T细胞制造技术

本发明专利技术涉及T细胞以及用于产生组织驻留记忆T细胞(T

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞


[0001]本专利技术涉及T细胞，特别涉及但不限于用于产生组织驻留记忆T细胞(T
RM
)的方法、通过本专利技术的这些方法获取的组织驻留记忆T细胞(T
RM
)本身、包含这些T
RM
细胞的组合物、以及这些T
RM
细胞及组合物在治疗中的应用，例如应用于治疗癌症的免疫疗法。

技术介绍

[0002]使用免疫检查点抑制剂的免疫疗法，例如阻断针对PD
‑
1和CTLA
‑
4的抗体，显著地提升了无癌生存期。重要的是，过继转移，例如嵌合抗原受体(CAR)T细胞、一般肿瘤检测delta
‑
oneγδT细胞(DOT)[2,3]或是MR
‑
1限制性T细胞[4]，已经取得了很有希望的成果。然而，这些方法对于实体肿瘤是否足够有效仍是一个问题，例如对于乳腺癌，只有一小部分患者获得持久的治疗反应。T细胞免疫疗法的成功，特别是在实体肿瘤中，取决于在肿瘤组织内传递和激活具有细胞毒活性的肿瘤特异性淋巴细胞，例如CD8+T细胞。
[0003]组织免疫的突破揭示了组织驻留记忆CD8+T(T
RM
)细胞的存在[5,6]，它具有深入组织的能力。近年来，揭示了肿瘤中T
RM
细胞的存在与患者的阳性预后之间存在强相关性，其中，肿瘤中T
RM
细胞通过其标记物CD103来识别。T
RM
细胞与乳腺癌、肺癌、卵巢癌和宫颈癌等实体瘤的总生存期和无病状态延长密切相关，相关性比CD8+T细胞的总数更高[7
‑
15]。事实上，在实体肿瘤中，T
RM
细胞与增强细胞毒性T细胞的应答直接相关[16,17]。
[0004]因此，在探索改进的免疫治疗机制时，关注CD8+T细胞的产生以及将其输送至组织深处是非常重要的，并且是对于用于治疗实体肿瘤的成功的基于细胞的癌症免疫疗法的重要步骤改变。

