促进骨骼发育的水牛酪蛋白水解肽制备方法与应用技术

本发明专利技术属于乳制品加工技术领域，具体涉及促进骨骼发育的水牛酪蛋白水解肽制备方法与应用。该制备方法包括：将水牛酪蛋白溶解于水中获得酪蛋白水溶液；调节酪蛋白水溶液pH值至3.0，加入模拟胃液，并加入CaCl2、胃蛋白酶和胃脂酶；置于37℃下保温0.1～2h，获得水牛酪蛋白酶解液1；调节水牛酪蛋白酶解液1pH值至7.0，加入模拟肠液，并加入胆盐、CaCl2和胰酶；置于37℃下保温0.1～2h，获得水牛酪蛋白酶解液2；采用膜分离技术对水牛酪蛋白酶解液2进行分离，获取分子量小于1kDa的渗透物；并将渗透物进行浓缩、干燥获得水牛酪蛋白水解肽。该方法酶解效率高，目标功能肽的含量达到1.5％～3.5％。目标功能肽的含量达到1.5％～3.5％。

【技术实现步骤摘要】
促进骨骼发育的水牛酪蛋白水解肽制备方法与应用


[0001]本专利技术属于乳制品加工
，具体涉及促进骨骼发育的水牛酪蛋白水解肽制备方法与应用。

技术介绍

[0002]水牛乳营养价值高，总干物质、脂肪、蛋白质、乳糖、矿物质含量均高于牛乳。水牛乳蛋白质含量(4.1～5.2g/100g)约是牛乳的1.5倍(3.0～3.9 g/100g)，其中酪蛋白是最主要的蛋白质，占比～80％。水牛乳中酪蛋白含量为3.8～5.0g/100g，是牛奶的1.5倍(2.5～3.0g/100g)。酪蛋白是一种营养蛋白，是多种生物活性肽的主要来源，据报道已有数十种生物活性肽从酪蛋白中水解并确认功能。
[0003]现有酪蛋白水解技术主要为在酪蛋白溶液中直接添加一种蛋白酶或几种复合蛋白酶，水解物经纯化或干燥后得到水解肽，酶的添加量为消化底物的 0.1％～0.5％，酶解时间通常为3～6h，酶解时间较长，酶解效率及酪蛋白水解度有限。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术采用静态体外模拟消化技术，通过两阶段酶解法对酪蛋白进行水解，经分离、干燥获得具有促进骨骼发育的肽。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术实施例提供了一种促进骨骼发育的水牛酪蛋白水解肽制备方法，所述制备方法具体包括以下步骤：
[0006]S1:将水牛酪蛋白溶解于42～48℃的水中获得酪蛋白水溶液；
[0007]S2:用浓盐酸调节所述酪蛋白水溶液的pH值至3.0，加入等体积的模拟胃液，并依次加入CaCl2溶液，胃蛋白酶和胃脂酶获得混合液1；将所述混合液 1置于37℃条件下保温0.1～2h，获得水牛酪蛋白酶解液1；
[0008]S3:用3mol/LNaOH溶液调节所述水牛酪蛋白酶解液1的pH值至7.0，加入等体积的模拟肠液，并依次加入胆盐、CaCl2溶液和胰酶获得混合液2；将所述混合液2置于37℃条件下保温0.1～2h，获得水牛酪蛋白酶解液2；
[0009]S4:采用膜分离技术对所述水牛酪蛋白酶解液2进行分离，获取分子量小于1kDa的渗透物；并将所述渗透物进行浓缩、干燥获得水牛酪蛋白水解肽。
[0010]进一步的，所述模拟胃液为：
[0011]氯化钾6.9mmol/L、磷酸二氢钾0.9mmol/L、碳酸氢钠25mmol/L、氯化钠47.2mmol/L、氯化镁0.1mmol/L、碳酸铵0.5mmol/L。
[0012]进一步的，所述模拟肠液为：
[0013]氯化钾6.8mmol/L、磷酸二氢钾0.8mmol/L、碳酸氢钠85mmol/L、氯化钠38.4mmol/L、氯化镁0.33mmol/L。
[0014]进一步的，所述混合液1中CaCl2浓度为0.15mmol/L，胃蛋白酶浓度为 2000U/mL，胃脂酶浓度为60U/mL。
[0015]进一步的，所述混合液2中CaCl2浓度0.6mmol/L，胆盐浓度为10mmol/L，胰酶浓度为100U/mL。
[0016]进一步的，所述步骤S4的浓缩过程具体为：将所述渗透物浓缩至料液浓度为15％～40％。
[0017]进一步的，所述步骤S4的干燥方法具体为冷冻干燥、喷雾干燥、真空干燥的任意一种。
[0018]进一步的，所述水牛酪蛋白水解肽为PEP1～4，氨基酸序列如SEQIDNO:1～4所示，具体为：
[0019]PEP1为EDVPSER，氨基酸序列:
‑
Glu
‑
Asp
‑
Val
‑
Pro
‑
Ser
‑
Glu
