大肠杆菌表达载体及其构建方法、应用技术

本发明专利技术公开了一种大肠杆菌表达载体及其构建方法、应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术解决了现有大肠杆菌载体在基因表达过程中表达效率低，从而导致其应用于色氨酸生产中色氨酸产率低的问题。所述大肠杆菌表达载体含有一个在大肠杆菌中具有功能的人工合成启动子序列、一段供外源基因插入表达的多克隆位点序列、一个人工转录终止序列、一个可以在大肠杆菌中进行基因克隆表达的抗性筛选标记。所述大肠杆菌表达载体可以实现基因的高效转录与翻译。本发明专利技术的大肠杆菌表达载体适用于色氨酸的生产。生产。

【技术实现步骤摘要】
大肠杆菌表达载体及其构建方法、应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及一种菌类的表达载体及其构建方法。

技术介绍

[0002]大肠杆菌的遗传背景清楚，经常会被用作进行大规模发酵培养，它的主要表现在表达周期短、操作相对简单且可利用的表达载体数量较多，但在基因表达的过程中，也存在表达效率不高而导致产率低等问题。影响基因表达效率的因素主要与目的基因的量、mRNA的稳定性、发酵培养条件的控制、载体的选择及启动子强度和翻译起始效率等因素有着很大的关系。

技术实现思路

[0003]本专利技术解决了现有大肠杆菌载体在基因表达过程中表达效率低，从而导致其应用于色氨酸生产中色氨酸产率低的问题。
[0004]为此，本专利技术提出如下技术方案：
[0005]方案一、一种大肠杆菌表达载体，所述大肠杆菌载体应用于生产色氨酸，大肠杆菌表达载体含有一个在大肠杆菌中具有功能的人工合成启动子序列，含有一段供外源基因插入表达的多克隆位点序列，含有一个人工转录终止序列，含有一个可以在大肠杆菌中进行基因克隆表达的抗性筛选标记。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大肠杆菌表达载体，其特征在于，所述大肠杆菌载体应用于生产色氨酸，大肠杆菌表达载体含有一个在大肠杆菌中具有功能的人工合成启动子序列，含有一段供外源基因插入表达的多克隆位点序列，含有一个人工转录终止序列，含有一个可以在大肠杆菌中进行基因克隆表达的抗性筛选标记。2.根据权利要求1所述的大肠杆菌载体，其特征在于，所述人工合成启动子核苷酸序列为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的大肠杆菌载体，其特征在于，所述供外源基因插入表达的多克隆位点序列为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的大肠杆菌载体，其特征在于，所述人工转录终止子核苷酸序列为SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。5.一种大肠杆菌表达载体的构建方法为：(1)、以pTH18kr作为载体骨架，将人工合成的启动子与终止子连接至pTH18kr上，获得的载体序列记为XYWa0；(2)、以野生型大肠杆菌MG1655为模板，利用Gibson Assembly方法，利用引物P1、P2扩增trpE、trpD、trpC、trpB、trpA基因序列，获得的目的片段记为P12；(3)、以步骤(1)所述的XYWa0做为模板，使用EcoRⅠ和KpnⅠ进行酶切，酶切后回收长度为3088bp的片段，以回收产物为模板利用引物P3、P4进行PCR扩增，获得的目的片...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢煜，曹国强，张宇擎，佟小雪，周国旺，李婧瑶，邹德勇，杨娜，李雪姚，杨雪，
申请(专利权)人：黑龙江金象生化有限责任公司，
类型：发明
国别省市：