技术实现思路

[0005]本专利技术人假设调节性T细胞(T
REG
)在一种T细胞的产生中是重要的，这种T细胞能够深入组织并对实体肿瘤非常有效。本专利技术人已经能够描述和识别产生T
RM
细胞所需的因子，从而能够在体外产生T
RM
细胞，目的是产生具有组织穿透性的抗肿瘤T细胞。
[0006]因此，在本专利技术的第一方面，提供了一种用于产生组织驻留记忆T细胞(T
RM
)的方法，该方法包括转化生长因子β(TGFβ)的存在下培养淋巴细胞，以及/或者将该淋巴细胞与调节性T细胞共同培养。
[0007]有利的是，如实施例中所述，本专利技术人开发了一种方案，通过建立组织穿透性T细胞(即组织驻留记忆T细胞)的开发所需的体外要求来产生用于细胞疗法的T细胞。这种细胞的产生将导致T
RM
细胞的产生，T
RM
细胞能够在疾病组织(如肿瘤组织及转移性肿瘤)中输送和激活具有细胞毒性活性的疾病特异性淋巴细胞，从而显著拓宽了基于T细胞疗法的治疗工具包。此外，如实施例中所述，本专利技术人开发了一种新的方案来产生用于细胞疗法的T
RM
细胞，在其培养物中不包括T
REG
细胞。
[0008]优选地，该方法在体外进行。
[0009]优选地，该方法包括在TGFβ的存在下培养淋巴细胞。优选地，在一些实施例中，该
方法不包括在调节性T细胞的存在下培养淋巴细胞。
[0010]优选地，TGFβ是具有生物活性的(即活化的)。优选地，TGFβ是哺乳动物的。TGFβ可以是啮齿动物、狗、马或猪的TGFβ。啮齿动物可以是大鼠或小鼠。最优选地，TGFβ是人类的TGFβ。
[0011]在一个实施例中，TGFβ是如美国国家生物技术信息中心(Genebank)ID No:7040所表示的TGFβ1，在本文中作为SEQ ID No:1提供，如下所示：
[0012]MPPSGLRLLPLLLPLLWLLVLTPGRPAAGLSTCKTIDMELVKRKRIEAIRGQILSKLRLASPPSQGEVPPGPLPEAVLALYNSTRDRVAGESAEPEPEPEADYYAKEVTRVLMVETHNEIYDKFKQSTHSIYMFFNTSELREAVPEPVLLSRAELRLLRLKLKVEQHVELYQKYSNNSWRYLSNRLLAPSDSPEWLSFDVTGVVRQWLSRGGEIEGFRLSAHCSCDSRDNTLQVDINGFTTGRRGDLATIHGMNRPFLLLMATPLERAQHLQSSRHRRALDTNYCFSSTEKNCCVRQLYIDFRKDLGWKWIHEPKGYHANFCLGPCPYIWSLDTQYSKVLALYNQHNPGASAAPCCVPQALEPLPIVYYVGRKPKVEQLSNMIVRSCKCS
[0013][SEQ ID No:1][0014]因此，优选地，TGFβ包含SEQ ID No:1中基本列出的序列、其片段或变体，或由其组成。
[0015]在一个实施例中，TGFβ是如Genebank ID No:7042所表示的TGFβ2，在本文中作为SEQ ID No:14提供，如下所示：
[0016]MHYCVLSAFLILHLVTVALSLSTCSTLDMDQFMRKRIEAIRGQILSKLKLTSPPEDYPEPEEVPPEVISIYNSTRDLLQEKASRRAAACERERSDEEYYAKEVYKIDMPPFFPSENAIPPTFYRPYFRIVRFDVSAMEKNASNLVKAEFRVFRLQNPKARVPEQRIELYQILKSKDLTSPTQRYIDSKVVKTRAEGEWLSFDVTDAVHEWLHHKDRNLGFKISLHCPCCTFVPSNNYIIPNKSEELEARFAGIDGTSTYTSGDQKTIKSTRKKNSGKTPHLLLMLLPSYRLESQQTNRRKKRALDAAYCFRNVQDNCCLRPLYIDFKRDLGWKWIHEPKGYNANFCAGACPYLWSSDTQHSRVLSLYNTINPEASASPCCVSQDLEPLTILYYIGKTPKIEQLSNMIVKSCKCS
[0017][SEQ ID No:14][0018]因此，优选地，TGFβ包含SEQ ID No:14中基本列出的序列、其片段或变体，或由其组成。
[0019]在一个实施例中，TGFβ是如Genebank ID No:7043所表示的TGFβ3，在本文中作为SEQ ID No:16提供，如下所示：
[0020]MKMHLQRALVVLALLNFATVSLSLSTCTTLDFGHIKKKRVEAIRGQILSKLRLTSPPEPTVMTHVPYQVLALYNSTRELLEEMHGEREEGCTQENTESEYYAKEIHKFDMIQGLAEHNELAVCPKGITSKVF本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于产生组织驻留记忆T细胞(T
RM
)的方法，该方法包括在转化生长因子β(TGFβ)的存在下培养淋巴细胞，以及/或者将该淋巴细胞与调节性T细胞共同培养。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述淋巴细胞在TGFβ的存在下培养，优选地，其中，所述淋巴细胞不与调节性T细胞共同培养。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述淋巴细胞是幼稚CD8+T淋巴细胞、效应CD8+T淋巴细胞或记忆CD8+T淋巴细胞。4.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述TGFβ以0.01ng/ml和50ng/ml之间的浓度存在。5.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述淋巴细胞从人或非人动物的组织获得，可选地，所述组织选自：血液、脾脏、淋巴结、肺、胃肠道、皮肤、前列腺乳腺组织、肝脏、骨髓和胰腺。6.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述T
RM
的特征在于分化簇8(CD8)、分化簇69(CD69)、Hobit、芳烃受体(AhR)和/或分化簇103(CD103)。7.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，所述T
RM
的特征在于不存在杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员(KLRG1)和/或脱中胚蛋白(Eomes)的表达。8.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，该方法包括在IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
7、IL
‑
12、IL
‑
15和/或IL
‑
21存在下培养所述淋巴细胞。9.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，进一步包括在白细胞介素15(IL
‑
15)的存在下培养所述淋巴细胞。10.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，进一步包括在白细胞介素33(IL
‑
33)的存在下培养所述淋巴细胞。11.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，该方法包括在白细胞介素7(IL
‑
7)的存在下培养所述淋巴细胞。12.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，其中，该方法包括在白细胞介素2(IL
‑
2)的存在下培养所述淋巴细胞。13.根据前述权利要求中任意一项所述的方法，进一步包括在至少一种白细胞介素1家族成员的存在下培养所述淋巴细胞。14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述至...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：约奥罗波安图内斯分子医学研究所，
类型：发明
国别省市：