一种抗菌肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，尤其涉及IPC C07K14，更具体的，涉及一种抗菌肽及其应用。本发明专利技术提供了抗菌肽1～18，能够有效的抑制痤疮丙酸杆菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌的生长繁殖，且其溶血性较低，具有较好的生物安全性。安全性。

【技术实现步骤摘要】
一种抗菌肽及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及IPC C07K14，更具体的，涉及一种抗菌肽及其应用。

技术介绍

[0002]抗菌肽，广泛地存在于多种生物体，是一种具有生物活性的小分子多肽，这类活性小分子多肽普遍具有强碱性、热稳定性和光谱抗菌等特点，可以作为抵抗病原微生物入侵的重要防线。
[0003]现有专利CN201910381420.1公开了分离植物抗菌肽的方法、植物抗菌肽和植物抗菌肽的用途。该抗菌肽从黑芝麻中分离获得，具有抑制白色念珠菌和流感嗜血杆菌的作用。但未显示对其它细菌的抑制作用。
[0004]现有专利CN201811277061.7公开了一种纯化制备抗菌肽的方法，通过优化步骤工艺和参数，使半透膜纯化和反向色谱法纯化相互促进，分离纯化高纯度的抗菌肽。现有分离抗菌肽的技术已得到较好的发展。
[0005]但目前抗菌肽的种类还不多，且现有部分抗菌肽的溶血性能较强，生物安全性还有待提高。本专利技术开发了一种新的抗菌肽及其应用，主要抑制痤疮丙酸杆菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌，且其生物安全性高。

