一种分化NK细胞的方法、培养基及其应用技术

本申请涉及一种分化NK细胞的方法，其包含向NK分化培养基中添加人血小板裂解物(hPL)。本申请还提供分化NK细胞的培养基及其用途。本申请还提供分化NK细胞的培养基及其用途。

【技术实现步骤摘要】
一种分化NK细胞的方法、培养基及其应用


[0001]本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种分化NK细胞的方法。

技术介绍

[0002]自然杀伤(NK)细胞是免疫系统的大颗粒细胞，构成人体内第三主要淋巴细胞亚群，是天然的细胞毒性淋巴细胞。NK细胞具有能够快速介导针对病原体感染或恶性转化细胞的细胞毒性，并能产生影响其他免疫细胞群的多种趋化因子和细胞因子，参与体内多种免疫监测和消除病原体、衰老细胞和癌症的过程。NK细胞在体内具有有限的寿命，因此必须持续补充以维持体内平衡。
[0003]近年来，基于人类自然杀伤(NK)细胞的过继性输入抗癌免疫治疗已经引起了生物医药研发行业广泛的兴趣，许多临床试验都在积极招募患者治疗各种血液恶性肿瘤和实体瘤，体外诱导分化扩增NK细胞成为开发新型细胞免疫治疗产品的理想路径。因此，需要通过一定手段来促进NK分化，并提高分化扩增的纯度。

