【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外诊断，具体涉及一种功能化磁性微球、制备方法及酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒。
技术介绍
1、酪氨酸磷酸酶ica512，又称ia-2，是蛋白质酪氨酸磷酸酶家族的成员，位于胰腺β细胞的致密颗粒中。酪氨酸磷酸酶自身抗体(ia-2a)是由机体免疫系统所产生的抗胰岛细胞中酪氨酸磷酸酶的抗体。它与谷氨酸脱羧酶抗体(gada)、胰岛素自身抗体(iaa)、酪氨酸磷酸酶抗体(znt-8a)及胰岛细胞抗体(ica)等自身抗体均隶属于胰岛自身抗体，是胰岛β细胞遭受自身免疫损害的标志物，是诊断自身免疫性糖尿病，包括1型糖尿病及成人隐匿性自身免疫糖尿病(lada)的关键指标，用于自身免疫性糖尿病与2型糖尿病的鉴别。
2、临床检测酪氨酸磷酸酶抗体的常见方法有免疫荧光法、酶联免疫吸附法和化学发光法。但免疫荧光法操作相对复杂，对设备要求较高，成本较高。酶联免疫吸附法成本较低，但操作繁琐，检测结果的准确度和精密度较差。磁微粒化学发光技术相比上述技术具有操作简单、检测结果准确的优势，因此得到了广泛的应用。cn 107044977 a公开了一种酪氨酸磷酸酶抗体化学发光免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括：纯化的酪氨酸磷酸酶包被的磁微粒工作液、吖啶酯标记的纯化的酪氨酸磷酸酶工作液、酪氨酸磷酸酶抗体定标品、预激发液、激发液。cn 113917142a公开了一种酪氨酸磷酸酶自身抗体磁微粒化学发光免疫检测的试剂盒及制备方法和检测方法。包括：磁性颗粒-抗生物素抗体溶液、生物素标记的酪氨酸磷酸酶抗原溶液和酶标记的抗酪氨酸磷酸酶抗体溶液。上述现有技术采用的磁微
3、专利cn 112877387 a及cn 113564213 a均公开了一种生物磁性微球的制备方法和在抗体类物质等目标物的分离纯化应用。首先利用硅烷偶联剂对磁性微球本体进行化学修饰，得到磁性微球a；然后将丙烯酸分子共价偶联到所述磁性微球a的外表面，引入碳碳双键，形成含碳碳双键磁性微球b；利用碳碳双键的聚合反应，将丙烯酸类单体分子(如丙烯酸钠)进行聚合，获得的丙烯酸类聚合物链具有线性主链和含有功能基团的支链，聚合物通过线性主链的一端共价偶联于磁性微球b的外表面，形成丙烯酸类聚合物修饰磁性微球c；通过所述聚合物的支链含有的功能基团，共价地偶联生物素，得到生物素修饰的生物磁性微球d；通过生物素与亲和素之间的特异性结合作用，将亲和素-亲和蛋白共价连接复合物e结合到聚合物支链末端，生物素与亲和素之间形成亲和复合物的结合作用，获得亲和蛋白修饰的生物磁性微球(亲和蛋白磁性微球)。上述方法虽然有效的提高了磁性微球与蛋白的结合效果，但硅烷偶联剂修饰可控性及均匀性较差，其自身的交联反应会导致表面修饰效果的降低及活性的降低；另外生物素与亲和素反应系统增加了制备流程，且丙烯酸类聚合物的聚合包覆过程较为复杂，可控性差；同时过多的表面包覆层也会在一定程度上降低磁性微球的磁分离效果。
技术实现思路
1、针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本专利技术的首要目的在于提供一种功能化磁性微球的制备方法。本专利技术的功能化磁性微球通过对普通磁珠或是二氧化硅包覆磁珠进行简单一步功能化mq硅树脂包覆，具有功能化基团修饰效果好、活性位点多的优点，可显著提高与抗原抗体的亲和力和特异性结合能力，在无需采用生物素-链霉亲和素放大系统的情况下，可显著提高磁分离效果及检测灵敏度。
2、本专利技术的另一目的在于提供一种通过上述方法制备得到的功能化磁性微球。
3、本专利技术的再一目的在于提供一种包含上述功能化磁性微球的酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒。
4、本专利技术目的通过以下技术方案实现：
5、一种功能化磁性微球的制备方法，包括如下制备步骤：
6、将硅酸酯、活性封端剂和磁珠本体加入到溶剂中搅拌混合均匀，惰性气氛保护下升温至60～90℃，然后滴加酸催化剂溶液进行搅拌反应，反应完成后经过滤、洗涤、干燥，得到功能化磁性微球。
7、进一步地，所述硅酸酯为硅酸钠、正硅酸甲酯和正硅酸乙酯中的至少一种。
8、进一步地，所述活性封端剂为1,3-双(氨丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-双(3-羧基丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-双(3-羟基丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-双(巯基丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-二(3-缩水甘油丙基)四甲基二硅氧烷中的至少一种。
9、进一步地，步骤(1)中所述磁珠本体选自平均粒径为0.1～10μm的四氧化三铁磁珠或二氧化硅包覆四氧化三铁磁珠。更优选为二氧化硅包覆四氧化三铁磁珠。通过采用二氧化硅包覆四氧化三铁磁珠能够在mq硅树脂的生成过程中提高良好的结合位点，进一步改善包覆效果。
10、进一步地，步骤(1)中所述硅酸酯、活性封端剂和磁珠本体加入的质量比为10:0.5～2:10～50。
11、进一步地，步骤(1)中所述溶剂选择为能溶解或部分溶解反应原料硅酸酯和活性封端剂，但不溶解反应产物mq硅树脂的溶剂。具体可选择为水和小分子醇的混合溶剂，如水和乙醇的混合溶剂、水和异丙醇的混合溶剂等；所述水和小分子醇混合的体积比为4～7:6～3。
12、进一步地，步骤(1)中所述酸催化剂溶液选自盐酸溶液或硫酸溶液；所述搅拌反应的时间为1～4h。
13、上述功能化磁性微球的制备原理为：将mq硅树脂合成单体和磁珠本体分散于特定溶剂中，通过后续的酸催化mq硅树脂聚合反应，磁珠本体能够为mq硅树脂的内核形成提供结合位点，最终生成的mq硅树脂在磁珠本体表面原位析出，实现对磁珠本体颗粒的良好包覆。所得功能化磁性微球的结构示意图如图1所示。磁珠本体颗粒与mq硅树脂内核紧密结合，同时最外层均匀分布大量活性功能基团，可显著提高与抗原抗体的亲和力和特异性结合能力，从而提高磁分离效果及检测灵敏度。
