对HLA-G和另一种抗原具有结合特异性的双特异性免疫细胞接合子制造技术

本文提供了对HLA

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对HLA
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G和另一种抗原具有结合特异性的双特异性免疫细胞接合子


本文提供了对HLA
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G和另外的抗原具有结合特异性的双特异性免疫细胞接合子，包含药物组合物、诊断组合物和试剂盒。

技术介绍

双特异性抗体是可以与两种不同抗原结合的蛋白质。双特异性抗体广泛用于癌症免疫治疗，其中用作免疫细胞接合子的双特异性抗体被工程化为同时结合细胞毒性细胞和靶标，如要杀死的肿瘤细胞。例如，T细胞与肿瘤细胞之间的联系使得T细胞通过产生像穿孔素和颗粒酶这样的蛋白质对肿瘤细胞发挥细胞毒性活性。这些蛋白质进入肿瘤细胞并启动细胞的凋亡过程。双特异性抗体可以指导宿主的免疫系统对抗癌细胞。例如，可以制备与T细胞中的CD3和肿瘤细胞上的第二抗原结合的双特异性抗体。桥接T细胞和肿瘤细胞并因此杀死肿瘤细胞可以诱导恶性肿瘤的显著消退。在一些情况下，这甚至可以产生完全缓解。双特异性T细胞接合子(BiTE)是作为抗癌化合物特别有用的一类双特异性抗体。BiTE和其它双特异性免疫细胞接合子通常是由两种不同的抗体或氨基酸序列，如例如两种不同的单链可变片段(scFv)组成的融合蛋白。scFv中的一者与免疫细胞上的活化受体，例如T细胞上的CD3结合，并且另一者通过特定分子靶向肿瘤细胞。因此，双特异性T细胞接合子可以用于通过活化的T细胞清除表达靶标的肿瘤细胞。人类白细胞抗原
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G(HLA
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G)是属于非经典HLA
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I类受体家族并且由HLA
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G基因编码的一种免疫调节分子。HLA
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G是由重链和轻链(β
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2微球蛋白)组成的异二聚体。存在HLA
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G的膜结合形式和可溶形式。HLA
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G最早是在胎盘样品中鉴定出的。HLA
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G通常在母胎界面和其它免疫特权位点处表达。HLA
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G可以在妊娠免疫耐受中发挥作用，由绒毛外滋养层细胞在胎盘中表达，而经典的MHC I类基因(HLA
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A和HLA
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B)则没有。HLA
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G已被证明是免疫抑制的。通过结合在各种髓样和淋巴样细胞上表达的受体，HLA
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G可以直接抑制NK细胞、细胞毒性T淋巴细胞、B细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞的功能。HLA
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G还抑制T和NK细胞增殖和溶细胞活性。HLA
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G抑制吞噬作用并诱导调节性T细胞的产生或扩增。HLA
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G通过至少三种含ITIM的抑制性受体ILT2、ILT4和KIR2DL4介导免疫功能。例如，在淋巴细胞上，HLA
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G通过ILT2介导功能。在骨髓细胞上，HLA
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G通过ILT2和ILT4介导功能。在蜕膜NK细胞上，HLA
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G通过KIR2DL4和ILT2介导免疫功能。HLA
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G是免疫检查点靶标。HLA
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G可以通过受体结合和/或胞啃作用和趋化性受损直接抑制免疫细胞功能。HLA
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G可以赋予肿瘤细胞更高的侵袭和转移潜力。HLA
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G促进肿瘤免疫监视的逃避，并且增强恶性肿瘤的转移和进展。在肿瘤进展期间，HLA
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G具有其它作用，如抑制免疫细胞溶解，诱导免疫细胞凋亡，和/或通过受体结合和/或胞啃作用产生调节细
胞。HLA
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G是双特异性抗体的理想抗原。HLA
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G表达在多种肿瘤中上调，并且与不良预后和疾病进展相关。血清HLA
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G水平在例如但不限于乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌(CRC)、胃癌、食道癌、成神经细胞瘤、宫颈癌和血癌中升高。还发现HLA
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G与晚期疾病的临床参数，如肿瘤转移、不良预后、免疫逃逸和肿瘤侵袭性相关。结合免疫细胞如T细胞的双特异性抗体以及HLA
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G将是有用的。例如，能够结合CD3和HLA
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G两者的双特异性T细胞接合子将特别有用。

