一种获得目标蛋白的方法、融合蛋白、载体及应用技术

本申请的实施例公开了一种获得目标蛋白的方法、融合蛋白、载体及应用。所述获得目标蛋白的方法包括：用包含编码目标蛋白的核酸的表达载体转化大肠杆菌细胞，培养所述大肠杆菌细胞的步骤；其中，所述目标蛋白以形成融合蛋白的形式进行表达，所述融合蛋白包含：目标蛋白；在N末端的S标签；以及在C末端的靶向序列，所述靶向序列使所述融合蛋白靶向至大肠杆菌细胞胞外域。本申请提供的方法能够实现高效的目标蛋白的胞外分泌表达，目标蛋白可以在较短时间内大量分泌表达，且可直接从培养基进行蛋白的提取或检测。提取或检测。提取或检测。

【技术实现步骤摘要】
一种获得目标蛋白的方法、融合蛋白、载体及应用


[0001]本申请一般涉及医药
，一种获得目标蛋白的方法、融合蛋白、载体及应用。

技术介绍

[0002]大肠杆菌是表达外源蛋白最常用的宿主菌之一，具有生长周期短，培养成本低，适合工业化生产等特点。但是由于它大多将外源蛋白滞留在菌体内部，导致蛋白不能正确折叠或者被降解而失去活性，使得目的蛋白的提取和纯化过程较为繁琐，分泌表达是解决上述问题的有效方法之一。
[0003]大肠杆菌共有五种类型的分泌系统，其中广泛用于分泌重组蛋白的主要是I型和II型分泌系统。相较于II型系统的周质表达，I型分泌系统介导的跨膜孔道直接外排更有优势，其能避免周质蛋白酶的降解，不需要破碎细胞，回收与纯化更能容易操作；另外，培养基中空间足够大，利于外源蛋白的过量表达。然而现有的I型分泌系统对外源蛋白的分泌表达效率非常低，相关研究也较少，远远达不到实际应用的需求。
[0004]有鉴于此，特提出本申请。

技术实现思路

[0005]本申请的一个目的是提供一种获得目标蛋白的方法，所述方法至少通过对位于融本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种获得目标蛋白的方法，其特征在于，包括：用包含编码目标蛋白的核酸的表达载体转化大肠杆菌细胞，培养所述大肠杆菌细胞的步骤；其中，所述目标蛋白以形成融合蛋白的形式进行表达，所述融合蛋白包含：目标蛋白；在N末端的S标签；以及在C末端的靶向序列，所述靶向序列使所述融合蛋白靶向至大肠杆菌细胞胞外域。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶向序列包含溶血素A信号肽。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白还包含选自His标签、GST标签、Strep标签和MBP标签中任意一种或多种标签序列，所述标签序列位于所述目标蛋白与所述靶向序列之间。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述标签序列为两个，分别位于所述目标蛋白与所述靶向序列之间，以及所述S标签与所述目标蛋白之间。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白还包含两个分别位于在所述目标蛋白的N端和C端的蛋白酶识别序列。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶识别序列选自TEV蛋白酶识别序列、凝血酶识别序列、肠激酶识别序列、3C蛋白酶识别序列和内含肽中的至少一种。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：收集并纯化培养液上清，使纯化后的所述培养液上清与蛋白酶接触，以便获得游离的目标蛋白，其中所述蛋白酶基于所述蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：路慧丽，朱文，
申请(专利权)人：上海妙聚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：