技术实现思路

[0006]为了克服现有技术的不足，本专利技术第一方面提供了一种抗菌肽，所述一种抗菌肽为抗菌肽1、抗菌肽2、抗菌肽3、抗菌肽4、抗菌肽5、抗菌肽6、抗菌肽7、抗菌肽8、抗菌肽9、抗菌肽10、抗菌肽11、抗菌肽12、抗菌肽13、抗菌肽14、抗菌肽15、抗菌肽16、抗菌肽17、抗菌肽18中的任意一种，所述抗菌肽1的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示，所述抗菌肽2的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示，所述抗菌肽3的氨基酸序列如SEQ ID No：3所示，所述抗菌肽4的氨基酸序列如SEQ ID No：4所示，所述抗菌肽5的氨基酸序列如SEQ ID No：5所示，所述抗菌肽6的氨基酸序列如SEQ ID No：6所示，所述抗菌肽7的氨基酸序列如SEQ ID No：7所示，所述抗菌肽8的氨基酸序列如SEQ ID No：8所示，所述抗菌肽9的氨基酸序列如SEQ ID No：9所示，所述抗菌肽10的氨基酸序列如SEQ ID No：10所示，所述抗菌肽11的氨基酸序列如SEQ ID No：11所示，所述抗菌肽12的氨基酸序列如SEQ ID No：12所示，所述抗菌肽13的氨基酸序列如SEQ ID No：13所示，所述抗菌肽14的氨基酸序列如SEQ ID No：14所示，所述抗菌肽15的氨基酸序列如SEQ ID No：15所示，所述抗菌肽16的氨基酸序列如SEQ ID No：16所示，所述抗菌肽17的氨基酸序列如SEQ ID No：17所示，所述抗菌肽18的氨基酸序列如SEQ ID No：18所示。
[0007]本专利技术基于机器学习的方法生成抗菌肽。利用生成模型从大规模多肽数据库学习多肽的特征向量表示，然后利用抗菌肽数据库训练机器模型分类器，筛选出具有抗菌功能的预测序列。
[0008]本专利技术第二方面，提供了所述抗菌肽的制备方法，可以通过基因工程的方法人工合成，并从细胞中通过分离纯化的方法直接获得或直接通过化学合成制备得到。
[0009]优选地，所述合成步骤如下所述：
[0010](1)多肽合成顺序是从C端到N端：将2
‑
Chlorotrityl Chloride Resin 10g放入反应管中，加15mL/g(毫升/克)DCM(二氯甲烷)，震荡30分钟。
[0011](2)接第一个氨基酸：通过沙芯抽滤掉溶剂，加入3倍摩尔过量的Fmoc
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氨基酸
‑
OH氨基酸，加入DMF(二甲基甲酰胺)溶解，再加入10倍摩尔过量的DIEA(N,N
‑
二异丙基乙胺)，震荡90分钟。用甲醇封闭。
[0012](3)脱保护：除去DMF，加15ml/g 20％哌啶DMF溶液，洗涤5分钟后，除去20％哌啶DMF溶液，再加入15ml/g 20％哌啶DMF溶液，洗涤15分钟。
[0013](4)检测：抽去哌啶溶液，取10～20粒树脂，用乙醇洗涤三次，加入检测试剂检测。105～110℃加热5分钟，颜色变为深蓝色即为阳性反应。
[0014](5)冲洗树脂：分别依次用DMF(10ml/g)，DCM(10ml/g)，DMF(10ml/g)冲洗树脂两次。
[0015](6)缩合：加入保护氨基酸三倍摩尔过量，HBTU(苯并三氮唑
‑
N,N,N',N'
‑
四甲基脲六氟磷酸酯)三倍摩尔过量，均用少量DMF溶解，加入反应管，立刻加入DIEA十倍摩尔过量，反应30分钟。
[0016](7)检测：取10～20粒树脂，用乙醇洗涤三次，加入检测试剂检测，105℃
‑
110℃加热5分钟，无色即为阴性反应。
[0017](8)冲洗树脂：分别依次用DMF(10ml/g)，DCM(10ml/g)，DMF(10ml/g)冲洗树脂两次。
[0018](9)重复(3)至(6)操作，从右到左依次连接序列中的氨基酸。
[0019](10)抽干，并按照下列方法洗树脂：DMF(10ml/g)两次，甲醇(10ml/g)两次，DMF(10ml/g)两次，DCM(10ml/g)两次，抽干10分钟。
[0020](11)从树脂上切割多肽：所用切割液成分为：95％TFA(三氟乙酸),1％水，2％EDT(巯基乙醇)，2％TIS(三异丙基硅烷)；切割时间为：120分钟。
[0021](12)吹干洗涤：将裂解液用氮气吹干，乙醚洗涤六次，然后放置常温挥发。
[0022](13)分析提纯冻干：用高效液相色谱提纯多肽粗品；收集多肽溶液放入冻干机中进行浓缩，并冻干制成白色粉末。
[0023]本专利技术第三方面，提供了一种上述抗菌肽在制备抗菌剂方面的应用。
[0024]优选地，所述抗菌剂作用的细菌为痤疮丙酸杆菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌、枯草芽孢杆菌中的任意一种；进一步优选地，为痤疮丙酸杆菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌中的任意一种。
[0025]优选地，所述抗菌肽对痤疮丙酸杆菌的最低抑菌浓度为1～25μg/mL。
[0026]优选地，所述抗菌肽对表皮葡萄球菌的最低抑菌浓度为1～25μg/mL。
[0027]优选地，所述抗菌肽对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为1～25μg/mL。
[0028]优选地，所述抗菌肽的最小溶血浓度大于等于500μg/mL。
[0029]抗菌肽的对痤疮丙酸杆菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌抑制效果的测定方法。
[0030]1、抗菌肽的对细菌的抑制效果的测定方法
[0031](
ⅰ
)抗菌肽的准备
[0032]液体培养初筛：用排枪或加样机直接取10μL用纯水溶解成1mg/mL的抗菌肽，按顺序从左到右加入到新的96孔板中，补全正负对照，备用。96孔板横向摆放，对照分别为与抗菌肽相同浓度的纯水和细菌、对照的抗菌肽和细菌，环丙沙星和细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽及其应用，其特征在于，所述的抗菌肽为抗菌肽1、抗菌肽2、抗菌肽3、抗菌肽4、抗菌肽5、抗菌肽6、抗菌肽7、抗菌肽8、抗菌肽9、抗菌肽10、抗菌肽11、抗菌肽12、抗菌肽13、抗菌肽14、抗菌肽15、抗菌肽16、抗菌肽17、抗菌肽18中的任意一种，所述抗菌肽1的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示，所述抗菌肽2的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示，所述抗菌肽3的氨基酸序列如SEQ ID No：3所示，所述抗菌肽4的氨基酸序列如SEQ ID No：4所示，所述抗菌肽5的氨基酸序列如SEQ ID No：5所示，所述抗菌肽6的氨基酸序列如SEQ ID No：6所示，所述抗菌肽7的氨基酸序列如SEQ ID No：7所示，所述抗菌肽8的氨基酸序列如SEQ ID No：8所示，所述抗菌肽9的氨基酸序列如SEQ ID No：9所示，所述抗菌肽10的氨基酸序列如SEQ ID No：10所示，所述抗菌肽11的氨基酸序列如SEQ ID No：11所示，所述抗菌肽12的氨基酸序列如SEQ ID No：12所示，所述抗菌肽13的氨基酸序列如SEQ ID No：13所示，所述抗菌肽14的氨基酸序列如SEQ ID No：14所示，所述抗菌肽15的氨基酸序列如SEQ ID No：15所示，所述抗菌肽16的氨基酸序列如SEQ ID No：16所示，所述抗菌肽17的氨基酸序列如SEQ ID No：17所示，所述抗菌肽18的氨基酸序列如SEQ ID No：18所示。2.一种根据权利要求1所述的一种抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：余论，董其昌，罗衡，王梅洁，
申请(专利权)人：上海元炘执药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：