一种用于慢性阻塞性肺疾病诊断的外周血蛋白标记物试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种用于慢性阻塞性肺疾病诊断的外周血蛋白标记物试剂盒，属于生物医学领域，其特征在于，包含差异蛋白alpha

【技术实现步骤摘要】
一种用于慢性阻塞性肺疾病诊断的外周血蛋白标记物试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及一种用于慢性阻塞性肺疾病诊断的外周血蛋白标记物试剂盒。

技术介绍

[0002]慢性阻塞性肺疾病是指显著暴露于有毒颗粒或气体导致气道和（或）肺泡异常的一种常见、可预防的和治疗的慢性气管疾病，是我国第三大常见慢性疾病。该疾病起病较慢、初期症状不明显，大多数患者延误了治疗的良机。因此慢阻肺的早期诊断和治疗是降低慢阻肺发病率和死亡率的关键步骤。目前临床中诊断COPD的金标准为肺功能的测定，但患者早期肺功能往往正常，难以在早期诊断及干预。为了建立COPD方便、快捷的、灵敏度、特异性俱佳的诊断方法，寻找COPD诊断的血清生物标志物便十分重要。
[0003]目前，已经有不少研究者利用蛋白组学进行慢阻肺相关差异蛋白的筛选，并证明Fetuin
‑
B（FETUB）、MKK3等指标与慢阻肺急性期炎症反映有关。通过同位素标记相对和绝对定量技术的蛋白组学分析和生物信息学分析，基于蛋白组学分析慢性阻塞性肺疾病患者与健康人血清中的差异蛋白，筛选烟草诱导慢性阻塞性肺病患者和正常吸烟者之间的差异表达蛋白（DEPs），以寻找慢性阻塞性肺疾病朝气诊断标志物。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术提供本一种具有较高精准度的用于慢性阻塞性肺疾病诊断的试剂盒。利用iTRAQ蛋白组学与生物学分析成功筛选出五个慢阻肺相关差异蛋白，其中AGP
‑
1、AMBP表达上调，HRG、HCⅡ、ZPI表达下调，与ELISA验证所得出的结果一致，可作为诊断的候选血清生物标志物。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案。
[0006]本专利技术提供了检测蛋白标记物的试剂在制备慢性阻塞性肺疾病的诊断筛查、分级评估的试剂盒中的应用，其特征在于，所述蛋白标记物包括以下一种或几种的组合：AGP
‑
1、AMBP、HRG、HCⅡ、ZPI。
[0007]进一步地，所述试剂盒应用ELISA技术检测样本中蛋白标记物的水平。
[0008]优选地，所述样本为血清。
[0009]进一步地，所述的慢性阻塞性肺疾病诊断筛查、分级评估的试剂盒以AGP
‑
1、AMBP、HRG、HCⅡ或ZPI中一种或几种的组合作为诊断筛查、分级评估标记物。
[0010]优选地，所述的慢性阻塞性肺疾病诊断筛查的试剂盒是通过ELISA技术来检测样本中AGP
‑
1、AMBP、HRG、HCⅡ或ZPI的水平，所述的AGP1和AMBP的水平与慢性阻塞性肺疾病呈正相关；HRG、HCⅡ和ZPI的水平与慢性阻塞性肺疾病呈负相关。
[0011]优选地，所述的慢性阻塞性肺疾病分级评估的试剂盒是通过ELISA技术来检测样本中AGP
‑
1、AMBP、HRG、HCⅡ或ZPI的水平，所述的AGP1和AMBP的水平与慢性阻塞性肺疾病分级呈正相关；HRG、HCⅡ和ZPI的水平与慢性阻塞性肺疾病分级呈负相关。
[0012]与现有技术相比本专利技术的有益效果。
[0013]与传统临床中诊断慢阻肺通过通过肺功能检查来判断气流受限是否增高的方法相比，利用AGP1、HRG、HCⅡ、AMBP、ZPI作为候选血清蛋白标志物在血清中的含量具有较好的早期诊断价值，可避免患者由于慢阻肺疾病起病较慢, 疾病初期症状相对不明显以及部分患者对咳嗽咳痰等临床症状认识不足所导致该病的漏诊，并延误治疗的最佳时机。
