一种SM融合抗原及抗Sm抗体化学发光检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于基因工程及医学检测技术领域，公开了一种Sm融合抗原及抗Sm抗体化学发光检测试剂盒。通过融合蛋白序列设计：人工合成SmB除去脯氨酸富集区的剩余序列+SmD1+SmD2+SmD3最高抗原原性序列的基因，然后克隆至大肠杆菌表达载体，得到重组质粒；将重组质粒转化至感受态细胞进行表达，得到Sm融合抗原。所述抗Sm抗体化学发光检测试剂盒包括包被Sm融合抗原的磁性微球反应液、吖啶酯或吖啶磺酰胺标记的羊抗人IgG抗体和发光底物。本发明专利技术通过改进后的抗原，提高试剂性能：采用重点富集强免疫原性区域的方式，可增强抗体检测的灵敏度；同时通过序列优化，规避与抗RNP抗体的交叉反应，极大程度提高检测特异性。大程度提高检测特异性。大程度提高检测特异性。

【技术实现步骤摘要】
一种Sm融合抗原及抗Sm抗体化学发光检测试剂盒


[0001]本专利技术属于基因工程及医学检测
，具体涉及一种Sm融合抗原及抗Sm抗体化学发光检测试剂盒。

技术介绍

[0002]抗Sm抗体在红斑狼疮患者中的一般流行率为5
‑
30％，是红斑狼疮的一类特异诊断抗体。但其检测特异性根据受测人群的种族、基因差异，以及检测方法学的不同而有所差异。Sm抗原本质上是一类蛋白复合物，其功能是剪切核内的mRNA前体，将其变成成熟的mRNA。Sm这类剪切蛋白复合物主要由9种核心蛋白多肽构成，其中包括SmB/B
’
，SmN，SmD1，SmD2，SmD3，SmE，SmF及SmG。虽然在Sm抗原蛋白复合物中，B，B
’
，N，D1，D2，D3，E，F及G这9类核心多肽都可作为抗Sm抗体的靶抗原，但最主要的抗原反应来自于SmB及SmD家族。由于Sm抗原蛋白复合物的多样性，在进行天然Sm抗原蛋白分离纯化时，无法保证所得到复合物中的SmD及SmB肽段含量占据优势比例，因此无法保证检测的高灵敏度。同时，由于Sm抗原在核内多本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Sm融合抗原的表达方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)融合蛋白序列设计：SmB除去脯氨酸富集区的剩余序列SmB
‑1‑
190aa+连接序列GGGS+SmD1
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83
‑
119aa+连接序列GGGS+SmD2线性表位区域肽段序列SmD2
‑
F+连接序列GGGS+SmD3
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76
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106aa；所述SmB
‑1‑
190aa序列为：DGRIFIGTFKAFDKHMNLILCDCDEFRKIKPKNAKQPEREEKRVLGLVLLRGENLVSMTVEGPPPKDTGIARVPLAGAAGGPGVGRAAGRGVPAGVPIPQAPAGLAGPVRGVGGPSQQVMTPQGRGTVAAAAVAATASIAGAPTQYPPGRGTPPPPVGRATPPPGIMAPPPGMRPPMGPPIGLPPARGTP(SEQ ID NO：1)；所述SmD1
‑
83
‑
119aa序列为VEPKVKSKKREAVAGRGRGRGRGRGRGRGRGRGGPRR(SEQ ID NO：2)；所述SmD3
‑
76
‑
106aa序列为MLKNAPMLKSMKNKNQGSGAGRGKAAILKAQ(SEQ ID NO：4)；(2)人工合成步骤(1)融合蛋白的基因，然后克隆至大肠杆菌表达载体，得到重组质粒；(3)将步骤(2)的重组质粒转化至感受态细胞进行Sm融合抗原的表达。2.根据权利要求1所述的一种Sm融合抗原的表达方法，其特征在于，步骤(1)中所述SmD2
‑
F序列为含SmD2最高抗原源性肽段KPV NKDR(SEQ ID NO：3)的序列。3.根据权利要求1所述的一种Sm融合抗原的表达方法，其特征在于，步骤(2)中所述大肠杆菌表达载体为pET
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28a(+)；步骤(3)中所述感受态细胞为大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞；所述重组质粒转化至感受态细胞进行Sm融合抗原的表达的具体步骤如下：A)取重组质粒加入到BL21(DE3)感受态细胞中混匀，冰上静置10～30min，42℃水浴热激45～90sec后，立即置于冰上冷却2～3min，加入LB培养基，37℃及转速15...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟铃，周鹏程，赖华，
申请(专利权)人：广东优尼德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：