【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD39抗体、包含抗CD39抗体的组合物和使用抗CD39抗体的方法相关申请本申请要求于2017年7月31日提交的、美国临时专利申请号62/539,527的优先权，其通过引用其全部内容并入本申请。专利
本专利技术提供了对CD39具有结合特异性的抗体以及包含所述抗体的组合物，包括药物组合物、诊断组合物和试剂盒。本专利技术还提供了使用抗CD39抗体用于治疗和诊断目的方法。专利技术背景CD39是将ATP磷酸水解以生成ADP及AMP的完整膜蛋白质。人CD39是510个氨基酸的蛋白质，具有7个可能的N-连接糖基化位点、11个半胱氨酸残基和2个跨膜区域。从结构上而言，其是由2个跨膜结构域、包含NH2-及COOH-端区段的小型细胞质结构域、以及由5个高度保守性结构域所组成的大型细胞外疏水性结构域进行表征，所述高度保守性结构域称为腺苷三磷酸双磷酸酶保守性区域(ACR)1至5，其对于酶的分解代谢活性至关重要。CD39被定位在细胞表面时变得具有催化活性，且其糖基化对于蛋白质折叠、膜靶向、以及酶活性都很重要。CD39组成性表达于脾脏、胸腺、肺脏及胎盘，且在这些组织中，其主要与内皮细胞和免疫细胞群诸如B细胞、天然杀伤(NK)细胞、树突细胞、朗格汉斯(Langerhans)细胞、单核细胞、巨噬细胞、系膜细胞、嗜中性粒细胞和调节性T细胞(Treg)有关。由于CD39连同其他酶将ATP、ADP及AMP降解为腺苷，因此CD39可被视为将ATP驱动的促炎免疫细胞活性转变为由腺苷介导的抗炎状态的免疫开关。在肿...
【技术保护点】
1.抗原结合蛋白质，其与人CD39(hCD39)特异性结合且能够做到下列1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18项：/na)抑制CD39与ATP结合；/nb)抑制CD39将ATP转化为ADP和/或将ADP转化为AMP；/nc)降低CD39对ATP或ADP的亲和性；/nd)抑制或阻碍ADP或AMP自CD39释放；/ne)阻碍或抑制CD39的持续进行性(processivity)；/nf)抑制血小板聚集；/ng)降低磷酸、ADP、AMP、和/或腺苷的水平，和/或增加ATP的水平；/nh)增加T效应细胞功能；/ni)降低调节性T细胞在组织中或在循环中的数目；/nj)抑制调节性T细胞或调节性T细胞活性；/nk)增加B细胞功能；/nl)增加抗原呈递细胞功能；/nm)抑制肿瘤细胞上的CD39功能；/nn)抑制处理来自磷酸化类异戊二烯、磷酸化维生素B代谢物、和/或磷酸化核黄素中的至少一种磷抗原(phospho-antigen)；/no)降低或预防选自MAIT细胞和γδT细胞的磷抗原特异性T细胞的激活；/np)抑制血管生成；/nq)增加经刺激的CD4
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
【国外来华专利技术】20170731 US 62/5395271.抗原结合蛋白质，其与人CD39(hCD39)特异性结合且能够做到下列1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18项：
a)抑制CD39与ATP结合；
b)抑制CD39将ATP转化为ADP和/或将ADP转化为AMP；
c)降低CD39对ATP或ADP的亲和性；
d)抑制或阻碍ADP或AMP自CD39释放；
e)阻碍或抑制CD39的持续进行性(processivity)；
f)抑制血小板聚集；
g)降低磷酸、ADP、AMP、和/或腺苷的水平，和/或增加ATP的水平；
h)增加T效应细胞功能；
i)降低调节性T细胞在组织中或在循环中的数目；
j)抑制调节性T细胞或调节性T细胞活性；
k)增加B细胞功能；
l)增加抗原呈递细胞功能；
m)抑制肿瘤细胞上的CD39功能；
n)抑制处理来自磷酸化类异戊二烯、磷酸化维生素B代谢物、和/或磷酸化核黄素中的至少一种磷抗原(phospho-antigen)；
o)降低或预防选自MAIT细胞和γδT细胞的磷抗原特异性T细胞的激活；
p)抑制血管生成；
q)增加经刺激的CD4+和CD8+T细胞的增生；
r)增加经刺激的PBMC分泌INF-γ、TNF-α、IL-2、和/或IL-1β。
2.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白质，其中所述抗原结合蛋白质具有下列1、2、3、4、5、6或7项特征：
a)是单克隆抗体；
b)是人抗体、人源化抗体、或嵌合抗体；
c)是双特异性抗体、多特异性抗体、双体抗体(diabody)、或多价抗体；
d)是属于IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、或IgM型；
e)是抗原结合抗体片段；
f)是Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、或Fv片段；和/或
g)是单链抗体、单结构域抗体、或纳米抗体(nanobody)。
3.药物组合物，其包含有效量的抗体，所述抗体与hCD39结合且具有下列1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16项特征：
a)阻断或降低ATP水解为ADP和/或ADP水解为AMP，根据下列至少一项确定：(i)磷酸释放(Pi)降低，(ii)ATP水平增加，和(iii)ADP、AMP、和/或腺苷水平降低；
b)增加T效应细胞活性；
c)抑制调节性T细胞或降低调节性T细胞活性；
d)降低调节性T细胞在组织中或在循环中的数目；
e)增加B细胞功能；
f)增加抗原呈递细胞功能；
g)抑制肿瘤细胞上的CD39功能；
h)阻断或抑制处理来自磷酸化类异戊二烯、磷酸化维生素B代谢物、和磷酸化核黄素中的至少一种磷抗原；
i)降低或预防选自MAIT细胞和γδT细胞的磷抗原特异性T细胞的激活；
k)抑制血管生成；
l)降低对ATP和/或ADP的亲和性；
m)抑制CD39释放ADP或AMP；