技术实现思路

第一方面提供了一种双特异性抗原结合构建体，其包括能够与HLA
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G表位结合的结合结构域和能够与第二表位结合的另外的结合结构域。在一些实施例中，所述第二表位包括CD3ε表位或由其组成。在一些实施例中，所述CD3ε表位包括SEQ ID NO:629中所示的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成。在一些实施例中，所述能够与CD3ε表位结合的另外的结合结构域包括以下或由以下组成：重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和/或VL包括以下中的1个、2个、3个、4个、5个或6个：a)VHCDR1，所述VHCDR1具有SEQ ID NO:346
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349或354
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357中的任一者中所示的序列；b)VHCDR2，所述VHCDR2具有SEQ ID NO:362
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365或371
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375中的任一者中所示的序列；c)VHCDR3，所述VHCDR3具有SEQ ID NO:379
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382中的任一者中所示的序列；d)VLCDR1，所述VLCDR1具有SEQ ID NO:388
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392中的任一者中所示的序列；e)VLCDR2，所述VLCDR2具有SEQ ID NO:396
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400中的任一者中所示的序列；以及f)VLCDR3，所述VLCDR3具有SEQ ID NO:404
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408中的任一者中所示的序列。在一些实施例中，所述另外的结合结构域包括NK细胞接合子、树突状细胞接合子、单核细胞或巨噬细胞接合子或由其组成。在一些实施例中，所述NK细胞接合子包括针对CD16表位的抗体或由其组成。在一些实施例中，所述NK细胞接合子包括针对NKp46的抗体或由其组成。在一些实施例中，所述NK细胞接合子包括针对NKp30的抗体或由其组成。在一些实施例中，所述单核细胞或巨噬细胞接合子包括针对CD16表位的抗体或由其组成。在一些实施例中，所述HLA
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G表位包括SEQ ID NO:342中所示的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成。在一些实施例中，所述能够与HLA
‑
G表位结合的结合结构域包括以下或由以下组成：重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和/或VL包括以下中的1个、2个、3个、4个、5个或6个：a)VHCDR1，所述VHCDR1具有SEQ ID NO:1
‑
14或18
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34中的任一者中所示的序列；b)VHCDR2，所述VHCDR2具有SEQ ID NO:38
‑
50或54
‑
71中的任一者中所示的序列；c)VHCDR3，所述VHCDR3具有SEQ ID NO:76
‑
101中的任一者中所示的序列；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双特异性抗原结合构建体，其包括能够与HLA
‑
G表位结合的结合结构域和能够与第二表位结合的另外的结合结构域。2.根据权利要求1所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述第二表位包括CD3ε表位。3.根据权利要求2所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述CD3ε表位包括SEQ ID NO:629中所示的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成。4.根据权利要求2至3中任一项所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述能够与CD3ε表位结合的另外的结合结构域包括以下或由以下组成：重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和/或VL包括以下中的1个、2个、3个、4个、5个或6个：a)VHCDR1，所述VHCDR1具有SEQ ID NO:346
‑
349或354
‑
357中的任一者中所示的序列；b)VHCDR2，所述VHCDR2具有SEQ ID NO:362
‑
365或371
‑
375中的任一者中所示的序列；c)VHCDR3，所述VHCDR3具有SEQ ID NO:379
‑
382中的任一者中所示的序列；d)VLCDR1，所述VLCDR1具有SEQ ID NO:388
‑
392中的任一者中所示的序列；e)VLCDR2，所述VLCDR2具有SEQ ID NO:396
‑
400中的任一者中所示的序列；以及f)VLCDR3，所述VLCDR3具有SEQ ID NO:404
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408中的任一者中所示的序列。5.根据权利要求1所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述另外的结合结构域包括NK细胞接合子、树突状细胞接合子、单核细胞或巨噬细胞接合子。6.根据权利要求5所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述NK细胞接合子包括针对CD16表位的抗体。7.根据权利要求5所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述NK细胞接合子包括针对NKp46的抗体。8.根据权利要求5所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述NK细胞接合子包括针对NKp30的抗体。9.根据权利要求5所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述单核细胞或巨噬细胞接合子包括针对CD16表位的抗体。10.根据权利要求1所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述HLA
‑
G表位包括SEQ ID NO:342中所示的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成。11.根据权利要求1至10中任一项所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述能够与HLA
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G表位结合的结合结构域包括以下或由以下组成：重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH和/或VL包括以下中的1个、2个、3个、4个、5个或6个：a)VHCDR1，所述VHCDR1具有SEQ ID NO:1
‑
14或18
‑
34中的任一者中所示的序列；b)VHCDR2，所述VHCDR2具有SEQ ID NO:38
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50或54
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71中的任一者中所示的序列；c)VHCDR3，所述VHCDR3具有SEQ ID NO:76
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101中的任一者中所示的序列；d)VLCDR1，所述VLCDR1具有SEQ ID NO:105
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124中的任一者中所示的序列；e)VLCDR2，所述VLCDR2具有SEQ ID NO:128
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145中的任一者中所示的序列；以及f)VLCDR3，所述VLCDR3具有SEQ ID NO:149
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166中的任一者中所示的序列。12.根据权利要求1至4中任一项所述的双特异性抗原结合构建体，其中所述能够与HLA
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G表位结合的结合结构域包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：具有SEQ ID NO:170
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200中所示的序列的VH，并且其中所述VL包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：具有SEQ ID NO:204
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228中所示的序列的
VL，并且所述能够与CD3ε表位结合的另外的结合结构域包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中VH包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：具有SEQ ID NO:413
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418中所示的序列的VH，并且其中所述VL包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：具有SEQ ID NOS:422
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427中所示的序列的VL。13.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至12所述的双特异性抗原结合构建体或由所述双特异性抗原结合构建体组成。14.根据权利要求13所述的药物组合物，其进一步包括有效量的以下中的一者或多者：a)抗PD
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L1抗体或小分子抑制剂；b)抗PD
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1抗体或小分子抑制剂；c)抗CD38抗体或小分子抑制剂；d)抗CD39抗体或小分子抑制剂；e)抗CD73抗体或小分子抑制剂；f)抗A2A受体抗体或小分子抑制剂；g)抗A2B受体抗体或小分子抑制剂；h)抗A2A/A2B双重受体抗体或小分子抑制剂；i)抗CD47抗体或小分子抑制剂；j)抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：提圣纳医疗公司，
类型：发明
国别省市：