提高AAV视网膜靶向性的衣壳蛋白突变体MutF及其应用制造技术

本发明专利技术公开了提高AAV视网膜靶向性的衣壳蛋白突变体MutF及其应用。发明专利技术人研究发现，使用DENEIRTTNPVATEQYGDVSTNLQRGNR替换野生型AAV2病毒衣壳蛋白的561

【技术实现步骤摘要】
提高AAV视网膜靶向性的衣壳蛋白突变体MutF及其应用
[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种提高AAV视网膜靶向性的衣壳蛋白突变体MutF及其应用。

技术介绍

[0002]腺相关病毒(AAV)是一种广泛应用于基因治疗的递送载体，其原理是通过基因工程方法将AAV基因组ITR之间序列替换成目的基因序列，经细胞感染传递到靶细胞，达到基因治疗目的。基于重组AAV具有安全性、高效性、稳定性、持续性、特异性、低整合性等特点，使得AAV成为基因治疗领域主要递送手段之一。在基因治疗应用过程中，活体动物往往需要注射高剂量、高纯度的AAV病毒，而高昂的AAV生产成本成为基因治疗过程中的瓶颈之一。
[0003]伴随着基因治疗下游研发技术的成熟，上游AAV生产通量的问题的限制变得越来越明显。为了解决这个问题，现有的策略集中在以下两个方面，一是优化现有的AAV生产工艺；二是寻找包装能力、组织靶向性更好的病毒载体。AAV生产工艺更多的是通过其外部包装条件的优化，不涉及AAV本身的改造。而基于AAV病毒的结构特征，其病毒特征如组织靶向性、免疫原性、包装产量等特征主要由其表面衣壳蛋白决定。
[0004]AAV衣壳蛋白与其靶向性的关系尚不明确，现有技术中，主要通过突变体发现具有特定靶向性或高靶向性的AAV衣壳蛋白。CN113766934A、CN111770999A、CN105755044A、CN103561774A等公开了多种不同具有一定视网膜靶向性的AAV病毒。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种提高AAV视网膜靶向性的衣壳蛋白突变体MutF及其应用。
[0006]本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术的第一个方面，提供：一种AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF，与野生型AAV2病毒衣壳蛋白相比，野生型AAV2病毒衣壳蛋白的561
‑
588位氨基酸被多肽序列DENEIRTTNPVATEQYGDVSTNLQRGNR替换。
[0007]在一些AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF的实例中，其氨基酸序列如SEQ ID NO.：2所示。
[0008]本专利技术的第二个方面，提供：表达本专利技术第一个方面所述AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF的核酸序列分子。
[0009]为了更好地表达相应的蛋白，核酸序列分子可以进行序列优化，以获得更佳的表达。
[0010]本专利技术的第三个方面，提供：一种表达体系，其可表达本专利技术第一个方面所述AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF，或含有本专利技术第二个方面所述的核酸序列分子。
[0011]在一些表达体系的实例中，所述表达体系为重组AAV载体，所述重组AAV载体通过对AAV载体插入或替换改造得到。
[0012]在一些表达体系的实例中，所述AAV选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9或AAV10及其突变体中的任意一种。
[0013]在一些表达体系的实例中，所述表达体系还包括编码功能性基因产物的核酸分子。功能性基因产物可以是蛋白、mRNA等。
[0014]本专利技术的第四个方面，提供：一种组合物，其包括本专利技术第二个方面所述的核酸序列分子，或本专利技术第三个方面所述的表达体系。
[0015]本专利技术的第五个方面，提供：本专利技术第四个方面所述组合物在制备靶向眼部的基因治疗制剂或转基因制剂中的应用。
[0016]在一些应用的实例中，所述组合物靶向视网膜或晶状体。
[0017]本专利技术的有益效果是：本专利技术的一些实例的衣壳蛋白突变体MutF，可以有效提高AAV病毒视网膜靶向性，从根本上解决AAV2感染视网膜各层细胞的效率的问题。
附图说明
[0018]下面结合附图和实施例对本专利技术做进一步的说明，其中：图1为本发测试例中所构建的突变质粒的琼脂糖凝胶电泳鉴定图；图2为本专利技术实施例中pAAV2包装质粒图谱；图3为本专利技术实施例中构建得到的pAAV2
‑
MutF包装质粒图谱；图4为本专利技术实施例中病毒包装三质粒系统的pAAV
‑
CAG
‑
EGFP表达质粒图谱；图5为本专利技术实施例中病毒包装三质粒系统的pHelper辅助质粒图谱；图6为本发测试例中的本专利技术方案制备得到的腺相关病毒变体和对照组野生型腺相关病毒的病毒颗粒总量的检测结果图；图7为本专利技术实施例的野生型和MutF感染小鼠3W活体眼底荧光OCT图；图8为本专利技术实施例的野生型和MutF感染小鼠3W的视网膜组织切片图；图9为本专利技术实施例的野生型Cap561
‑
588和MutF序列的序列比对图。
具体实施方式
[0019]以下将结合实施例对本专利技术的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本专利技术的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本专利技术的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本专利技术的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本专利技术保护的范围。实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到的试剂和材料。
[0020]实施例1本实施例提供了一种腺相关病毒变体（AAV2
‑
MutF），所述腺相关病毒变体的制备包括以下步骤：表1AAV2
‑
WT及其突变体Cap561
‑
588氨基酸序列信息
序列名称序列信息编号AAV2
‑
WT
‑
Cap561
‑
588DEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNR6AAV2
‑
MutFDENEIRTTNPVATEQYGDVSTNLQRGNR3AAV2
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Mut051HSEDEIKTTNPVATEGYGEVATNLQRGPQQ7AAV2
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Mut052AVEGEIKTTNPVATEGYGEVATNLQRGPNG8AAV2
‑
Mut053DEEEIRTTNPVATEQSCGSVSTNLVQYRGNR9AAV2
‑
Mut054NAAEIKTTNPVATEQYGEVASPQAAQAWKQVTDL10AAV2
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Mut055HDEEEIAATNPVSTEHYGESATNLQSGPAG11AAV2
‑
Mut056AENEIATTNPVATEQYGEASENLQRGGR12AAV2
‑
Mut057DEEEIRTTNPVATEVYGEASTNLQHGGR13AAV2
‑
Mut058QEEEIATTNPVATEQYGEVSENLQRGNR14AAV2
‑
Mut059DEEEIRTTNPVSTEVYGEASTNLQHGGR15AAV2
‑
Mut060DEEEIRTTNPVATEQYGEVSENLQRGER16A本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF，其特征在于，与野生型AAV2病毒衣壳蛋白相比，野生型AAV2病毒衣壳蛋白的561
‑
588位氨基酸被多肽序列DENEIRTTNPVATEQYGDVSTNLQRGNR替换。2.根据权利要求1所述的AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.：2所示。3.表达权利要求1或2所述AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF的核酸序列分子。4.一种表达体系，其特征在于，其可表达权利要求1或2所述AAV病毒衣壳蛋白突变体MutF，或含有权利要求3所述核酸序列分子。5.根据权利要求4所述的表达体系，其特征在于，所述表达体系为...

【专利技术属性】
技术研发人员：‑，
申请(专利权)人：广州译码基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：