‑
Arg
‑
；
[0020]PEP2为NAVPITPTL，氨基酸序列：
‑
Asn
‑
Ala
‑
Val
‑
Pro
‑
Ile
‑
Thr
‑
Pro
‑
Thr
‑
Leu
‑
；
[0021]PEP3为VLPVPQK，氨基酸序列：
‑
Val
‑
Leu
‑
Pro
‑
Val
‑
Pro
‑
Gln
‑
Lys
‑
；
[0022]PEP4为HPHPHLSF，氨基酸序列：
‑
His
‑
Pro
‑
His
‑
Pro
‑
His
‑
Leu
‑
Ser
‑
Phe
‑
。
[0023]基于同一专利技术构思的，本专利技术实施例还提供了上述制备方法制备获得的水牛酪蛋白水解肽在制备奶粉或保健品中的应用。
[0024]基于同一专利技术构思的，本专利技术实施例还提供了一种促进骨骼发育的奶粉，其特征在于，所述奶粉包含水牛酪蛋白水解肽或者水牛乳。
[0025]有益效果：
[0026]本专利技术对水牛酪蛋白采用静态体外模拟消化技术进行水解，经第一阶段酶解后，酪蛋白酶解率可达70％，水解物中目标功能肽含量为0.2％～1.0％；再进行第二阶段酶解，酪蛋白完全被水解，水解物中目标功能肽含量为1.5％～3.5％，分离后获得水解肽，其水解过程简单，酶解条件温和，酶解时间缩短至1h以内，酶解效率大大提高。
具体实施方式
[0027]为了更加清楚阐述本专利技术的
技术实现思路
，在此结合具体实施例予以详细说明，显然，所列举的实施例只是本技术方案的优选实施方案，本领域的技术人员可以根据所公开的
技术实现思路
显而易见地得出的其他技术方案仍属于本专利技术的保护范围。
[0028]在本专利技术实施例中，所采用的化学试剂可以通过购买或现有的制备方法制备获得，所采用的仪器设备为现有技术中的常规设备。
[0029]实施例1
[0030]S1:将一份水牛酪蛋白加入1倍体积45℃的水溶解获得酪蛋白水溶液；
[0031]S2:第一阶段酶解：
[0032](1)按照如下浓度配置模拟胃液：氯化钾(6.9mmol/L)、磷酸二氢钾(0.9mmol/L)、碳酸氢钠(25mmol/L)、氯化钠(47.2mmol/L)、氯化镁(0.1mmol/L)、碳酸铵(0.5mmol/L)；
[0033](2)将酪蛋白水溶液用浓盐酸调pH至3.0，加入同等体积的模拟胃液，然后依次加入CaCl2溶液(300mmol/L)，胃蛋白酶和胃脂肪酶，得到混合液1，其中混合液1中CaCl2浓度为0.15mmol/L，胃蛋白酶的浓度为2000U/mL，胃脂酶的浓度为60U/mL；将混合液1在37℃条件下保温20min，得到水牛酪蛋白酶解液1；
[0034]S3:第二阶段酶解
[0035](1)按照如下浓度配置模拟肠液：氯化钾(6.8mmol/L本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进骨骼发育的水牛酪蛋白水解肽制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：S1:将水牛酪蛋白溶解于42～48℃的水中获得酪蛋白水溶液；S2:用浓盐酸调节所述酪蛋白水溶液的pH值至3.0，加入等体积的模拟胃液，并依次加入CaCl2溶液，胃蛋白酶和胃脂酶获得混合液1；将所述混合液1置于37℃条件下保温0.1～2h，获得水牛酪蛋白酶解液1；S3:用3mol/LNaOH溶液调节所述水牛酪蛋白酶解液1的pH值至7.0，加入等体积的模拟肠液，并依次加入胆盐、CaCl2溶液和胰酶获得混合液2；将所述混合液2置于37℃条件下保温0.1～2h，获得水牛酪蛋白酶解液2；S4:采用膜分离技术对所述水牛酪蛋白酶解液2进行分离，获取分子量小于1kDa的渗透物；并将所述渗透物进行浓缩、干燥获得水牛酪蛋白水解肽。2.根据权利要求1所述的促进骨骼发育的水牛酪蛋白水解肽制备方法，其特征在于，所述模拟胃液为：氯化钾6.9mmol/L、磷酸二氢钾0.9mmol/L、碳酸氢钠25mmol/L、氯化钠47.2mmol/L、氯化镁0.1mmol/L、碳酸铵0.5mmol/L。3.根据权利要求1所述的促进骨骼发育的水牛酪蛋白水解肽制备方法，其特征在于，所述模拟肠液为：氯化钾6.8mmol/L、磷酸二氢钾0....

【专利技术属性】
技术研发人员：腾飞，何湘丽，刘洋，黄娟娟，
申请(专利权)人：蓝河营养品有限公司，
类型：发明
国别省市：