设计试验优化偏翅唐松草多糖提取工艺。2.根据权利要求1所述的一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：所述步骤一中，对制得的偏翅唐松草粉末通过干燥机进行干燥。3.根据权利要求1所述的一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：所述步骤四中，在水浴锅内单次浸提时间为30
‑
60min。4.根据权利要求1所述的一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：所述步骤六中，研究不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：在多组不同料液比(1：20，1：30，1：40，1：50，1：60)的条件下，80℃煎煮2次，每次70min，滤液浓缩后加入95％乙醇静置12h，待多糖沉降，经真空冷冻干燥后得偏翅唐松草多糖，测定不同料液比对偏翅唐松草多糖提取率的影响。5.根据权利要求1所述的一种偏翅唐松草多糖提取方法及其抗氧化活性分析方法，其特征在于：所述步骤六中，研究不同提取时间对偏翅唐松草多糖提取率的影响步骤为：料液比为1：20，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈朝喜，仁科，唐木克，索朗扎西，
申请(专利权)人：西南民族大学，
类型：发明
国别省市：