本发明专利技术涉及生物医药多肽技术领域，尤其涉及IPC C07K14，更具体地涉及，一种具有抗菌抗炎双活性的多肽或其立体异构体及应用。本发明专利技术提供了一种具有抗菌抗炎双活性的多肽、或其立体异构，包括多肽1、多肽2、多肽3、多肽4、多肽5、多肽6任意一种；本发明专利技术中的合成的具有抗菌抗炎效果的多肽，对大肠杆菌的最小抑菌浓度范围为50～100μg/mL，对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度范围为4～50μg/mL，对痤疮丙酸杆菌的最小抑菌浓度范围为2～12.5μg/mL，对白假丝酵母菌的最小抑菌浓度范围为25～50μg/mL，其中多肽1：GIFKKITGKLFKWIK抗炎效果最强。GIFKKITGKLFKWIK抗炎效果最强。
【技术实现步骤摘要】
ID No：3所示，KKWRKVLKLIKRLVG；所述多肽4的氨基酸序列如SEQ ID No：4所示，AKRIVKLIKNFFRKL；所述多肽5的氨基酸序列如SEQ ID No：5所示，LSKWLKKLGKLLAG；所述多肽6的氨基酸序列如SEQ ID No：6所示，HFLGVVAKLVSKLF。
[0014]本专利技术中，通过机器深度学习和实验筛选，具有抗菌抗炎双活性的多肽。本专利技术人通过机器深度学习，得到了大量的抗菌多肽，在研究抗菌多肽时，意外发现部分多肽还具有抗炎效果，进一步深入研究，得到具有广谱杀菌效果及抗炎效果的多肽。
[0015]本专利技术第二方面提供了一种具有抗菌抗炎双活性的多肽或其立体异构的制备方法，所述制备方法选自基因工程的方法或化学合成的方法中的任意一种。
[0016]所述化学合成的方法(固相合成法)的具体步骤为：
[0017](1)多肽合成顺序是从C端到N端：将2
‑
氯三苯甲基氯树脂放入反应管中，加二氯甲烷DCM，震荡。
[0018](2)接第一个氨基酸：通过砂芯抽滤掉溶剂，加入Fmoc
‑
氨基酸
‑
OH，加入二甲基甲酰胺DMF溶解，再加入N,N
‑
二异丙基乙胺DIEA，震荡。用甲醇封闭。
[0019](3)脱保护：旋蒸蒸去DMF，用哌啶
‑
DMF溶剂洗涤两次，去掉溶剂。
[0020](4)检测：抽调哌啶溶液，取十几粒树脂，用乙醇洗涤三次，加入检测试剂检测。105～110℃加热5分钟，颜色变为深蓝色即为阳性反应。
[0021](5)冲洗树脂：分别依次用DMF(10mL/g)，DCM(10mL/g)，DMF(10mL/g)冲洗树脂两次。
[0022](6)缩合：加入三倍过量的DMF溶解的下一个氨基酸衍生物(从右至左)，DMF溶解三倍过量的HBTU(苯并三氮唑
‑
N,N,N',N'
‑
四甲基脲六氟磷酸酯)于反应管中，再立刻加入DIEA十倍摩尔量，反应30分钟。
[0023](7)检测：取十几粒树脂，用乙醇洗涤三次，加入检测试剂检测，105℃
‑
110℃加热5分钟，无色即为阴性反应。
[0024](8)冲洗树脂：分别依次用DMF(10mL/g)，DCM(10mL/g)，DMF(10mL/g)冲洗树脂两次。
[0025](9)重复(3)至(8)操作，从右到左依次连接序列中的氨基酸。
[0026](10)抽干，并按照下列方法洗树脂：DMF(10mL/g)两次，甲醇(10mL/g)两次，DMF(10mL/g)两次，DCM(10mL/g)两次，抽干10分钟。
[0027](11)从树脂上切割多肽：所用切割液成分为：95％TFA(V/V)(三氟乙酸)，1％(V/V)水，2％(V/V)EDT(巯基乙醇)，2％TIS(V/V)(三异丙基硅烷)；切割时间为：120分钟。
[0028](12)吹干洗涤：将切割液用氮气吹干，乙醚洗涤六次，然后放置常温挥发。
[0029](13)分析提纯冻干：用高效液相色谱提纯多肽粗品；收集多肽溶液放入冻干机中进行浓缩，并冻干制成白色粉末。
[0030]本专利技术第三方面提供了一种具有抗菌抗炎双活性的多肽或其立体异构的应用，应用于制备美容上或药学上可接受的盐。
[0031]优选的，所述美容上或药学上可接受的盐为多肽1～6与有机碱形成的盐；所述有机碱包括乙胺、二乙胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸或哌嗪中的任意一种。
[0032]优选的，所述美容上或药学上可接受的盐为多肽1～6与无机酸或有机酸形成的盐；所述有机酸为乙酸、柠檬酸、丙二酸、马来酸、酒石酸、延胡索酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、
葡萄糖酸中的任意一种；所述无机酸为盐酸、硫酸、硼酸或碳酸。
[0033]有益效果
[0034]1、本专利技术中，通过机器深度学习和实验筛选，具有抗菌抗炎双活性的多肽。
[0035]2、本专利技术中，通过固相合成法，能够大量合成相应的多肽，且大大减轻了产品提纯的难度。
