靶向人LILRB2的纳米抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗LILRB2的纳米抗体、编码所述纳米抗体的核酸、包含所述核酸的表达载体、包含所述纳米抗体的药物组合物、以及制备药物的用途。药物的用途。药物的用途。

【技术实现步骤摘要】
靶向人LILRB2的纳米抗体及其应用


[0001]本专利技术属于抗体工程领域，具体涉及一种用于诊断或治疗肿瘤的治疗性单域抗体，特别是涉及一种抗LILRB2的纳米抗体、其衍生蛋白以及用于制备药物的用途。

技术介绍

[0002]纳米抗体是目前最小的抗体分子，最初由比利时科学家Hamers在骆驼血液中发现，它是工程化抗体产品中备受关注的一类。纳米抗体主要优点：一是体积是普通抗体的1/10，因为体积小，其在动物组织体内的穿透力强，如，可以通过人体的脑组织，可以达到高密度的肿瘤内部，而普通抗体却不能，这使得可以通过纳米抗体来治疗某些肿瘤或脑部疾病；二是抗原特异性好；三是易于基因改造，方便人工改造以获得对抗不同病原的抗体；四是稳定性高，如，纳米抗体在体内不被自然分解的时间比普通抗体长(意味着药效时间更持久)，纳米抗体甚至能从人胃中通过而保持有效性。
[0003]LILRB2，又称ILT4，主要在髓系细胞上表达，包括单核细胞、树突状细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞。基因学研究显示多种肿瘤微环境中的肿瘤关联巨噬细胞(TAM)高表达LILRB2，抑制LILRB2(小鼠的对应蛋白叫Pirb)降低Treg和MDSC在肿瘤组织的侵入。动物实验显示Pirb抗体抑制抑制肿瘤生长，并与PD
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1抗体有协同作用。LILRB2主要在骨髓细胞表达、其它组织表达有限，这令on
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target、off
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tissue毒性比较轻微。人LILRB2是髓细胞成熟过程中重要的稳态表面调节因子，是一种有前途的、专门针对髓细胞功能测定的髓免疫检查点靶点，具有重要的治疗价值。