技术实现思路

[0004]本申请提供了一种分化NK细胞的方法，本申请提供的方法通过在NK分化培养基中添加人血小板裂解物(hPL)，其含有丰富的细胞因子和营养物质，可以有效提高干/祖细胞分化为NK细胞的效率，经NK细胞杀伤实验证明，本方法生成的NK细胞具有良好的杀伤作用。
[0005]一方面，本申请提供了一种分化NK细胞的方法，其包含向NK分化培养基中添加人血小板裂解物(hPL)。
[0006]一方面，本申请提供了一种诱导干/祖细胞分化为NK细胞的方法，其包含向NK分化培养基中添加人血小板裂解物。
[0007]在某些实施方式中，所述方法中所述的干/祖细胞为造血干/祖细胞。
[0008]在某些实施方式中，所述方法中所述的干/祖细胞为CD34
+
造血干/祖细胞。
[0009]在某些实施方式中，所述方法中所述的干/祖细胞为括淋系祖细胞(CLP)。
[0010]在某些实施方式中，所述方法中所述的干/祖细胞为多能干细胞。
[0011]在某些实施方式中，所述方法中所述的干/祖细胞为诱导多能干细胞。
[0012]在某些实施方式中，所述方法中所述的干/祖细胞为人诱导多能干细胞。
[0013]在某些实施方式中，所述方法中NK细胞分化培养基还可以包含基础培养基，所述培养基可以包含血清，所述培养基可以不含血清。
[0014]在某些实施方式中，所述方法中基础培养基可以选自以下组中的一种或者多种：IMDM，DMEM，F12，StemSpan
TM
SFEM II，APEL和mTeSR。
[0015]在某些实施方式中，所述方法中基础培养基可以是DMEM。
[0016]在某些实施方式中，所述方法中NK细胞分化培养基还可以包含选自下组的一种或多种：营养物、抗生素、人血小板裂解物、β
‑
巯基乙醇、乙醇胺以及细胞因子。
[0017]在某些实施方式中，所述方法中NK细胞分化培养基可以包含DMEM+GlutaMAX
TM
培养
基、“Ham's F
‑
12Nutrient Mix，GlutaMAX
TM Supplement培养基”、人血小板裂解物(hPL)、L
‑
谷氨酰胺、β
‑
巯基乙醇和乙醇胺。
[0018]在某些实施方式中，所述方法中NK细胞分化培养基可以包含约56.6％DMEM+GlutaMAX
TM
；约28.3％F12+GlutaMAX
TM
‑
I；约10％hPL；约1％P/S；约2mM L
‑
谷氨酰胺；约25uMβ
‑
巯基乙醇以及约50uM乙醇胺。
[0019]在某些实施方式中，所述方法中NK细胞分化培养基可以包含IL
‑
3、IL7、IL
‑
15、SCF以及Flt
‑
3。
[0020]在某些实施方式中，所述方法中NK细胞分化培养基可以包含IL
‑
7、IL
‑
15、SCF以及Flt
‑
3。
[0021]在某些实施方式中，所述方法中所述SCF的浓度约为15
‑
25ng/mL。
[0022]在某些实施方式中，所述方法中所述IL3的浓度约为3
‑
7ng/mL。
[0023]在某些实施方式中，所述方法中所述IL7的浓度约为15
‑
25ng/mL。
[0024]在某些实施方式中，所述方法中所述IL15的浓度约为8
‑
12ng/mL。
[0025]在某些实施方式中，所述方法中所述Flt3
‑
L的浓度约为8
‑
12ng/mL。
[0026]在某些实施方式中，所述方法中所述NK分化培养基包含NK分化培养基Ⅰ。
[0027]在某些实施方式中，所述方法中所述NK分化培养基Ⅰ包含约56.6％DMEM+GlutaMAX
TM
；约28.3％F12+GlutaMAX
TM
‑
I；约10％hPL；约1％P/S；约2mM L
‑
谷氨酰胺；约25uMβ
‑
巯基乙醇；约50uM乙醇胺；IL
‑
3；IL7；IL
‑
15；SCF以及Flt
‑
3。
[0028]在某些实施方式中，所述方法中所述NK分化培养基包含NK分化培养基Ⅱ。
[0029]在某些实施方式中，所述方法中所述NK分化培养基Ⅱ包含约56.6％DMEM+GlutaMAX
TM
；约28.3％F12+GlutaMAX
TM
‑
I；约10％hPL；约1％P/S；约2mM L
‑
谷氨酰胺；约25uMβ
‑
巯基乙醇；约50uM乙醇胺；IL
‑
7、IL
‑
15、SCF以及Flt
‑
3。
[0030]在某些实施方式中，所述方法中可以包含以下步骤中的一步或者多步：(1)造血干/祖细胞接种于NK分化培养基Ⅰ中，培养约6天；(2)使用NK分化培养基Ⅰ继续培养约3
‑
5天；(3)使用NK分化培养基Ⅱ全换液继续培养，培养期间每隔5
‑
6天使用所述NK分化培养基II进行半量换液，培养30
‑
35天或直至获得NK细胞。
[0031]在某些实施方式中，所述方法中培养条件可以为约35
‑
39℃，3
‑
7％CO2。
[0032]在某些实施方式中，所述方法中分化的NK细胞可以是包含经修饰的NK细胞。
[0033]在某些实施方式中，所述方法中所述经修饰的NK细胞包含CAR
‑
NK细胞。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分化NK细胞的方法，其包含向NK分化培养基中添加人血小板裂解物(hPL)。2.一种诱导干/祖细胞分化为NK细胞的方法，其包含向NK分化培养基中添加人血小板裂解物。3.根据权利要求2中所述的方法，其中所述干/祖细胞包括CD34+造血干/祖细胞。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述NK分化培养基包含NK分化培养基Ⅰ，所述NK分化培养基Ⅰ包含约56.6％DMEM+GlutaMAX
TM
；约28.3％F12+GlutaMAX
TM
‑
I；约10％hPL；约1％P/S；约2mM L
‑
谷氨酰胺；约25uMβ
‑
巯基乙醇；约50uM乙醇胺；IL
‑
3；IL7；IL
‑
15；SCF以及Flt
‑
3。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其中所述NK分化培养基包含NK分化培养基Ⅱ，所述NK分化培养基Ⅱ包含约56.6％DMEM+GlutaMAX
TM
；约28.3％F12+GlutaMAX
TM
‑
I；约10％hPL；约1％P/S；约2mM L
‑
谷氨酰胺；约25uMβ
‑
巯基乙醇；约50uM乙醇胺；IL
‑
7；IL
‑
15；SCF以及Flt
‑
3。6.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱芳芳，吴晨，李超，朱浩，
申请(专利权)人：血霁生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：