抗SIRP-α抗体及相关方法技术

提供了抗SIRPα抗体，包括多特异性抗SIRPα抗体，以及相关的组合物和方法。本公开的抗体与SIRPα结合，并且能够阻断一个细胞上的CD47与吞噬细胞上的SIRPα的相互作用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗SIRP-α抗体及相关方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年7月26日提交的美国临时申请号62/537,207的权益，其出于所有的目的特此通过引用以其全文并入。序列表本申请包含通过EFS-Web提交并特此通过引用以其全文并入的序列表。20XX年XX月创建的所述ASCII副本命名为XXXXXUS_sequencelisting.txt并且大小为X,XXX,XXX字节。
技术介绍
细胞的周转始于凋亡程序的诱导或标志细胞去除的其他细胞变化，以及随后吞噬细胞(包括巨噬细胞、树突细胞等)对标志物的识别。这个过程需要特定和选择性地去除不想要的细胞。与健康细胞不同，不想要的/老化的/濒死的细胞显示称为“吃我”信号的标志物或配体，即“改变的自身”，这进而可以被吞噬细胞上的受体识别。健康细胞可能显示“不要吃我”信号，其积极抑制吞噬作用；这些信号要么在濒死细胞中下调，以改变的构象存在，要么被“吃我”或前吞噬细胞信号的上调所取代。健康细胞上的细胞表面蛋白CD47及其与吞噬细胞受体SIRPα的接合构成了一个关键的“不要吃我”信号，它可以关闭由多种方式介导的吞食，所述方式包括凋亡细胞清除和FcR介导的吞噬。阻断CD47介导的吞噬细胞上SIRPα的接合可以导致携带“吃我”信号的活细胞的去除。CD47是一种广泛表达的跨膜糖蛋白，其具有单个Ig样结构域和五个跨膜区，它作为SIRPα的细胞配体，通过SIRPα的NH2-末端V样结构域介导结合。SIRPα主要在骨髓细胞上表达，包括巨噬细胞、粒细胞、髓样树突细胞(DC)、肥大细胞及其前体，包括造血干细胞。介导CD47结合的SIRPα上的结构决定因素由Lee等人(2007)J.Immunol.179:7741-7750；Hatherley等人(2007)J.B.C.282:14567-75讨论；并且SIRPα顺式二聚化在CD47结合中的作用由Lee等人(2010)J.B.C.285:37953-63讨论。与CD47抑制正常细胞吞噬的作用一致，有证据表明，就在迁移阶段之前和期间，造血干细胞(HSC)和祖细胞上瞬时上调了CD47，并且CD47在这些细胞上的水平决定了它们在体内被吞食的可能性。
技术实现思路
本文公开了一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其：特异地结合人SIRPα；不特异地结合人SIRPγ；并且任选地包含人Fc区，所述人Fc区包含至少一种减少与人Fc受体的结合的修饰。在一些方面，所述抗体包含：包含SEQIDNO:1中所列序列的CDR-H1；包含SEQIDNO:2中所列序列的CDR-H2；包含SEQIDNO:3中所列序列的CDR-H3；包含SEQIDNO:4中所列序列的CDR-L1；包含SEQIDNO:5中所列序列的CDR-L2；和包含SEQIDNO:6中所列序列的CDR-L3；或包含SEQIDNO:9中所列序列的CDR-H1；包含SEQIDNO:10中所列序列的CDR-H2；包含SEQIDNO:11中所列序列的CDR-H3；包含SEQIDNO:12中所列序列的CDR-L1；包含SEQIDNO:13中所列序列的CDR-L2；和包含SEQIDNO:14中所列序列的CDR-L3。在一些方面，所述抗体包含：SEQIDNO:7的VH序列和SEQIDNO:8的VL序列；或SEQIDNO:15的VH序列和SEQIDNO:16的VL序列。在一些方面，所述抗体包含：SEQIDNO:17的重链和SEQIDNO:18的轻链；或SEQIDNO:19的重链和SEQIDNO:20的轻链。本文还公开了一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：包含SEQIDNO:1中所列序列的CDR-H1；包含SEQIDNO:2中所列序列的CDR-H2；包含SEQIDNO:3中所列序列的CDR-H3；包含SEQIDNO:4中所列序列的CDR-L1；包含SEQIDNO:5中所列序列的CDR-L2；和包含SEQIDNO:6中所列序列的CDR-L3。