【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药领域，具体地，涉及抗人cd73的纳米抗体及其应用，更具体地，涉及抗人cd73纳米抗体、编码该抗体的核酸，表达该抗体的载体和细胞，制备该抗体的方法，含有该抗体的药物组合物、以及该抗体在制备药物中的用途。
技术介绍
1、纳米抗体是目前最小的抗体分子，其分子量是普通抗体的1/10，最初由比利时科学家hamers，r在骆驼血液中发现，它是工程化抗体产品中备受关注的一类。纳米抗体除具备单克隆抗体的抗原反应性外，还拥有一些独特的功能特性，如分子质量小，稳定性强、可溶性好、易表达、靶向性强、人源化简单等，尤其是适合进行双/多特异治疗性抗体的开发和car-t/m/nk等疗法的开发。
2、cd73(ecto-5’-nucleotidase)分化簇73，也称为5'-核苷酸酶(5'-nt)或胞外-5'-核苷酸酶，是一种核苷酸酶，由葡糖基磷脂酰肌醇(gpi)锚定在细胞表面形成同源二聚体，但同时也可被切割并游离于循环系统。cd73可将单磷酸腺苷(amp)水解成腺苷，而腺苷可通过多种机制促进肿瘤生长、血管生成和迁移。在肿瘤微环境的肿瘤细胞、dc细胞、treg细胞、nk细胞、mdsc、tam等多种细胞表面均有cd73的表达。临床前研究显示，免疫细胞和非免疫细胞表达的cd73均可以促进肿瘤的免疫逃逸，发展和转移，其中treg细胞相关的cd73-腺苷信号对ctl(细胞毒性t细胞)和nk细胞功能的抑制最为明显。
3、阻断/消耗cd73分子能够有效激活抗肿瘤的免疫反应，改变抑制的免疫微环境，从而发挥抗肿瘤作用。多个临床在研品
4、但到目前为止，尚未有具有酶抑制活性的抗cd73纳米抗体进入临床试验。由于纳米抗体分子量小，组织渗透性好等特点，可能在实体瘤的治疗中相比单克隆抗体具有更好的抗肿瘤药效。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供抗人cd73纳米抗体，能高亲和力结合人cd73，并且具有抑制cd73酶活性的能力，从而对肿瘤具有潜在的治疗价值。
2、第一方面，本专利技术提供一种特异性结合cd73的纳米抗体，根据本专利技术的实施例，所述纳米抗体包含cdrs组合，所述cdrs组合包含cdr1、cdr2和cdr3；所述cdr1、cdr2和cdr3具有选自以下的任意序列组合:
3、(1)seq id no：11所示的cdr1，seq id no：12所示的cdr2，和seq id no：13所示的cdr3；
4、(2)seq id no：14所示的cdr1，seq id no：15所示的cdr2，和seq id no：16所示的cdr3；
5、(3)seq id no：17所示的cdr1，seq id no：18所示的cdr2，和seq id no：19所示的cdr3；
6、(4)seq id no：20所示的cdr1，seq id no：21所示的cdr2，和seq id no：22所示的cdr3；
7、(5)seq id no：17所示的cdr1，seq id no：18所示的cdr2，和seq id no：23所示的cdr3。
8、进一步，在本专利技术的一些实施方案中，上述纳米抗体是人源化的vhh或骆驼源化的vhh。
9、进一步，在本专利技术的一些实施方案中，上述纳米抗体具有如seq id no：5至seq idno：9任一项所示的氨基酸序列，或与seq id no：5至seq id no：9任一项所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。
10、本专利技术所述的“至少80％同一性”为例如至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、进一步优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至100％同一性等≥80％的任何百分比的同一性。
11、第二方面，本专利技术提供一种融合蛋白，根据本专利技术的实施例，其包括能够特异性结合cd73的功能结构域，所述功能结构域由上述任一项所述的抗cd73的纳米抗体构成。
12、本专利技术提供的纳米抗体可以与其他的任意蛋白或物质融合，以实现不同的目的，例如与荧光蛋白、酶或放射性元等结合以实现易于检测的目的，再如与治疗cd73介导相关疾病的药物分子融合以实现更佳的治疗目的。与该纳米抗体融合的蛋白类型，本领域技术人员可以根据实际需要或目的合理选择，无论融合何种类型的物质融合，其也在本专利技术的范围内。
13、第三方面，本专利技术提供一种抗cd73的抗体，根据本专利技术的实施例，所述抗体为传统抗体或其功能性片段，所述抗体的重链可变区由前述任一项所述的抗cd73的纳米抗体构成；
14、进一步，上述功能性片段为所述传统抗体的fab、fab’、(fab’)2、fv、scfv或sdfv结构。
15、传统抗体在结构上由两条相同的重链和两条相同的轻链组成，轻链具有轻链可变区(vl)和轻链恒定区(cl)；重链具有重链可变区(vh)和重链恒定区(ch1，ch2，ch3和/或ch4)。在本专利技术公开了具有能够特异性结合cd73的纳米抗体的结构前提下，本领域技术人员容易想到利用本专利技术的纳米抗体对传统抗体以改造，例如将本专利技术纳米抗体的cdr区结构应用到传统抗体上，以获得可以特异性结合cd73的传统抗体，这类传统体也是属于本专利技术的保护范围；进一步地，基于传统抗体的结构，其部分结构例如fab、fab’、(fab’)2、fv、scfv或sdfv结构等也是具有cd73结合特异性的，这也是属于本专利技术的保护范围。
16、第四方面，本专利技术提供一种分离的核酸分子，其编码如上任一项所述的纳米抗体。