[0014]本专利技术通过通过同位素标记相对和绝对定量技术的蛋白组学分析和生物信息学分析，基于蛋白组学分析慢性阻塞性肺疾病患者与健康人血清中的差异蛋白，筛选烟草诱导慢性阻塞性肺病患者和正常吸烟者之间的差异表达蛋白（DEPs），以寻找慢性阻塞性肺疾病早期诊断标志物。本专利技术所述的方法及试剂盒具有高通量性，高特异性，检测快速准确等突出优点，对慢性阻塞性肺疾病的诊断具有重要的临床价值。本专利技术适用于慢性阻塞性肺疾病的早期筛查及诊断，对于提高慢阻肺的诊断率，实现早期干预治疗，降低慢阻肺病死率具有重要意义。
附图说明
[0015]图1为基于iTRAQ的蛋白质组学分析结果。
[0016]图2为DEPs的功能表征对应的GO注释和KEGG pathway关联。
[0017]图3为筛选出的差异蛋白的ELISA定量分析结果。
具体实施方式
[0018]下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例
[0019]一、一种用于用于慢性阻塞性肺疾病诊断的外周血蛋白标记物试剂盒，包含如下组分：慢性阻塞性肺疾病早期诊断标志物，所述的慢性阻塞性肺疾病早期诊断标志物包括差异蛋白alpha
‑1‑
acid glycoprotein 1（AGP
‑
1）、Histidine
‑
rich glycoprotein（HRG）、Heparin cofactor 2（HCⅡ）、protein AMBP、protein Z
‑
dependent protease inhibitor（ZPI）。
[0020]二、筛选方法：(一) 研究对象：实验组6名男性受试者（n=3，未患有COPD的吸烟者；n=3，患有COPD的吸烟者），验证组68名男性受试者（n=26，未患有COPD的吸烟者；n=8，全球阻塞性肺疾病倡议GOLD
ꢀⅠ
期；n=12，GOLD
ꢀⅡ
期；n=14，GOLD
ꢀⅢ
期；n=8，GOLD
ꢀⅣ
期，患有COPD的吸烟者）第一组通过基于iTRAQ的蛋白质组学检测潜在的血清生物标志物候选物；第二组通过ELISA验证血清生物标志物候选物。COPD患者入选标准为：(1)男性患者，年龄50~70岁；(2)患者按GOLD指南诊断，且必须处于稳定期；(3)吸烟史10年及以上，戒烟时间5年及以上。排除标准为：(1)心脑血管疾病不稳定、肝肾功能明显损害、精神疾病患者；(2)在2个月内诊断出哮喘、肺
结核、肺炎等其他肺部疾病的；(3)服用处方免疫抑制药物的患者，包括激素药物（如甲泼尼龙）、细胞毒性药物（如硫唑嘌呤）、钙调素抑制剂（如环孢素）、生物制剂（如抗淋巴细胞球蛋白）和新一代单克隆抗体。此外，选取年龄在50~70岁之间无COPD的男性吸烟者作为对照组；（二）样本收集：每名受试者空腹后采集血浆样本。样品在室温下离心30分钟，在
‑ꢀ
80℃下暂存，待使用；（三）iTRAQ定量蛋白质组学实验：1、蛋白质提取：用Proteo miner试剂盒进行血清高丰度蛋白去除，提取蛋白。加入终浓度10mM的DTT，56℃水浴1h。再加入终浓度55m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测蛋白标记物的试剂在制备慢性阻塞性肺疾病的诊断筛查、分级评估的试剂盒中的应用，其特征在于，所述蛋白标记物包括以下一种或几种的组合：AGP
‑
1、AMBP、HRG、HCⅡ、ZPI。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒应用ELISA技术检测样本中蛋白标记物的水平。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述样本为血清。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的慢性阻塞性肺疾病诊断筛查、分级评估的试剂盒以AGP
‑
1、AMBP、HRG、HCⅡ或ZPI中一种或几种的组合作为诊断筛查、分级评估标记物。5.根据权利要求4所述的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：李天熙，闫朗，温事翰，张广强，从培峰，
申请(专利权)人：张广强，
类型：发明
国别省市：