本文还公开了一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：SEQIDNO:7的VH序列和SEQIDNO:8的VL序列。本文还公开了一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：SEQIDNO:17的重链和SEQIDNO:18的轻链。本文还公开了一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：包含SEQIDNO:9中所列序列的CDR-H1；包含SEQIDNO:10中所列序列的CDR-H2；包含SEQIDNO:11中所列序列的CDR-H3；包含SEQIDNO:12中所列序列的CDR-L1；包含SEQIDNO:13中所列序列的CDR-L2；和包含SEQIDNO:14中所列序列的CDR-L3。本文还公开了一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：SEQIDNO:15的VH序列和SEQIDNO:16的VL序列。本文还公开了一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：SEQIDNO:19的重链和SEQIDNO:20的轻链。在一些方面，本文公开的抗体包含人Fc区，所述人Fc区包含至少一种减少与人Fc受体结合的修饰。在一些方面，本文公开的抗体：(a)与选自1H9和3C2的抗体竞争与人SIRPα的结合；(b)不与KWar抗体竞争与人SIRPα的结合；(c)部分地与KWar抗体竞争与人SIRPα的结合；(d)抑制人CD47与人SIRPα的结合；(e)抑制人SP-A与人SIRPα的结合；(f)抑制人SP-D与人SIRPα的结合；(g)与恒河猴SIRPα结合；(h)与猕猴SIRPα结合；(i)相对于对照增加吞噬作用；或(j)能够是(a)-(i)的任何组合。在一些方面，本文公开的抗体对人SIRPα同种型是泛特异性的。本文公开的抗体，如1H9，可以结合多种人SIRPα同种型，包括V1、V2和V1/V5中的一种或多种。本文公开的抗体可以结合人SIRPα同种型V1和V2中的每一种。本文公开的抗体可以结合人SIRPα同种型V1，包括纯合子。本文公开的抗体可以结合人SIRPα同种型V2，包括纯合子。本文公开的抗体可以结合人SIRPα同种型V1/V5(杂合子)。本文公开的抗体，如1H9，可以结合多种人SIRPα同种型，包括V1、V2和V1/V5中的每一种。此类抗体可以包括1H9和3C2。可以使用本领域已知的测定，包括PCR和/或流式细胞术，来测量与人SIRPα变体的结合。例如，可以对给定的样品进行基因分型以确定SIRP状态，并且可以使用流式细胞术来确定与SIRP的结合。在一些方面，本文公开的抗体对人SIRPα同种型是特异性的。在一些方面，人SIRPα在专职抗原呈递细胞上表达。在一些方面，人SIRPα在巨噬细胞上表达。本文公开的抗体，如1H9，可以与细胞表面上的人SIRPα结合。本文公开的抗体与SIRPα的结合可以是稳定的，例如持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或大于24小时。本文公开的抗体可以避免在与SIRPα结合时大量内化。此类抗体可以包括1H9和3C2，包本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其：/n(a)特异地结合人SIRPα；/n(b)结合人SIRPα等位基因V1和V2中的每一种；/n(c)不特异地结合人SIRPγ；并且/n(d)任选地包含人Fc区，所述人Fc区包含至少一种减少与人Fc受体的结合的修饰。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170726 US 62/537,2071.一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其：
(a)特异地结合人SIRPα；
(b)结合人SIRPα等位基因V1和V2中的每一种；
(c)不特异地结合人SIRPγ；并且
(d)任选地包含人Fc区，所述人Fc区包含至少一种减少与人Fc受体的结合的修饰。