14、一种功能化磁性微球，通过上述方法制备得到。
15、一种酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，包括酪氨酸磷酸酶抗原包被的功能化磁性微球溶液、羊抗人igg抗体荧光标记物溶液、样本稀释液、校准品溶液和化学发光底物液。
16、进一步地，所述羊抗人igg抗体荧光标记物溶液是指羊抗人igg抗体吖啶酯标记物溶液。
17、进一步地，所述酪氨酸磷酸酶抗原包被的功能化磁性微球溶液的浓度为1～10mg/ml；所述羊抗人igg抗体荧光标记物溶液的浓度为0.1～1mg/ml。
18、进一步地，所述样本稀释液为包含0.2％～1％牛血清白蛋白、0.05％～0.2％表面活性剂和0.05％～0.2％防腐剂的磷酸盐缓冲液。
19、进一步地，所述校准品溶液包含浓度分别为5.00iu/ml、50.00iu/ml和500.00iu/ml的酪氨酸磷酸酶抗体标准品溶液。
20、进一步地，所述化学发光底物液包含浓度为0.05～0.25mol/l的naoh溶液和浓度为0.05～0.2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种功能化磁性微球的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：
2.根据权利要求1所述的一种功能化磁性微球的制备方法，其特征在于，所述硅酸酯为硅酸钠、正硅酸甲酯和正硅酸乙酯中的至少一种；所述活性封端剂为1,3-双(氨丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-双(3-羧基丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-双(3-羟基丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-双(巯基丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-二(3-缩水甘油丙基)四甲基二硅氧烷中的至少一种；所述磁珠本体选自平均粒径为0.1～10μm的四氧化三铁磁珠或二氧化硅包覆四氧化三铁磁珠。
3.根据权利要求2所述的一种功能化磁性微球的制备方法，其特征在于，所述硅酸酯、活性封端剂和磁珠本体加入的质量比为10:0.5～2:10～50。
4.根据权利要求1所述的一种功能化磁性微球的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述溶剂选择为水和小分子醇的混合溶剂，所述水和小分子醇混合的体积比为4～7:6～3。
5.一种功能化磁性微球，其特征在于，通过权利要求1～4任一项所述的方法制备得到。
6.一种酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒
7.根据权利要求6所述的一种酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述羊抗人IgG抗体荧光标记物溶液是指羊抗人IgG抗体吖啶酯标记物溶液。
8.根据权利要求6所述的一种酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述酪氨酸磷酸酶抗原包被的功能化磁性微球溶液的浓度为1～10mg/mL；所述羊抗人IgG抗体荧光标记物溶液的浓度为0.1～1mg/mL。
9.根据权利要求6所述的一种酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液为包含0.2％～1％牛血清白蛋白、0.05％～0.2％表面活性剂和0.05％～0.2％防腐剂的磷酸盐缓冲液。
10.根据权利要求6所述的一种酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，其特征在于，所述校准品溶液包含浓度分别为5.00IU/mL、50.00IU/mL和500.00IU/mL的酪氨酸磷酸酶抗体标准品溶液；所述化学发光底物液包含浓度为0.05～0.25mol/L的NaOH溶液和浓度为0.05～0.2mol/L的H2O2溶液。
...【技术特征摘要】
1.一种功能化磁性微球的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：
2.根据权利要求1所述的一种功能化磁性微球的制备方法，其特征在于，所述硅酸酯为硅酸钠、正硅酸甲酯和正硅酸乙酯中的至少一种；所述活性封端剂为1,3-双(氨丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-双(3-羧基丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-双(3-羟基丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-双(巯基丙基)四甲基二硅氧烷、1,3-二(3-缩水甘油丙基)四甲基二硅氧烷中的至少一种；所述磁珠本体选自平均粒径为0.1～10μm的四氧化三铁磁珠或二氧化硅包覆四氧化三铁磁珠。
3.根据权利要求2所述的一种功能化磁性微球的制备方法，其特征在于，所述硅酸酯、活性封端剂和磁珠本体加入的质量比为10:0.5～2:10～50。
4.根据权利要求1所述的一种功能化磁性微球的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述溶剂选择为水和小分子醇的混合溶剂，所述水和小分子醇混合的体积比为4～7:6～3。
5.一种功能化磁性微球，其特征在于，通过权利要求1～4任一项所述的方法制备得到。
6.一种酪氨酸磷酸酶抗体测定试剂盒，其特征在于，包括酪氨酸磷酸酶抗原包被的功能化...
【专利技术属性】
技术研发人员：钟铃，周鹏程，赖华，吴秋凤，丘招胜，
申请(专利权)人：广东优尼德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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