一种细胞运输的方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体的，涉及一种细胞运输的方法。本发明专利技术将细胞与材料混合后可以直接进行常温运输，或者将细胞与材料混合进行三维培养后进行常温运输，运输过程中细胞保持高活率，可达80％以上，运输后细胞/材料混合物可以直接使用，或者将细胞分离出来使用。或者将细胞分离出来使用。或者将细胞分离出来使用。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞运输的方法


[0001]本专利技术涉及一种生物技术，具体涉及一种细胞运输的方法。

技术介绍

[0002]细胞治疗作为一种安全有效的治疗手段，已广泛应用于免疫性疾病、癌症、遗传疾病等临床研究，其涉及细胞采集、培养扩增、基因修饰、细胞回输/移植治疗等环节。由于各环节实施地点或时间并不一致，往往要求治疗中所使用的细胞在不同地点之间按时运输。细胞运输问题的高效解决成为细胞治疗成败的关键因素之一。
[0003]目前细胞运输方法主要有冷冻储存运输和充液常温运输两种。其中，冷冻储存运输是将细胞冷冻后置于装有液氮或干冰的特殊容器内进行的，保存效果较好，但是程序繁杂，不适合长时间运输，一般采用空运，成本较高；充液常温运输是将细胞培养液充满细胞贴壁的培养瓶进行的，简单实用，但运输中容易发生培养液涌动，导致细胞剥落，严重影响细胞活性。
[0004]因此，急需一种成本低、简便易行、运输过程中基本不影响细胞活性的细胞运输方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是提供一种成本低、简便易行、运输过程中基本不影响细胞活性的细胞运输的方法。
[0006]本专利技术一种细胞运输的方法，其中，依次包括如下步骤：
[0007](1)将生物材料水溶液从4℃冰箱取出，吸取适量生物材料水溶液与细胞均匀混合；
[0008](2)将步骤(1)中细胞/材料混合物置于37℃条件中形成包裹细胞的水凝胶结构；
[0009](3)将步骤(2)中水凝胶结构置于细胞培养液中进行运输；/>[0010](4)将步骤(3)中运输后的水凝胶结构置于4℃条件中去除材料，离心分离细胞。
[0011]一种细胞运输的方法，其中，依次包括如下步骤：
[0012](1)将生物材料水溶液从4℃冰箱取出，吸取适量生物材料水溶液与细胞均匀混合；
[0013](2)将步骤(1)中细胞/材料混合物置于37℃条件中形成包裹细胞的水凝胶结构；
[0014](3)将步骤(2)中水凝胶结构置于细胞培养液中在细胞培养箱进行三维细胞培养；
[0015](4)将步骤(3)中培养后的水凝胶结构置于细胞培养液中进行运输；
[0016](5)将步骤(4)中运输后的水凝胶结构置于4℃条件中去除材料，离心分离细胞。
[0017]本专利技术一种细胞运输的方法，其中，各方法中生物材料包括泊洛沙姆、胶原、肽类材料、壳聚糖及其衍生物、淀粉类材料、血清白蛋白、鲱精蛋白、聚赖氨酸、卡波姆、聚甲基丙烯酸、聚N
‑
异丙基丙烯酰胺、聚丙烯酰胺、丙烯酸、明胶及其衍生物、透明质酸、结冷胶、聚乙烯醇、纤维蛋白原、角蛋白、纤连蛋白、还原角蛋白、纤维素类材料、海藻酸盐及其衍生物、木
聚糖中的至少一种。
[0018]本专利技术一种细胞运输的方法，其中，各方法中生物材料的浓度范围为0.001
–
20wt.％。
[0019]本专利技术一种细胞运输的方法，其中，各方法步骤(1)中细胞在生物材料水溶液中的密度范围为1
×
105‑1×
109个/mL。
[0020]本专利技术一种细胞运输的方法，其中，方法中三维细胞培养的时间范围为3
–
30天。
[0021]本专利技术一种细胞运输的方法，其中，各方法中细胞运输过程中温度控制范围为4
‑
37℃。
[0022]本专利技术一种细胞运输的方法，其中，各方法中细胞活率为大于等于70％但小于等于100％；优选地，各方法中细胞活率为大于等于80％但小于等于95％。
[0023]本专利技术一种细胞运输的方法，其中，各方法中细胞运输后可以不用去除材料，直接使用含有细胞的水凝胶结构。
[0024]与现有技术相比，本专利技术一种细胞运输的方法，在温和条件下采用生物材料包裹细胞形成三维水凝胶结构，通过细胞培养液浸没水凝胶进行运输，运输后可以经过温和的方式去除生物材料实现细胞分离，该方法简便易行，成本低，运输过程基本不影响细胞活性。