2.如权利要求1所述的分离的抗体，其包含：
(a)包含SEQIDNO:1中所列序列的CDR-H1；包含SEQIDNO:2中所列序列的CDR-H2；包含SEQIDNO:3中所列序列的CDR-H3；包含SEQIDNO:4中所列序列的CDR-L1；包含SEQIDNO:5中所列序列的CDR-L2；和包含SEQIDNO:6中所列序列的CDR-L3；或者
(b)包含SEQIDNO:9中所列序列的CDR-H1；包含SEQIDNO:10中所列序列的CDR-H2；包含SEQIDNO:11中所列序列的CDR-H3；包含SEQIDNO:12中所列序列的CDR-L1；包含SEQIDNO:13中所列序列的CDR-L2；和包含SEQIDNO:14中所列序列的CDR-L3。


3.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中：
(a)如权利要求2(a)所述的抗体包含SEQIDNO:7的VH序列和SEQIDNO:8的VL序列；或者
(b)如权利要求2(b)所述的抗体包含SEQIDNO:15的VH序列和SEQIDNO:16的VL序列。


4.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中：
(a)如权利要求3(a)所述的抗体包含SEQIDNO:17的重链和SEQIDNO:18的轻链；或者
(b)如权利要求3(b)所述的抗体包含SEQIDNO:19的重链和SEQIDNO:20的轻链。


5.一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：包含SEQIDNO:1中所列序列的CDR-H1；包含SEQIDNO:2中所列序列的CDR-H2；包含SEQIDNO:3中所列序列的CDR-H3；包含SEQIDNO:4中所列序列的CDR-L1；包含SEQIDNO:5中所列序列的CDR-L2；和包含SEQIDNO:6中所列序列的CDR-L3。


6.一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：SEQIDNO:7的VH序列和SEQIDNO:8的VL序列。


7.一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：SEQIDNO:17的重链和SEQIDNO:18的轻链。


8.一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：包含SEQIDNO:9中所列序列的CDR-H1；包含SEQIDNO:10中所列序列的CDR-H2；包含SEQIDNO:11中所列序列的CDR-H3；包含SEQIDNO:12中所列序列的CDR-L1；包含SEQIDNO:13中所列序列的CDR-L2；和包含SEQIDNO:14中所列序列的CDR-L3。


9.一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：SEQIDNO:15的VH序列和SEQIDNO:16的VL序列。


10.一种分离的人源化、人或嵌合抗体，其包含：SEQIDNO:19的重链和SEQIDNO:20的轻链。


11.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有减少的一种或多种Fc依赖性功能的人Fc区，所述人Fc区任选地包含至少一种减少与人Fc受体的结合的修饰。


12.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体：
(a)与选自1H9和3C2的抗体竞争与人SIRPα的结合；
(b)不与KWar抗体竞争与人SIRPα的结合；
(c)部分地与KWar抗体竞争与人SIRPα的结合；
(d)抑制人CD47与人SIRPα的结合；
(e)抑制人SP-A与人SIRPα的结合；
(f)抑制人SP-D与人SIRPα的结合；
(g)与恒河猴SIRPα结合；
(h)与猕猴SIRPα结合
(i)相对于对照增加吞噬作用；
(j)结合人SIRPα等位基因V1和V2中的每一种；
(k)结合人SIRPα等位基因V1、V2和V1/V5中的每一种；
(l)结合人SIRPα等位基因V1；
(m)结合人SIRPα等位基因V2；或者
(n)能够是(a)-(m)的任何组合。


13.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体对人SIRPα同种型是泛特异性的。


14.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体对人SIRPα同种型是特异性的。


15.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中人SIRPα在专职抗原呈递细胞上表达。


16.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中人SIRPα在巨噬细胞上表达。


17.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是1H9或3C2。


18.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体缺乏Fc区。


19.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述人Fc区是IgG1或IgG4。


20.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体的糖基化通过酶促去糖基化、在细菌宿主中的表达或用于糖基化的氨基酸残基的修饰而降低。


21.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述修饰降低所述人Fc区的糖基化。


22.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述人Fc区修饰包括在EU索引位置天冬酰胺297处的修饰。


23.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述人Fc区修饰包括在EU索引位置天冬酰胺297处的氨基酸取代。


24.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述人Fc区修饰包括N297A氨基酸取代，根据EU索引编号。


25.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述修饰包括在以下处的一个或多个氨基酸取代：N297A；L234A/L235A；C220S/C226S/C229S/P238S；C226S/C229S/E3233P/L234V/L235A；或L234F/L235E/P331S，根据EU索引编号。


26.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述修饰包括在以下处的一个或多个氨基酸取代：N297；L234/L235；C220/C226/C229/P238；C226/C229/E3233/L234/L235；或L234/L235/P331，根据EU索引编号。


27.如上述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述修饰包括在EU索引位置234、235和/或237处的CH2区域中的一个或多个氨基酸取代。


28.如上述权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘劼，JP·沃尔克梅，
申请(专利权)人：四十七公司，
类型：发明
国别省市：美国;US