n)阻碍或抑制CD39的持续进行性(processivity)；
o)抑制血小板聚集；
p)增加经刺激的CD4+和CD8+T细胞的增生；
r)增加经刺激的PBMC分泌INF-γ、TNF-α、IL-2、和/或IL-1β。
4.药物组合物，其包含权利要求1或2所述的抗原结合蛋白质。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其进一步包含有效量的下列至少之一：
a)抗PD-1抗体，
b)抗PD-L1抗体，
c)抗CD73抗体，
d)抗CD38抗体，
e)抗A2A受体抗体，
f)抗A2B受体抗体，
g)抗A2A/A2B双重受体抗体、或其任何组合，或
h)小分子抑制剂，
或其组合。
6.根据权利要求4或5所述的药物组合物，其进一步包含下列之一或两者：
a)抑制性受体或配体的抗体，和/或
b)共刺激受体或配体的抗体，
或其组合。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中，
(i)所述抑制性受体或配体是CTLA-4、PD-L2、LAG-3、Tim3、神经突起因子(neuritin)、BTLA、CECAM-1、CECAM-5、VISTA、LAIR1、CD160、2B4、TGF-R、HHLA2、ILT2、ILT3、ILT4、HLA-G、HLA-C、和/或杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)中的至少一种，和/或
(ii)所述共刺激受体或配体是OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD28、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3、和/或CD83中的至少一种。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述共刺激受体或配体LFA-1进一步包含LFA-1β链CD18、和/或LFA-1α链CD11a。
9.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白质，其中所述抗原结合蛋白质具有下列特征中的一种或多种：
a)以小于约20nM的KD与人CD39多肽或其变体结合；
b)以小于约200nM的KD与食蟹猕猴(cyno)CD39多肽或其变体结合；
c)以小于约200nM的KD与鼠(murine)CD39多肽或其变体结合；或
d)a)、b)和c)中至少2项的组合。
10.抗原结合蛋白质，其与参考抗原结合蛋白质竞争与人CD39结合或其能够与参考抗原结合蛋白质竞争与人CD39结合，其中所述参考抗原结合蛋白质是权利要求1所述的抗原结合蛋白质。
11.抗原结合蛋白质，其与人CD39结合或其能够与参考抗原结合蛋白质竞争与人CD39结合，其中所述参考抗原结合蛋白质与人CD39多肽上SEQIDNO:249的位置143至158或274至277处的表位结合，包括但不限于单独的D150、E153、R154或N99，或与D150、E153、R154或其任何组合的组合。
12.根据权利要求10或11所述的抗原结合蛋白质，其中所述抗原结合蛋白质与所述参考抗体交叉竞争与人CD39结合或能够交叉竞争与人CD39结合。
13.根据权利要求1所述的抗原结合蛋白质，其包含人重链恒定区或片段、或其变体，其中所述恒定区变体包含来自SEQIDNO:179至SEQIDNO:218所示的任何序列的至多20个经保守修饰的氨基酸置换。
14.能够与人CD39(hCD39)结合的分离的抗体分子，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，VH和/或VL包含下列1、2、3、4、5或6项：
a)VHCDR1，其具有SEQIDNO:1至SEQIDNO:45所示的序列，
b)VHCDR2，其具有SEQIDNO:46至SEQIDNO:81所示的序列，
c)VHCDR3，其具有SEQIDNO:82至SEQIDNO:109所示的序列，
d)VLCDR1，其具有SEQIDNO:110至SEQIDNO:124所示的序列，
e)VLCDR2，其具有SEQIDNO:125至SEQIDNO:140所示的序列，和
f)VLCDR3，其具有SEQIDNO:141至SEQIDNO:166所示的序列。
15.能够与人CD39(hCD39)结合的分离的抗体分子，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述VH包含：
a)VHCDR1，其具有SEQIDNO:1至SEQIDNO:45所示的序列，
b)VHCDR2，其具有SEQIDNO:46至SEQIDNO:81所示的序列，和
c)VHCDR3，其具有SEQIDNO:82至SEQIDNO:109所示的序列；和
所述VL包含：
a)VLCDR1，其具有SEQIDNO:110至SEQIDNO:124所示的序列，
b)VLCDR2，其具有SEQIDNO:125至SEQIDNO:140所示的序列，和
c)VLCDR3，其具有SEQIDNO:141至SEQIDNO:166所示的序列。
16.分离的核酸，其编码权利要求1、14或15所述的抗原结合蛋白质。
17.表达载体，其包含权利要求16所述的核酸。
18.原核或真核宿主细胞，其包含权利要求17所述的载体。
19.溶瘤病毒，其编码权利要求16或17所述的核酸。
20.生成重组蛋白质的方法，所述方法包含以下步骤：在原核或真核宿主细胞中表达权利要求16所述的核酸，和从所述细胞或所述细胞培养上清液回收所述蛋白质。
21.治疗患有癌症、慢性感染、或炎性疾病的受试者的方法，所述方法包含以下步骤：向所述受试者施用包含有效量的权利要求1所述的抗原结合蛋白质的药物组合物或权利要求3所述的药物组合物。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述癌症是实体癌症(solidcancer)。
23.根据权利要求21所述的方法，其中所述癌症是血液学癌症。
