隐形嵌合抗原受体及其减少对正常细胞的细胞毒性的用途制造技术

本申请涉及嵌合抗原受体(CAR)，其包含靶标依赖性开关CAR。本发明专利技术的CAR可以减少对正常细胞的细胞毒性并改善CAR

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】隐形嵌合抗原受体及其减少对正常细胞的细胞毒性的用途
[0001]本申请要求于2020年8月19日提交的标题为“靶标依赖性开关嵌合抗原受体”的美国临时专利申请号63/067,870的权益；将该专利的内容通过援引以其全文并入本文。


[0002]本申请涉及生物制药领域，并且特别地涉及隐形嵌合抗原受体(CAR)及其相关多核苷酸、载体、组合物、制备方法和用途。

技术介绍

[0003]CAR T细胞疗法在血液恶性肿瘤治疗中的初步成功预示了免疫治疗性治疗策略的新领域的快速发展。CAR是设计受体，其典型地具有衍生自CD3ζITAM基序的模块化激活结构域和例如来自4
‑
1BB或CD28的共刺激结构域。由这些受体进行的靶标识别通常通过CAR的细胞外末端的scFv结构域提供，尽管也设计了可替代方法。
[0004]安全性是阻碍CAR
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T疗法发展的主要障碍。CAR分子通常组成型地表达在T细胞表面上。因此，当将CAR
‑
T细胞注射到患者体内时，它们将迁移到表达靶抗原的不同组织，通常对正常组织以及肿瘤细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合抗原受体(CAR)，该嵌合抗原受体包含：(1)细胞外配体结合结构域，其包含与预定抗原特异性结合的单链可变片段(scFv)；其中优选地，该预定抗原是肿瘤相关抗原(TAA)；更优选地，该TAA选自以下中的一种或多种：CEA、密封蛋白18.2、CGC3、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、CD38、CD19、CD20、CD22、BCMA、CAIX、CD446、CD13、EGFR、EGFRvIII、EpCam、GD2、EphA2、HER1、HER2、ICAM
‑
1、IL13Ra2、间皮素、MUC1、MUC16、PSCA、NY
‑
ESO
‑
1、MART
‑
1、WT1、MAGE
‑
A10、MAGE
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A3、MAGE
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A4、EBV、NKG2D、PD1、PD
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L1、CD25、IL
‑
2、和CD3；(2)跨膜(tm)连接近膜(jm)结构域；其中该跨膜连接近膜结构域包含IL2受体β链(IL2Rβ)跨膜结构域和IL2Rβ近膜结构域，并且该跨膜连接近膜结构域与IL2Rβ降解序列(DT)相邻；其中优选地，该IL2Rβ降解序列在该跨膜连接近膜结构域的C
‑
末端处；其中优选地，该IL2Rβ降解序列包含与由SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；其中该跨膜连接近膜结构域包含低密度脂蛋白受体(LDLR)跨膜结构域和LDLR近膜结构域；或其中该跨膜连接近膜结构域包含癫痫发作6样蛋白2(SEZ6L2)跨膜结构域和SEZ6L2近膜结构域；(3)细胞内结构域；其中优选地，该细胞内结构域包含信号传导结构域；更优选地，该信号传导结构域包含一个或多个选自由以下组成的组的信号传导结构域：4
‑
1BB信号传导结构域、CD28信号传导结构域和CD3ζ信号传导结构域。2.根据权利要求1所述的CAR，其中该CAR从N
‑
末端到C
‑
末端包含：TAA scFv
‑
CD8铰链
‑
IL2Rβtm jm DT
‑4‑
1BB
‑
CD3ζ、TAA scFv
‑
CD8铰链
‑
IL2Rβtm jm DT
‑
CD28
‑
CD3ζ、TAA scFv
‑
CD8铰链
‑
LDLR tm jm
‑4‑
1BB
‑
CD3ζ、或TAA scFv
‑
CD8铰链
‑
SEZ6L2 tm jm
‑4‑
1BB
‑
CD3ζ；其中优选地，该TAA scFv选自CEA scFv、密封蛋白18.2scFv和HER2 scFv中的一种或多种；更优选地，CEA scFv为MN14op CEA scFv，或密封蛋白18.2scFv是841密封蛋白18.2scFv；最优选地，MN14op CEA scFv、841密封蛋白18.2scFv、或HER2 scFv包含与分别由SEQ ID NO.5、30或31表示的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；其中优选地，该CAR的N
‑
末端进一步含有前导序列和/或HA序列。3.根据权利要求2所述的CAR，其中该CAR从N
‑
末端到C
‑
末端包含：HA
‑
MN14op CEA scFv
‑
CD8铰链
‑
IL2Rβtm jm DT
‑4‑
1BB
‑
CD3ζ、HA
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MN14op CEA scFv
‑
CD8铰链
‑
IL2Rβtm jm DT
‑4‑
