一种靶向HPV16E7的HLA-A*0201限制性CD8毒性T细胞的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种靶向HPV16E7的HLA

【技术实现步骤摘要】
一种靶向HPV16 E7的HLA
‑
A*0201限制性CD8毒性T细胞的制备方法


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种靶向HPV16 E7的HLA
‑
A*0201限制性CD8毒性T细胞的制备方法。

技术介绍

[0002]人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一种全球分布的双链环状DNA病毒，可感染皮肤和黏膜。2012年国际癌症研究机构(international Agency for Research on Cancer，IARC)将目前发现的200多种HPV分型分为高危型、疑似高危型和低危型等三种亚型，不同类型的亚型引起宫颈癌发病风险增加的程度不一样。其中HPV16、18、31、45、52和58等高危型HPV病毒(high risk types human papilloma virus，HR HPV)感染占所有亚型感染的80％。其中HPV16感染占宫颈癌的57％，超过半数，由此可见HPV16是与宫颈癌发生相关性最高的一种高危HPV。/>[0003]HP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向HPV16 E7的HLA
‑
A*0201限制性CD8毒性T淋巴细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)第0天，分离HLA
‑
A*0201阳性健康供者外周血单个核细胞(PBMC)，取部分PBMC细胞加入含有2～15μM HPV16 E7 aa
11～20
、体积分数5％人AB血清RPMI
‑
1640培养基中刺激70～110min，取刺激后细胞与剩余2/3PBMC细胞混匀，加入到含有体积分数10％人AB血清X
‑
vivo
TM
15培养基，细胞密度为(4～6)
×
106cells/mL；HPV16 E7 aa
11～20
为HPV 16E7 HLA
‑
A*0201限制性CTL表位肽，所述表位肽的氨基酸序列为YMLDLQPETT；(2)第4天，采用含有10～100ng/mL IL
‑
2、体积分数10％人AB血清的X
‑
vivo
TM
15培养基对细胞进行半量换液；(3)第8天，采用含有10～100ng/mL IL
‑
2、体积分数10％人AB血清的X
‑
vivo
TM
15培养基对细胞全量换液，细胞密度为(2～3)
×
106cells/mL；(4)第12天，采用偶联负HPV16 E7 aa
11～20
的HLA
‑
A2:Ig的磁珠对培养后PBMC进行阳性筛选，并将筛选靶向HPV16 E7抗原细胞加入含有20～70ng/mL CD3抗体、20～70ng/mL CD28抗体、10～100ng ng/mL IL
‑
2、5～50ng ng/mL IL
‑
7、5～50ng/mL IL
‑
15、5～50ng/mL IL
‑
21、体积分数10％人AB血清的X
‑
vivo
TM
15培养基进行培养，细胞密度为(0.8～1.2)
×
106cells/mL；(5)第16天，离心收集细胞，去除磁珠，并采用10～100ng/mL IL
‑
2、5～50ng/mL IL
‑
7、5～50ng ng/mL IL
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王芝辉，韩国英，梁少帅，曹启龙，黄伟，况斐，朱钰婷，董友玉，徐娟，张文茜，
申请(专利权)人：青岛海尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：