一种基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒及其应用，本发明专利技术试剂盒包括过敏原刺激物、细胞因子标准品、细胞因子的包被抗体和细胞因子的检测抗体；所述过敏原刺激物包括过敏原提取物和/或过敏原组分蛋白，本发明专利技术试剂盒能够真实反映患者接触过敏原后发生的炎症反应，包含了IgE依赖和非IgE依赖途径导致的炎症反应，远优于过去单纯的血清IgE检测，可达到皮肤点刺试验(SPT)、食物激发试验等体内试验相当的效果，同时又避免了体内试验时发生严重过敏反应的风险。险。险。

【技术实现步骤摘要】
一种基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]过敏性疾病诊断最主要是筛查出患者对哪种过敏原过敏，目前过敏原体外筛查方法包括血清学和细胞学检测。临床上常用的过敏原筛查试剂盒以检测血清中的总IgE(tIgE)和过敏原特异性IgE(sIgE)为诊断指标，过敏原特异性sIgE检测在过敏性疾病的体外诊断中起着关键作用。sIgE水平越高，其与过敏性疾病的相关性就越强。单独监测tIgE水平不能用于诊断过敏性疾病，需要与sIgE水平联合分析。细胞学检测最常见的应用是嗜碱性粒细胞激发试验(BAT)。监测嗜碱性粒细胞脱颗粒有两种方法：一种是通过流式细胞术检测嗜碱性粒细胞膜标记物如CD63/CD203c的表达，另一种是基于酶联免疫吸附法测定组胺等炎症介质。这两种方法的检测原理是：特异性过敏原通过上调嗜碱性粒细胞的激活标志物的表达或释放组胺等介质使患者发生过敏反应。
[0003]基于血清学检测的过敏原筛查试剂盒通常以sIgE的浓度分级作为诊断依据，但sIgE结果的分级并不一定与疾病的严重程度相关。sIgE阳性并不总是与临床症状相一致，有明显过敏临床症状的也不一定能够检测到sIgE阳性，特别是食物过敏、小分子物质过敏等。因为过敏原还存在有非IgE依赖的途径引起炎症介质的释放使患者发生过敏反应。因此，血清sIgE的诊断有效性较低，难以与临床表现相一致。
[0004]目前细胞学检测应用的是嗜碱性粒细胞活化试验(BAT)，通过流式细胞术检测嗜碱性粒细胞膜活化标记物如CD63/CD203c的表达，但嗜碱性粒细胞极其罕见，约占血液中白细胞总数的0.2％。因此，通过流式细胞术检测嗜碱性粒细胞表面活化标志物的难度非常大。另外，也有检测全血中嗜碱性粒细胞释放组胺水平来衡量发生过敏反应的严重程度，但是组胺是一种含氮的有机化合物，稳定性差且检测方法复杂。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的问题，本专利技术目的在于提供一种基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒及其应用。本专利技术过敏原筛查试剂盒通过体外测试即可真实地反映患者接触过敏原后发生的炎症反应，达到与体内试验相当的检测效果。
[0006]基于上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，所述试剂盒包括过敏原刺激物、细胞因子标准品、细胞因子的包被抗体和细胞因子的检测抗体；所述过敏原刺激物包括过敏原提取物和/或过敏原组分蛋白。
[0008]本专利技术试剂盒的检测原理如下：
[0009]过敏原刺激物刺激待检血细胞后，由抗原递呈细胞摄取、加工形成抗原肽与MHCII类分子的复合物。若机体在致敏的状态下，该复合物能够与表达有过敏原特异性T细胞抗原
受体(TCR)的T细胞结合，从而使T细胞活化。取决于过敏原的性质和局部环境中的激素和细胞因子的不同，活化的T细胞通常可分化成Th2细胞和/或Th17细胞并对应分泌不同类型的细胞因子，如Th2细胞主要分泌IL
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4、IL
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5和IL
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13，Th17细胞主要分泌IL17。这些炎症性细胞因子具有多种功能参与了过敏反应的发生。本专利技术的试剂盒通过检测不同类型的细胞因子可以分析出受过敏原刺激后患者发生的炎症类型。本专利技术试剂盒通过体外测试即可真实地反映患者接触过敏原后发生的炎症反应，达到与体内试验相当的检测效果。
[0010]优选地，过敏原包括屋尘螨、粉尘螨、疥螨、蟑螂、蜜蜂、猫、马、蛔虫、桦树、柳杉、杉木、梯牧草、欧蓍草、黑麦草、女贞、大麦、苹果、花生、蟹、虾、扁豆、鲭鱼、牡蛎和糠秕马拉色菌。
[0011]优选地，所述细胞因子包括IL
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4、IL
‑
5、IL
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13和IL
‑
17A。
[0012]优选地，所述试剂盒中过敏原刺激物的终浓度为5～100μg/ml。
[0013]优选地，所述试剂盒还包括PBS缓冲液、清洗液、非特异性封闭液、链霉亲和素偶联辣根过氧化物酶溶液、底物溶液和终止液。
[0014]优选地，所述清洗液为含0.05％吐温20的PBS缓冲液；所述非特异性封闭液为含3％BSA的清洗液；所述底物溶液为3,3,5,5
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四甲基联苯胺溶液；所述终止液为2M的硫酸溶液。
[0015]优选地，所述试剂盒的检测对象为血液样本。