17、基于本专利技术公开的内容，本领域技术人员通过本领域常规技术容易获得编码上述纳米抗体以及融合蛋白的多核苷酸分子，并基于密码子的简并性，该多核酸分子是多变的，其具体的碱基序列存在多种可能性，基于此，无论其多核酸分子如何变化，只要其能够编码本专利技术的纳米抗体或融合蛋白即属于本专利技术的保护范围。
18、第五方面，本专利技术提供含有如上所述的核酸分子的载体。
19、第六方面，本专利技术提供含有如上所述的载体的重组细胞。
20、本专利技术实施例提供了包括本文公开的分离的多核苷酸(例如，编码本文公开的多肽的多核苷酸)的重组载体(例如表达载体)、引入了重组载体的宿主细胞(即，使得所述宿主细胞含有多核苷酸和/或含多核苷酸的载体)、以及通过重组技术产生重组抗体多肽或其片段。
21、如本文所用，“载体”是当载体被引入宿主细胞时能够将一个或多个目标多核苷酸递送至所述宿主细胞的任何构建体。“表达载体”能够在已引入表达载体的宿主细胞中递送和表达一个或多个目标本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.特异性结合CD73的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包含CDRs组合，所述CDRs组合包含CDR1、CDR2和CDR3；所述CDR1、CDR2和CDR3具有选自以下的任意序列组合:
2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体是人源化的VHH或骆驼源化的VHH。
3.根据权利要求1或2所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体具有如SEQ ID NO：5至SEQ ID NO：9任一项所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：5至SEQ ID NO：9任一项所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。
4.一种融合蛋白，其特征在于，其包括能够特异性结合CD73的功能结构域，所述功能结构域由权利要求1-3任一项所述的抗CD73的纳米抗体构成。
5.一种抗CD73的抗体，其特征在于，所述抗体为传统抗体或其功能性片段，所述抗体的重链可变区由权利要求1-3任一项所述的抗CD73的纳米抗体构成；
6.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1-3任一项所述的抗CD73纳米抗体、编码权利要求4所述的融合蛋
7.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求6所述的核酸分子。
8.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求7所述的表达载体。
9.制备权利要求1-3任一项所述的纳米抗体的方法，其特征在于，其包括：培养权利要求8所述的重组细胞，从培养产物中分离纯化获得所述纳米抗体。
10.一种免疫偶联物，其特征在于，包含权利要求1-3任一项的纳米抗体、以及偶联部分；
11.一种药物组合物，其特征在于，其包括权利要求1-3任一项所述的抗CD73的纳米抗体、权利要求4所述的融合蛋白、权利要求5所述的抗体、或权利要求10所述的免疫偶联物，以及药学上可接受的辅料。
12.权利要求1-3任一项所述的抗CD73纳米抗体、权利要求4所述的融合蛋白、权利要求5所述的抗体、权利要求10所述的免疫偶联物、或权利要求11所述的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、治疗和/或改善实体瘤或血液瘤。
...【技术特征摘要】
1.特异性结合cd73的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包含cdrs组合，所述cdrs组合包含cdr1、cdr2和cdr3；所述cdr1、cdr2和cdr3具有选自以下的任意序列组合:
2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体是人源化的vhh或骆驼源化的vhh。
3.根据权利要求1或2所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体具有如seq id no：5至seq id no：9任一项所示的氨基酸序列，或与seq id no：5至seq id no：9任一项所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。
4.一种融合蛋白，其特征在于，其包括能够特异性结合cd73的功能结构域，所述功能结构域由权利要求1-3任一项所述的抗cd73的纳米抗体构成。
5.一种抗cd73的抗体，其特征在于，所述抗体为传统抗体或其功能性片段，所述抗体的重链可变区由权利要求1-3任一项所述的抗cd73的纳米抗体构成；
6.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1-3任一项所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：焦莎莎，王荣娟，毛冠凡，张畅，王双，张锦超，
申请(专利权)人：北京科诺信诚科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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