[0036]3、本专利技术合成了1～6个具有抗菌抗炎效果的多肽，在抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、白假丝酵母菌中的一种或多种同时，还能抑制IL
‑
6、IL
‑
1b、CCL
‑
2、IL
‑
1因子和NO的表达。小抑菌浓度小于溶血浓度，也小于最大无细胞毒性浓度，可以进行商业化应用。
[0037]4、本专利技术中合成的具有抗菌抗炎效果的多肽，最小抑菌浓度小于溶血浓度，也小于最大无细胞毒性浓度，且具有优秀的抑制炎性作用，可以进行商业化应用。
[0038]5、本专利技术中的合成的具有抗菌抗炎效果的多肽，对大肠杆菌的最小抑菌浓度范围为50～100μg/mL，对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度范围为4～50μg/mL，对痤疮丙酸杆菌的最小抑菌浓度范围为2～12.5μg/mL，对白假丝酵母菌的最小抑菌浓度范围为25～50μg/mL，其中GLVSRLRRLVTPLL抗炎效果最强。
附图说明
[0039]图1为实施例1～6的多肽及LPS、对照组、地塞米松对IL
‑
6、IL
‑
1b、CCL
‑
2基因表达影响柱状图。
[0040]图2为实施例1～6的多肽及LPS、对照组、地塞米松对IL
‑
10
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FR1基因表达影响柱状图。
[0041]图3为各实验组在LPS刺激RAW264.7细胞模型中抑制NO水平图。
具体实施方式
[0042]实施例1
[0043]本实施例提供了一种具有抗菌抗炎双活性的多肽、或其立体异构，包括多肽1。所述多肽1的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示，GIFKKITGKLFKWIK。
[0044]本实施例的序列如SEQ ID NOs：1所示的多肽1由以下合成步骤合成：
[0045](1)多肽合成顺序是从C端到N端：将10g 2
‑
氯三苯甲基氯树脂放入反应管中，加15mL/g的DCM(二氯甲烷)，震荡30分钟。
[0046](2)接第一个氨基酸：通过砂芯抽滤掉溶剂DCM，加入3倍摩尔过量的Fmoc
‑
Lys
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OH，加入DMF(二甲基甲酰胺)溶解，再加入6倍摩尔过量的DIEA(N,N
‑
二异丙基乙胺)，震荡90分钟。用甲醇封闭。
[0047](3)脱保护：旋蒸蒸去DMF，加15mL/g 20％(V/V)哌啶
‑
DMF溶剂，洗涤5分钟后，去掉，再加入15mL/g 20％(V/V)哌啶DMF溶剂，洗涤15分钟。
[0048](4)检测：抽调哌啶溶液，取15粒树脂，用乙醇洗涤三次，加入检测试剂检测。105～110℃加热5分钟，颜色变为深蓝色即为阳性反应。
[0049]本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种具有抗菌抗炎双活性的多肽、或其立体异构，其特征在于，包括多肽1、多肽2、多肽3、多肽4、多肽5、多肽6任意一种；所述多肽1～6包括SEQ ID NOs：1
‑
6所示的氨基酸序列或其衍生物中的任意6种。2.根据权利要求1所述的具有抗菌抗炎双活性的多肽、或其立体异构，其特征在于，所述多肽1～6的氨基酸序列上的H可被氘或氚替代。3.根据权利要求1所述的具有抗菌抗炎双活性的多肽、或其立体异构，其特征在于，所述氨基酸序列的衍生物中的SEQ ID NOs：1
‑
6所示的氨基酸序列的N端的H可被CH3CH(OH)CO
‑
或R1‑
CO
‑
取代，其中R1选自：H、羟基、氨基、烷基、烯基。4.根据权利要求1所述的具有抗菌抗炎双活性的多肽、或其立体异构，其特征在于，所述氨基酸序列的衍生物中的SEQ ID NOs：1
‑
6所示的氨基酸序列的C端的H可被
‑
NR2R3或
‑
OR2，其中各个R2和R3彼此独立地选自：H、羟基、氨基、烷基或烯基。5.根据权利要求3或4所述的具有抗菌抗炎双活性的多肽、或其立体异构，其特征在于，所述烷基选自甲基、乙基、异丙基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、癸基、2
‑
乙基己基、2
‑
甲基丁基、...
【专利技术属性】
技术研发人员：董其昌，余论，王绍华，罗衡，王梅杰，
申请(专利权)人：上海元炘执药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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