1BB
‑
CD3ζ
‑
P2A
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GFP、HER2 scFv
‑
CD8铰链
‑
IL2Rβtm jm DT
‑4‑
1BB
‑
CD3ζ
‑
P2A
‑
GFP、HER2 scFv
‑
CD8铰链
‑
IL2Rβtm jm DT
‑
CD28
‑
CD3ζ
‑
P2A
‑
GFP、MN14op CEA scFv
‑
CD8铰链
‑
IL2Rβtm jm DT
‑4‑
1BB
‑
CD3ζ
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P2A
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GFP、MN14op CEA scFv
‑
CD8铰链
‑
LDLR tm jm
‑4‑
1BB
‑
CD3ζ
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P2A
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GFP、MN14op CEA scFv
‑
CD8铰链
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SEZ6L2 tm jm
‑4‑
1BB
‑
CD3ζ
‑
P2A
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GFP、841密封蛋白18.2scFv
‑
CD8铰链
‑
SEZ6L2 tm jm
‑4‑
1BB
‑
CD3ζ
‑
P2A
‑
GFP、或HER2 scFv
‑
CD8铰链
‑
SEZ6L2 tm jm
‑4‑
1BB
‑
CD3ζ
‑
P2A
‑
GFP，任选地该CAR不包括P2A
‑
GFP和/或HA；
其中优选地，该CAR包含与分别由SEQ ID NO.9、14、15、17、18、19、21、22或24表示的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，任选地该CAR的氨基酸序列不包括P2A
‑
GFP、前导序列、和/或HA的氨基酸序列。4.一种嵌合抗原受体(CAR)，该嵌合抗原受体包含：(1)细胞外配体结合结构域，其包含与预定抗原特异性结合的单链可变片段(scFv)；其中优选地，该预定抗原是肿瘤相关抗原(TAA)；更优选地，该TAA选自以下中的一种或多种：CEA、密封蛋白18.2、CGC3、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、CD38、CD19、CD20、CD22、BCMA、CAIX、CD446、CD13、EGFR、EGFRvIII、EpCam、GD2、EphA2、HER1、HER2、ICAM
‑
1、IL13Ra2、间皮素、MUC1、MUC16、NKG2D、PSCA、NY
‑
ESO
‑
1、MART
‑
1、WT1、MAGE
‑
A10、MAGE
‑
A3、MAGE
‑
A4、EBV、PD1、PD
‑
L1、CD25、IL
‑
2、和CD3；(2)跨膜结构域，以及(3)包含IL2Rβ降解序列(DT)和至少一个信号传导结构域的细胞质区段；其中优选地，该IL2Rβ降解序列包含与由SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；其中优选地，该IL2Rβ降解序列在该细胞质区段的C
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末端处。5.根据权利要求4所述的CAR，其中该CAR从N
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末端到C
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末端包含：TAA scFv
‑
CD8铰链
‑
CD8 tm
‑4‑
1BB
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CD3ζ
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IL2RβDT；其中优选地，该CAR的N
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末端进一步含有前导序列和/或HA序列；其中优选地，该TAA scFv是CEA scFv；更优选地，该CEA scFv是MN14op CEA scFv；最优选地，MN14op CEAscFv包含与由SEQ ID NO.5表示的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；最优选地，该CAR包含与分别由SEQ ID NO.8或16表示的氨基酸序列具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，任选地该CAR的氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：周立，迈克尔，
申请(专利权)人：山东博安生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：