针对C-KIT的人源化抗体制造技术

本发明专利技术提供了特异性结合c‑Kit的抗体。本发明专利技术还提供了消融内源性HSPC的方法，其包括向需要消融的受试者施用上述抗体的有效方案。本发明专利技术还提供了治疗表达c‑Kit的癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用抗体的有效方案。本发明专利技术还提供了药物组合物，其包含c‑Kit抗体和药学上可接受的载体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对C-KIT的人源化抗体相关申请的交叉引用本申请要求2018年11月26日提交的62/771,526的权益，其全部内容通过引用而并入用于所有目的。序列表引用本申请包括2019年11月25日创建的31,466字节的txt文件540687USSL_ST25中的序列，其通过引用而并入。
技术介绍
c-Kit(CD117)是一种III型受体酪氨酸激酶，其与干细胞因子(SCF)结合，干细胞因子是导致某些类型细胞生长的物质，也称为“钢因子”或“c-Kit配体”。当这种受体与干细胞因子结合时，其形成二聚体，从而激活其固有的酪氨酸激酶活性，进而磷酸化并激活在细胞中传播信号的信号转导分子。C-Kit是用于鉴定骨髓中某些类型的HSPC的细胞表面标志物。造血干细胞(HSC)、多能祖细胞(MPP)和普通骨髓祖细胞(CMP)表达高水平的c-Kit。已经提出在干细胞替代疗法中可以使用抗c-Kit抗体以消融内源性细胞(WO2016033201、WO2008067115)。专利技术概述本专利技术提供了特异性结合人c-Kit的抗体，其包含成熟重链可变区和成熟轻链可变区，除了存在1、2或3个CDR残基取代以外，所述成熟重链可变区包含分别为SEQIDNO：2-4的由Kabat定义的CDRH1、H2和H3，所述成熟轻链可变区包含分别为SEQIDNO：6-8的由Kabat定义的CDRL1、L2和L3，所述取代选自重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q、和轻链位置30处的N至Q，这些位置根据Kabat编号。任选地，除了存在重链位置64处的K至Q和轻链位置30处的N至Q的取代以外，由Kabat定义的CDRH1、H2和H3分别为SEQIDNO：2-4，由Kabat定义的CDRL1、L2和L3分别为SEQIDNO：6-8。任选地，除了存在重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q、和轻链位置30处的N至Q的取代以外，由Kabat定义的CDRH1、H2和H3分别为SEQIDNO：2-4，由Kabat定义的CDRL1、L2和L3分别为SEQIDNO：6-8，。任选地，成熟重链可变区与SEQIDNO：13、17或21(AH2、AH3或AH4)显示出至少85％、90％、95％、98％、99％的序列同一性，成熟轻链可变区与SEQIDNO：53(NL2)显示出至少85％、90％、95％、98％、99％的序列同一性，条件是与所示SEQIDNO的任何变化在CDR之外。任选地，通过Kabat编号的重链位置1是E。任选地，成熟轻链可变区的以下位置被如下氨基酸占据：位置9被L占据，位置12被P占据，位置14被T占据，位置15被P占据，位置18被P占据，位置20被S占据，位置22被S占据，位置37被L占据，位置43被S占据，位置45被Q占据，位置74被K占据，位置77被R占据，位置78被V占据，位置79被E占据，位置84被G占据。任选地，除了位置1可以是E以外，成熟重链可变区具有选自SEQIDNO：13、17或21的序列，并且成熟轻链可变区具有SEQIDNO：53的序列。任选地，成熟重链可变区与重链恒定区连接，并且成熟轻链可变区与成熟轻链恒定区连接。任选地，重链恒定区是人IgG1。任选地，抗体相对于AMG191具有增强的与人c-Kit的结合。任选地，抗体相对于AMG191-IgG1具有增强的ADCP。任选地，抗体相对于AMG191-IgG1具有增强的ADCC。本专利技术还提供了药物组合物，其包含如上所述的抗体和药学上可接受的载体。本专利技术还提供了消融内源性HSPC的方法，其包括向需要消融的受试者施用如上所述的抗体的有效方案。本专利技术还提供了治疗表达c-Kit的癌症的方法，其包括向患有所述癌症的受试者施用如上所述的抗体的有效方案。定义单克隆抗体或其他生物实体通常以分离的形式提供。这意味着抗体或其他生物实体相对于由其生产或纯化引起的干扰蛋白和其他污染物，通常具有至少50％w/w的纯度，但不排除单克隆抗体与过量的药学上可接受的载体或旨在促进其使用的其他媒介物组合的可能性。有时，单克隆抗体相对于来自生产或纯化的干扰蛋白和污染物的纯度为至少60％、70％、80％、90％、95％或99％w/w。通常，分离的单克隆抗体或其他生物实体是其纯化后剩余的主要大分子物质。特异性结合是在数量上可检测地更高于并且可区别于发生在至少一个不相关靶标上的非特异性结合。特异性结合可以是在特定官能团之间或特定空间配合(例如，锁和钥匙类型)之间形成键的结果，而非特异性结合通常是范德华力的结果。然而，特异性结合不一定意味着抗体结合一个且仅一个靶标。本专利技术的抗体通常以至少108、109、1010、1011或1012M-1的亲和力特异性结合c-Kit。基本的抗体结构单元是亚基的四聚体。