[0016]第二方面，本专利技术提供上述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
[0017](1)将过敏原刺激物加入细胞培养板，每孔加入待测血液样本混匀，经孵育、离心，吸取细胞培养上清液；
[0018](2)将步骤(1)所得细胞培养上清液、细胞因子标准品加入含有待检细胞因子的包被抗体的孔板中，经孵育、清洗液清洗后，向孔板中加入细胞因子的检测抗体，孵育、清洗；
[0019](3)接着向孔板中加入链霉亲和素偶联辣根过氧化物酶溶液，经孵育、清洗后，再加入底物溶液，经孵育后，加入终止液，终止反应；
[0020](4)将孔板置于酶标仪上读取450nm、570nm处的OD值，依据标准曲线计算细胞因子的浓度，基于细胞因子的浓度对过敏等级以及炎症反应分型进行判定。
[0021]第三方面，本专利技术提供上述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒在过敏原筛查中的应用，基于试剂盒检测到的待检样本的细胞因子的浓度对是否过敏及过敏等级进行判定；
[0022]判定标准如下：细胞因子浓度<8pg/mL，则判定为阴性，指示待检样本对所检过敏原不过敏；细胞因子浓度≥8pg/mL，则判定为阳性，指示待检样本对所检过敏原过敏；
[0023]过敏等级如下：
[0024]1级：8pg/mL～12pg/mL；
[0025]2级：13pg/mL～17pg/mL；
[0026]3级：18pg/mL～22pg/mL；
[0027]4级：23pg/mL～32pg/mL；
[0028]5级：33pg/mL～52pg/mL；
[0029]6级：≥53pg/mL；
[0030]第四方面，本专利技术提供上述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒在过敏原引起的炎症反应分型中的应用，基于试剂盒检测到的待检样本的细胞因子的类型及浓度对炎症反应分型进行判定，判定标准如下：
[0031]细胞因子中IL
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4、IL
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5、IL
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13中任一项的浓度大于等于8pg/mL，则炎症反应分型为Th2型；细胞因子中IL
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17A的浓度大于等于8pg/mL，则炎症反应分型为Th17型。
[0032]与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
[0033]本专利技术通过检测新的生物标记物，能够真实反映患者接触过敏原后发生的炎症反本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括过敏原刺激物、细胞因子标准品、细胞因子的包被抗体和细胞因子的检测抗体；所述过敏原刺激物包括过敏原提取物和/或过敏原组分蛋白。2.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述过敏原包括屋尘螨、粉尘螨、疥螨、蟑螂、蜜蜂、猫、马、蛔虫、桦树、柳杉、杉木、梯牧草、欧蓍草、黑麦草、女贞、大麦、苹果、花生、蟹、虾、扁豆、鲭鱼、牡蛎和糠秕马拉色菌。3.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述细胞因子包括IL
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4、IL
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5、IL
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13和IL
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17A。4.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中过敏原刺激物的终浓度为5～100μg/ml。5.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PBS缓冲液、清洗液、非特异性封闭液、链霉亲和素偶联辣根过氧化物酶溶液、底物溶液和终止液。6.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述清洗液为含0.05％吐温20的PBS缓冲液；所述非特异性封闭液为含3％BSA的清洗液；所述底物溶液为3,3,5,5
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四甲基联苯胺溶液；所述终止液为2M的硫酸溶液。7.如权利要求1所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的检测对象为血液样本。8.权利要求1～7任一项所述基于炎症反应分型的过敏原筛查试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将过敏原刺激物加入细胞培养板，每孔加入待测血液样本混匀，经孵育、离心，吸取细胞培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：何颖，陶爱林，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：