一种胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞及其制备方法和应用。本发明专利技术通过大量的体内外实验，发现来自患者自体的αβT细胞经过胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2处理后，αβT细胞会转变成一种特殊状态的T细胞(TSLP

【技术实现步骤摘要】
一种胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的
αβ
T细胞及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]肥胖已成为一个全球性的流行病，肥胖不仅会诱发2型糖尿病、非酒精性脂肪肝，还会引起心血管等多种组织和器官病变，严重威胁着人类的健康。
[0003]胸腺依赖性淋巴细胞(简称：T细胞)是淋巴细胞的主要组分，它具有多种生物学功能，如直接杀伤靶细胞、辅助或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原和促有丝分裂原的应答反应以及产生细胞因子等，是身体中抵御疾病感染、肿瘤形成的“斗士”。T细胞产生的免疫应答是细胞免疫，细胞免疫的效应形式主要有两种：与靶细胞特异性结合，破坏靶细胞膜，直接杀伤靶细胞；另一种是释放淋巴因子，最终使免疫效应扩大和增强。
[0004]免疫细胞疗法通过提取患者自体的免疫细胞,经过体外培养使免疫细胞更有活力和杀伤力,并且大量增殖后再重新注入患者体内,让强大的免疫细胞与癌细胞斗争，从而达到抗肿瘤的治疗目的。日本的免疫细胞起步早,被批准且己用于临床治疗的方法包括:树突细胞疫苗疗法、aβT细胞疗法、γδT细胞疗法、NK细胞疗法等,治疗时结合患者个体情况,运用多种细胞治疗。aβT细胞疗法是”活化自体淋巴细胞疗法”的一种,在体外将具有强力攻击恶性肿瘤特性的T细胞活化增殖后,再回输至患者体内。T细胞中多数是aβT细胞,因此得名。aβT细胞是免疫细胞的一种,它攻击包括癌细胞在内的所有异常细胞,aβT细胞疗法可以提高整体免疫细胞发挥作用。此外,还它具有解除癌细胞抑制免疫(癌细胞自我保护的屏障)的作用,在癌症患者体内创造活跃的免疫机能作用。但是，目前尚未见aβT细胞疗法用于治疗肥胖、二型糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎或非酒精性脂肪肝，改善疾病相关症状的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞。
[0006]本专利技术的另一目的是提供该活化的αβT细胞的制备方法。
[0007]本专利技术的又一目的是提供该胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞的应用。
[0008]本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：
[0009]一种制备胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞的方法，加入胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2和灭活血浆培养淋巴细胞培养5
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8天获得胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞。
[0010]作为本专利技术的一种优选，胸腺基质淋巴细胞生成素在培养体系中的终浓度为20
‑
50ng/ml，优选35
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45ng/ml，进一步优选40ng/ml。
[0011]作为本专利技术的一种优选，白介素2在培养体系中的终浓度为500
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2000IU/ml，优选800
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1200IU/ml，进一步优选1000IU/ml。
[0012]作为本专利技术的一种优选，灭活血浆在培养体系中的终浓度为10
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30％(v/v)，优选15％
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25％，进一步优选20％。
[0013]作为本专利技术的进一步优选，所述的方法包括用无血清免疫细胞培养液重悬淋巴细胞，加入胸腺基质淋巴细胞生成素、白介素2和灭活血浆混合培养一周，得到所述的胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞。
[0014]按照本专利技术所述的方法制备的胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞。
[0015]本专利技术所述的胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞在制备治疗肥胖、二型糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎或非酒精性脂肪肝的药物中的应用。
[0016]作为本专利技术的一种优选，本专利技术所述的胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞在制备改善肥胖、二型糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎或非酒精性脂肪肝所致的体重增加、代谢水平紊乱中的应用。
[0017]作为本专利技术的一种优选，所述的改善肥胖、二型糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎或非酒精性脂肪肝所致的代谢水平包括使血糖、胰岛素抵抗指数、白色脂肪和肝脏甘油三酯降低到正常水平。
[0018]一种药物组合物，以本专利技术所述的胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞为有效成分或有效成分之一。
[0019]有益效果：
[0020]本专利技术通过大量的体内外实验，发现来自患者自体的αβT细胞经过胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2处理后，αβT细胞会转变成一种特殊状态的T细胞(TSLP
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T细胞)，当将这种T细胞注射入饮食引起的肥胖动物模型、二型糖尿病模型、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)/非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型中时，这些T细胞将促进皮脂分泌，诱导白色脂肪组织减少，从而在肥胖动物模型、二型糖尿病模型、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)/非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型中发挥保护作用。
附图说明
[0021]图1.制备胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞并回输人体的流程图。具体流程如下：1)抽取患者外周血，分离外周血中αβT细胞；2)向αβT细胞中加入胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2，在胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2刺激下扩增并获得TSLP
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T细胞；3)TSLP
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T细胞培养成熟后，分离TSLP
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T细胞，去除配液中的细胞因子，并用可注射的生理盐水重悬；4)将TSLP
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T细胞回输入患者体内。
[0022]图2.制备胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞并回输肥胖动物模型、二型糖尿病模型、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)/非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型的流程图。具体流程如下：1)抽取模型小鼠外周血，分离外周血中αβT细胞；2)向αβT细胞中加入胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2，在胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2刺激下扩增并获得TSLP
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T细胞；3)TSLP
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T细胞培养成熟后，分离TSLP
‑
T细胞，去除配液中的细胞因子，并用可注射的生理盐水重悬；4)将TSLP
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T细胞回输入模型小鼠体内，观察TSLP
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T细胞对模型小鼠
的改善情况。
[0023]图3.胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2可以活化αβT细胞，刺激其增殖，并促进其浸润于皮肤组织。(A
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B)流式细胞仪检测经过胸腺基质淋巴细胞生成素(40ng/ml)和白介素2(1000IU/ml)以及20％自体灭活血浆混合培养一周后的αβT细胞增殖情况(TSLP+IL2)；CTL为未经过胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞。(C)通过尾静脉将未经过胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞(CTL)或经过胸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞的方法，其特征在于，包括加入胸腺基质淋巴细胞生成素(40ng/ml)和白介素2和灭活血浆培养淋巴细胞培养5
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8天获得胸腺基质淋巴细胞生成素和白介素2活化的αβT细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，胸腺基质淋巴细胞生成素在培养体系中的终浓度为20
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50ng/ml，优选35
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45ng/ml，进一步优选40ng/ml。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，白介素2在培养体系中的终浓度为500
‑
2000IU/ml，优选800
‑
1200IU/ml，进一步优选1000IU/ml。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，灭活血浆在培养体系中的终浓度为10
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30％(v/v)，优选15％
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25％，进一步优选20％。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁宏伟，刘昊轩，龚颖芸，郑雪雪，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：