每个四聚体包括多肽链的两个相同配对，每对具有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括约100至110或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。该可变区最初被表达为与可裂解的信号肽连接。没有信号肽的可变区有时被称为成熟可变区。因此，例如，轻链成熟可变区是指没有轻链信号肽的轻链可变区。每条链的羧基末端部分限定了主要负责效应物功能的恒定区。轻链分为κ或λ。重链分为γ、μ、α、δ或ε，并且将抗体的同种型分别定义为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。在轻链和重链中，可变区和恒定区由约12个或更多个氨基酸的“J”区相连，其中重链还包括约10个或更多个氨基酸的“D”区。通常参见，FundamentalImmunology，Paul，W.，ed.，2nded.RavenPress，N.Y.,1989,Ch.7(通过引用全文并入用于所有目的)。免疫球蛋白轻链或重链可变区(在本文中分别也称为“轻链可变结构域”(“VL结构域”)或“重链可变结构域”(“VH结构域”))由被三个“互补决定区”或“CDR”中断的“框架”区组成。框架区用于排列CDR以与抗原表位特异性结合。CDR包括主要负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。从氨基末端到羧基末端，VL和VH结构域均包含以下框架(FR)区和CDR区：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。VL结构域的CDR1、2和3在本文中也分别称为CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；VH结构域的CDR1、2和3在本文中也分别称为CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。氨基酸在每个VL和VH结构域的分配是根据CDR的任何常规定义。常规定义包括Kabat定义(Kabat，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(NationalInstitutesofHealth，Bethesda，MD，1987和1991)，Chothia定义(Chothia&Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917,1987；Chothiaetal.,Nature342:878-883,1989)；ChothiaKabatCDR的复本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.特异性结合人c-Kit的抗体，其包含成熟重链可变区和成熟的轻链可变区，除了存在1、2或3个CDR残基取代以外，所述成熟重链可变区包含分别为SEQ ID NO：2-4的由Kabat定义的CDR H1、H2和H3，所述成熟轻链可变区包含分别为SEQ ID NO：6-8的由Kabat定义的CDRL1、L2和L3，所述取代选自重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q、和轻链位置30处的N至Q，这些位置根据Kabat编号。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181126 US 62/771,5261.特异性结合人c-Kit的抗体，其包含成熟重链可变区和成熟的轻链可变区，除了存在1、2或3个CDR残基取代以外，所述成熟重链可变区包含分别为SEQIDNO：2-4的由Kabat定义的CDRH1、H2和H3，所述成熟轻链可变区包含分别为SEQIDNO：6-8的由Kabat定义的CDRL1、L2和L3，所述取代选自重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q、和轻链位置30处的N至Q，这些位置根据Kabat编号。


2.权利要求1的抗体，其中除了存在重链位置64处的K至Q和轻链位置30处的N至Q的取代以外，由Kabat定义的CDRH1、H2和H3分别为SEQIDNO：2-4，并且由Kabat定义的CDRL1、L2和L3分别为SEQIDNO：6-8。


3.权利要求1的抗体，其中除了存在重链位置60处的N至A、重链位置64处的K至Q、和轻链位置30处的N至Q的取代以外，由Kabat定义的CDRH1、H2和H3分别为SEQIDNO：2-4，由Kabat定义的CDRL1、L2和L3分别为SEQIDNO：6-8。


4.前述权利要求中任一项的抗体，其中所述成熟重链可变区与SEQIDNO：13、17或21(AH2、AH3或AH4)显示出至少85％、90％、95％、98％、99％的序列同一性，并且所述成熟轻链可变区与SEQIDNO：53(NL2)显示出至少85％、90％、95％、98％、99％的序列同一性，其中与所示SEQIDNO的任何变化在由Kabat定义的CDR之外。


5.权利要求4的抗体，其中通过Kabat编号的重链位置1是E。

【专利技术属性】
技术研发人员：J刘，K索姆帕利，
申请(专利权)人：四十七公司，
类型：发明
国别省市：美国;US