附图说明
[0025]图1为实施例1中水凝胶结构中细胞在运输前后的活/死细胞染色情况效果图(图1A是运输前样品，图1B是运输后样品)；
[0026]图2为实施例2中水凝胶结构中细胞在运输前后的活/死细胞染色情况效果图(图2A是运输前样品，图2B是运输后样品)。
具体实施方式
[0027]实施例1
[0028]本实施例一种细胞运输的方法，其中，依次包括如下步骤：
[0029](1)将含有1％泊洛沙姆和1％胶原的生物材料水溶液从4℃冰箱取出，吸取1mL生物材料水溶液与小鼠主动脉血管平滑肌细胞均匀混合，细胞密度为1
×
106个/mL；
[0030](2)将步骤(1)中细胞/材料混合物置于37℃条件中形成包裹细胞的水凝胶结构；
[0031](3)将步骤(2)中水凝胶结构置于含10％胎牛血清的DMEM
‑
高糖细胞培养基中进行常温运输；
[0032](4)将步骤(3)中运输5天后的水凝胶结构置于4℃条件中去除材料，离心分离细胞，细胞活率为90％。
[0033]在细胞运输前后，使用AO/PI双染试剂分别对水凝胶结构中的细胞进行活/死细胞标记，使用DAPI试剂标记细胞核，通过荧光显微镜观察记录细胞活率。其中吖啶橙(AcridineOrange，简称AO)可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞(活细胞和死细胞)的细胞核，呈现绿色荧光；碘化丙啶(Propidiumiodide，简称PI)只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光；DAPI可以穿透细胞膜，和双链DNA结合呈现蓝色荧光。测试结果见图1。测试表明，细胞在运输前后水凝胶结构中均大量呈现
绿色荧光信号，细胞均保持高活率。
[0034]实施例2
[0035]一种细胞运输的方法，其中，依次包括如下步骤：
[0036](1)将含有5％聚丙烯酰胺和0.1％聚赖氨酸的生物材料水溶液从4℃冰箱取出，吸取2mL生物材料水溶液与人脐静脉内皮细胞均匀混合，细胞密度为1
×
105个/mL；
[0037](2)将步骤(1)中细胞/材料混合物置于37℃条件中形成包裹细胞的水凝胶结构；
[0038](3)将步骤(2)中水凝胶结构置于含10％胎牛血清的RPMI
‑
1640细胞培养基中在细胞培养箱进行三维细胞培养，培养时间为10天；
[0039](4)将步骤(3)中水凝胶结构置于含10％胎牛血清的RPMI
‑
1640细胞培养基中在37℃条件下进行运输；
[0040](5)将步骤(4)中运输3天后的水凝胶结构置于4℃条件中去除材料，离心分离细胞，细胞活率为80％。
[0041]本专利技术一种细胞运输的方法中，步骤(3)的三维细胞培养的时间除了选择10天外，还可以选择3
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞运输的方法，其特征在于，依次包括如下步骤：(1)将生物材料水溶液从4℃冰箱取出，吸取适量生物材料水溶液与细胞均匀混合；(2)将步骤(1)中细胞/材料混合物置于37℃条件中形成包裹细胞的水凝胶结构；(3)将步骤(2)中水凝胶结构置于细胞培养液中进行运输；(4)将步骤(3)中运输后的水凝胶结构置于4℃条件中去除材料，离心分离细胞。2.一种细胞运输的方法，其特征在于，依次包括如下步骤：(1)将生物材料水溶液从4℃冰箱取出，吸取适量生物材料水溶液与细胞均匀混合；(2)将步骤(1)中细胞/材料混合物置于37℃条件中形成包裹细胞的水凝胶结构；(3)将步骤(2)中水凝胶结构置于细胞培养液中在细胞培养箱进行三维细胞培养；(4)将步骤(3)中培养后的水凝胶结构置于细胞培养液中进行运输；(5)将步骤(4)中运输后的水凝胶结构置于4℃条件中去除材料，离心分离细胞。3.如权利要求1或2所述的一种细胞运输的方法，其特征在于，各方法中生物材料包括泊洛沙姆、胶原、肽类材料、壳聚糖及其衍...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜明春，曲康宁，
申请(专利权)人：深圳钧兴生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：