24.在有需要的受试者中调节免疫系统功能的方法，所述方法包含以下步骤：在使得所述免疫系统受到调节的条件下，使所述受试者的免疫细胞群与包含有效量的权利要求1所述的抗原结合蛋白质的药物组合物接触。
25.在有需要的受试者中诱导或增强免疫应答的方法，所述方法包含向所述受试者施用包含抗原结合蛋白质的药物组合物的步骤，其中所述免疫应答是针对肿瘤抗原产生的。
26.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述受试者是人受试者。
27.根据权利要求25所述的方法，其中所述抗原结合蛋白质包含双特异性抗体或复合抗原结合蛋白质。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述抗原结合蛋白质、所述双特异性抗体或所述复合抗原结合蛋白质是以足以在所述受试者中达成下列1、2、3、4、5、6或7项的量进行施用：
a)减少靶细胞群中CD39ATP酶活性；
b)减少调节性T细胞对效应T细胞活性的抑制；
c)减少调节性T细胞的水平；
d)激活效应T细胞；
e)诱导或增强效应T细胞增生；
f)抑制肿瘤生长；和/或
g)诱导肿瘤消退。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述靶细胞群包含T细胞类、B细胞类、单核细胞类、巨噬细胞类、树突细胞类、髓系来源抑制性细胞类、和/或肿瘤细胞类。
30.根据权利要求25所述的方法，其中所述方法进一步包含下列一项或多项：
a)施用化学疗法；
b)施用放射疗法；和/或
c)施用一种或多种附加治疗剂。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述一种或多种附加治疗剂包含一种或多种免疫刺激剂。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包含免疫细胞的抑制性受体的拮抗剂。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述抑制性受体是CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG-3、Tim3、神经突起因子、BTLA、CECAM-1、CECAM-5、VISTA、LAIR1、CD160、2B4、TGF-R、和/或杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)中的至少一种。
34.根据权利要求31所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包含免疫细胞的共刺激受体的激动剂。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述共刺激受体是OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD28、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3、或CD83配体。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述共刺激受体或配体LFA-1进一步包含LFA-1β链CD18和/或LFA-1α链CD11a。
37.根据权利要求31所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包含细胞因子。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述细胞因子是IL-2、IL-5、IL-7、IL-12、IL-15、和/或IL-21中的至少一种。
39.根据权利要求31所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包含溶瘤病毒。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述溶瘤病毒是单纯疱疹病毒、水泡性口炎病毒、腺病毒、新城疫病毒、牛痘病毒、或马拉巴病毒(marabavirus)。
41.根据权利要求31所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包含嵌合抗原工程化T细胞。
42.根据权利要求31所述的方法，其中所述一种或多种免疫刺激剂包含双特异性或多特异性T细胞定向抗体。
43.根据权利要求25所述的方法，其中所述一种或多种附加治疗剂包含至少一种免疫抑制剂的阱(trap)。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述至少一种免疫抑制剂的阱包含抗TGF-β抗体，TGFb受体阱，抗IL-10抗体和/或抗IL-10受体阱，和/或抗IL-35抗体阱和/或抗IL-35受体阱中的至少一种。
45.根据权利要求3-44任一项所述的方法，其中施用所述药物组合物导致诱导或增强T效应细胞增生，或调节所述T细胞中的I-κB和/或NF-κB，或调节所述T细胞中的CD39活性，或T效应细胞中的T细胞受体诱导的信号传导，或其组合。
46.筛选测试化合物的方法，所述测试化合物包含能够抑制CD39活性的权利要求1所述的抗原结合蛋白质，所述方法包含下列步骤：
使含有CD39的测试样本与测试化合物接触；
比较所述测试样本与对照样本的活性；
通过与所述对照样本相比，所述测试样本中CD39活性降低，表明所述化合物为抑制CD39活性的化合物。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述对照样本包含不与测试化合物接触的样本。
技术研发人员：V索罗斯，M科瓦连科，J柯宾，C比尔斯，PF韦德布姆，JR瓦菲尔德，
申请(专利权)人：提圣纳医疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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