【技术实现步骤摘要】
一种磁珠偶联因子复合物及扩增NK细胞的方法
[0001]本专利技术属于生物免疫学
,具体涉及一种磁珠偶联因子复合物及扩增NK细胞的方法。
技术介绍
[0002]研究表明自然杀伤(Natural Killer,NK)细胞能诱导有效的抗肿瘤、抗感染免疫反应,无需预先刺激,通过使用穿孔素和颗粒酶以及其它机制,无MHC限制性杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞。异体NK细胞移植几乎不会导致移植物抗宿主病(GVHD)和细胞因子风暴(CRS),有望成为一种“现货型”的产品。根据clinicaltrials数据库显示,截止2022年9月19日,全球范围内NK细胞免疫疗法相关的临床试验有397例正在进展中,临床结果显示,NK疗法治疗复发或难治性非霍奇金淋巴瘤患者,大多数产生了临床缓解,且未出现主要的毒性作用。
[0003]但是NK细胞在外周血中比例小,体外扩增难,扩增后细胞毒活性弱,都是限制其应用于临床免疫治疗的瓶颈。现有的NK细胞制备方法主要有饲养层法、因子法。饲养层法主要使用辐照后的K562细胞,或者工程化改造K562细胞,激活及扩增效果较好,但具有潜在的风险,安全性低。因子法没有外源风险因素加入,安全性较好,但需要预先包被,操作繁琐,激活和扩增NK细胞效果由于样本差异不稳定。
[0004]中国专利文献CN107354133A(申请号:201710767822.6)公开了磁珠偶联多种刺激蛋白的体外扩增NK细胞的方法及应用。主要为加入偶联了IL
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15、4
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1BBligand和IL ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种磁珠偶联因子复合物,其特征在于,包括磁珠、4
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1BBL,IL21,MICA。2.如权利要求1所述复合物,其特征在于,磁珠粒径为300nm
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4.5um;优选的,磁珠粒径为300nm。3.权利要求1
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2任一项所述磁珠偶联因子复合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
①
将4
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1BBL、IL21、MICA生长因子分别置于0.1
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0.5M硼酸缓冲液中,制得生长因子溶液,将生长因子溶液与磁珠混合孵育,4℃以下旋转混匀16
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24h,孵育结束后,在无菌条件下置于磁性条件下静置,弃去上清液,然后用封闭液洗涤后,再用封闭液重悬,4℃以下旋转混匀16
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24h,制得各单一生长因子磁珠组合物,分别为磁珠偶联4
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1BBL组合物、磁珠偶联IL21组合物、磁珠偶联MICA组合物;
②
将磁珠偶联4
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1BBL组合物:磁珠偶联IL21组合物:磁珠偶联MICA组合物以磁珠数量计(0.5
‑
2):(0.5
‑
2):(0.5
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2)的比例混合,制备获得磁珠偶联因子复合物。4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤
①
中,在无菌条件下置于磁性分离器上静置;优选的,静置1
‑
2...
【专利技术属性】
技术研发人员:王芝辉,徐娟,曹启龙,梁少帅,董友玉,张文茜,
申请(专利权)人:青岛海尔生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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