一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，包括如下步骤：S1，在超纯水中分别加入273.6mmol/L NaCl，5.2mmol/L KCl，16.2mmol/LNa2HPO4和3.5mmol/L KH2PO4，制备成0.02mol/L磷酸盐缓冲液，用水为2

【技术实现步骤摘要】
一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法
[0001]本申请是名为《一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法》的专利申请的分案申请，原申请的申请日为2022年03月07日，申请号为202210217290.X。


[0002]本专利技术涉及细胞处理液
，特别是涉及一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法。

技术介绍

[0003]尿液由肾脏产生，经由输尿管到膀胱储存，然后经过尿道排除体外。由于尿液的生理特质，尿液样本在临床检测常见、并对于泌尿系统肿瘤是十分优秀的液态活检样本来源，其中尿液细胞学检查是用于发现泌尿系统恶性肿瘤的一种病理学检查方法。
[0004]由于尿脱落细胞含量较少，其中异常细胞比例更少，为保证足够脱落细胞量，通常需要晨尿样本，尿量多，细胞含量高，但由于晨尿更加浓缩，尿素等有机成分浓度高，Ph值偏低，渗透压也不利于细胞保存，因此对于尿液异常细胞等检查通常要求尿液常温不能超过2小时，4℃也仅能保存4小时，这极大限制了尿液异常细胞检查的应用。而目前对于细胞保存的产品大多只能对细胞的形态、DNA等进行维持，对于RNA保存的产品较少。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，使尿液细胞在检查之前可以保持更长时间，方便进行后续细胞形态学和核酸异常检查。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，包括如下步骤：
[0008]S1，在超纯水中分别加入273.6mmol/LNaCl，5.2mmol/LKCl，16.2mmol/LNa2HPO4和3.5mmol/LKH2PO4，制备成0.02mol/L磷酸盐缓冲液，用水为2
‰
的DEPC水；
[0009]S2，将制备好的0.02mol/L磷酸盐缓冲液与乙醇/甲醇1：1互溶；
[0010]S3，加入3％的聚乙二醇1500，2％的巯基乙醇，0.1％的二硫苏糖醇，0.1％的吐温
‑
20；
[0011]S4，再加入0.83％氯化铵，0.1％碳酸氢钾，0.04％的乙二胺四乙酸二钠；
[0012]所述磷酸缓冲液用于渗透压维持剂；所述乙醇/甲醇/EDTA
‑
Na用于固定剂，抑制细菌；所述聚乙二醇1500用于保持细胞骨架完整性，防止细胞肿胀；所述二硫苏糖醇用于粘液溶解剂；所述乙二胺四乙酸用于抗聚集试剂，避免细胞堆积；所述氯化铵和所述碳酸氢钾用于裂解红细胞利用所述尿液脱落细胞预处理液的制备方法所制备的细胞预处理液的CT值小于20。
[0013]根据本专利技术提供的具体实施例，本专利技术公开了以下技术效果：
[0014]本专利技术使尿液细胞在检查之前可以保持更长时间，可以保持尿液中的细胞，在室
温下保存3
‑
5天，保存的细胞可以直接进行后续细胞学检测及核酸检测等。
具体实施方式
[0015]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0016]在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域技术人员显式地和隐式地理解的是，本文所描述的实施例可以与其它实施例相结合。
[0017]本申请的说明书和权利要求书中的术语“第一”、“第二”、“第三”和“第四”等是用于区别不同对象，而不是用于描述特定顺序。此外，术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤、过程、方法等没有限定于已列出的步骤，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤元。
[0018]为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。
[0019]实施例1
[0020]一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，包括如下步骤：
[0021]S1，在超纯水中分别加入273.6mmol/L NaCl，5.2mmol/L KCl，16.2mmol/LNa2HPO4和3.5mmol/L KH2PO4，制备成0.02mol/L磷酸盐缓冲液，用水为2
‰
的DEPC水；
[0022]S2，将制备好的0.02mol/L磷酸盐缓冲液与乙醇/甲醇1：1互溶；
[0023]S3，加入3％的聚乙二醇1500，2％的巯基乙醇，0.1％的二硫苏糖醇，0.1％的吐温
‑
20；
[0024]S4，再加入0.83％氯化铵，0.1％碳酸氢钾，0.04％的乙二胺四乙酸二钠。
[0025]上述实施例中，各组分技术原理：
[0026]磷酸缓冲液：渗透压维持剂；
[0027]乙醇/甲醇/EDTA
‑
Na：固定剂，抑制细菌；
[0028]聚乙二醇1500：保持细胞骨架完整性，防止细胞肿胀；
[0029]二硫苏糖醇：粘液溶解剂；
[0030]乙二胺四乙酸：抗聚集试剂，避免细胞堆积；
[0031]氯化铵，碳酸氢钾：裂解红细胞。
[0032]实施例2
[0033]如表1所示，采用实施例1的一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法所制备的细胞预处理液，RNA保存效果良好。
[0034]表1细胞保存液处理后的RNA保存效果
[0035][0036]本专利技术一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，使尿液细胞在检查之前可以保持更长时间，可以保持尿液中的细胞，在室温下保存3
‑
5天，保存的细胞可以直接进行后续细胞学检测及核酸检测等。
[0037]本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
[0038]本文中应用了具体个例对本专利技术的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本专利技术的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本专利技术的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处。综上所述，本说明书内容不应理解为对本专利技术的限制。
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种尿液脱落细胞预处理液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，在超纯水中分别加入273.6mmol/L NaCl，5.2mmol/L KCl，16.2mmol/LNa2HPO4和3.5mmol/L KH2PO4，制备成0.02mol/L磷酸盐缓冲液，用水为2
‰
的DEPC水；S2，将制备好的0.02mol/L磷酸盐缓冲液与乙醇/甲醇1：1互溶；S3，加入3％的聚乙二醇1500，2％的巯基乙醇，0.1％的二硫苏糖醇，0.1％的吐温
...

【专利技术属性】
技术研发人员：代晓阳，张燕，赵家熙，杨晓春，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：