技术实现思路

[0004]现有技术中的ScFv、Fab或全IgG类抗LILRB2抗体分子，结构复杂、分子较大，虽然能将活性分子连接到LILRB2上，但影响活性分子的功能、方法复杂、负载效率也较低；纳米抗体分子较小、易于操作，但人源化程度低、亲和力不高，延长半衰期的性能有待进一步提高。
[0005]针对上述现有技术的不足，本专利技术提供一系列抗人LILRB2纳米抗体序列及制备方案。
[0006]第一方面，本专利技术提供一种抗LILRB2的纳米抗体，根据本专利技术的实施例，所述纳米抗体能够特异性结合LILRB2，且所述纳米抗体中的VHH链的互补决定区CDR为选自下组的一种或多种：
[0007](1)SEQ ID NO：14所示的CDR1，SEQ ID NO：15所示的CDR2，和SEQ ID NO：16所示的CDR3；
[0008](2)SEQ ID NO：17所示的CDR1，SEQ ID NO：18所示的CDR2，和SEQ ID NO：19所示的CDR3；
[0009](3)SEQ ID NO：20所示的CDR1，SEQ ID NO：21所示的CDR2，和SEQ ID NO：22所示的CDR3；
[0010](4)SEQ ID NO：23所示的CDR1，SEQ ID NO：21所示的CDR2，和SEQ ID NO：24所示的CDR3；
[0011](5)SEQ ID NO：25所示的CDR1，SEQ ID NO：26所示的CDR2，和SEQ ID NO：27所示的CDR3。
[0012](6)SEQ ID NO：28所示的CDR1，SEQ ID NO：29所示的CDR2，和SEQ ID NO：30所示的CDR3。
[0013](7)SEQ ID NO：31所示的CDR1，SEQ ID NO：32所示的CDR2，和SEQ ID NO：33所示的CDR3。
[0014](8)SEQ ID NO：34所示的CDR1，SEQ ID NO：35所示的CDR2，和SEQ ID NO：36所示的CDR3。
[0015](9)SEQ ID NO：25所示的CDR1，SEQ ID NO：37所示的CDR2，和SEQ ID NO：27所示的CDR3。
[0016]进一步，在本专利技术的一些实施方案中，上述纳米抗体是人源化的VHH或骆驼源化的VHH。
[0017]进一步，在本专利技术的一些实施方案中，上述纳米抗体具有如SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：12任一项所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：3至SEQ ID NO：12任一项所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。
[0018]本专利技术所述的“至少80％同一性”为例如至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、进一步优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至100％同一性等≥80％的任何百分比的同一性。
[0019]第二方面，本专利技术提供一种融合蛋白，根据本专利技术的实施例，其包括能够特异性结合LILRB2的功能结构域，所述功能结构域由上述任一项所述的抗LILRB2的纳米抗体构成。
[0020]本专利技术提供的纳米抗体可以与其他的任意蛋白或物质融合，以实现不同的目的，例如与荧光蛋白、酶或放射性元等结合以实现易于检测的目的，再如与治疗LILRB2介导相关疾病的药物分子融合以实现更佳的治疗目的。与该纳米抗体融合的蛋白类型，本领域技术人员可以根据实际需要或目的合理选择，无论融合何种类型的物质融合，其也在本专利技术的范围内。
[0021]第三方面，本专利技术提供一种抗LILRB2的抗体，根据本专利技术的实施例，所述抗体为传统抗体或其功能性片段，所述抗体的重链可变区由前述任一项所述的抗LILRB2的纳米抗体构成；
[0022]进一步，上述功能性片段为所述传统抗体的Fab、Fab
’
、(Fab
’
)2、Fv、scFv或sdFv结构。
[0023]传统抗体在结构上由两条相同的重链和两条相同的轻链组成，轻链具有轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)；重链具有重链可变区(VH)和重链恒定区(CH1，CH2，CH3和/或CH4)。在本专利技术公开了具有能够特异性结合LILRB2的纳米抗体的结构前提下，本领域技术人员容易想到利用本专利技术的纳米抗体对传统抗体以改造，例如将本专利技术纳米抗体的CDR区结构应用到传统抗体上，以获得可以特异性结合LILRB2的传统抗体，这类传统体也是属于本专利技术的保护范围；进一步地，基于传统抗体的结构，其部分结构例如Fab、Fab
’
、(Fab
’
)2、Fv、scFv或sdFv结构等也是具有LILRB2结合特异性的，这也是属于本专利技术的保护范围。
[0024]第四方面，本专利技术提供了一种治疗疾病的组合物，其包括如上任一项所述的抗LILRB2的纳米抗体、如上所述的融合蛋白或如上所述的抗体，以及药学上可接受的辅料。
[0025]本专利技术所提供的药物组合物含有本专利技术实施例所述的抗体或抗原结合片段中的至少一种(例如，一种、两种、三种或四种)，本文所述的任何抗体或抗原结合片段中的两种或更多种(例如，两种、三种或四种)可以以任何组合存在于药物组合物中。可以以本领域已知的任何方式配制药物组合物。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗LILRB2的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体能够特异性结合LILRB2，且所述纳米抗体中的VHH链的互补决定区CDR为选自下组的一种或多种：(1)SEQ ID NO：23所示的CDR1，SEQ ID NO：21所示的CDR2，和SEQ ID NO：24所示的CDR3；(2)SEQ ID NO：17所示的CDR1，SEQ ID NO：18所示的CDR2，和SEQ ID NO：19所示的CDR3；(3)SEQ ID NO：20所示的CDR1，SEQ ID NO：21所示的CDR2，和SEQ ID NO：22所示的CDR3；(4)SEQ ID NO：28所示的CDR1，SEQ ID NO：29所示的CDR2，和SEQ ID NO：30所示的CDR3。2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体是人源化的VHH或骆驼源化的VHH。3.根据权利要求1或2所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体具有如SEQ ID NO：4、5、6、8任一项所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：4、5、6、8任一项所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。4.一种融合蛋白，其特征在于，其包括能够特异性结合LILRB2的功能结构域，所述功能结构域由权利要求1
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3任一项所述的抗LILRB2的纳米抗体构成。5.一种药物组合物，其特征在于，其包括权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦莎莎，王荣娟，毛冠凡，张畅，王双，张锦超，
申请(专利权)人：北京科诺信诚科技有限公司，
类型：发明
国别省市：