一种饲草中多农残的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种饲草中多农残的检测方法。所述方法包括如下步骤：(1)提取：将待测饲草粉碎后与水和乙酸酸化乙腈混合，经提取后均质加入陶瓷均质子和萃取盐，经震荡后进行低温冷冻，离心后取上清液Ⅰ；(2)净化：将所述上清液与净化剂混合进行净化，经震荡离心后取上清液Ⅱ；(3)色谱质谱检测：采用GC

【技术实现步骤摘要】
一种饲草中多农残的检测方法


[0001]本专利技术涉及一种饲草中多农残的检测方法，属于农药残留分析


技术介绍

[0002]随着现代畜牧业的发展，动物饲草安全问题已经受到广大养殖户的重视。大多数牧草饲料在种植过程中或多或少会使用农药来防治病虫草害，提高农业生产力，但是残留在饲草中的化学污染物经饲喂进入动物体后，能够影响动物生理健康以及生产性能，一些亲脂性高的农药被肠道吸收后可以进入循环系统，并且经过迁移集中在脂肪组织、脑、肝、肾和牛奶中，而消费者通过二次接触畜牧产品很有可能对自身造成危害。目前，农业部193、194、199、235号公告以及GB 2763
‑
2019《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中对于饲草中农药残留限量规定较少，因此有必要开展饲草中农药多残留分析方法的研究，并且相关农药残留检测技术应得到进一步提升。
[0003]燕麦、苜蓿、青贮玉米、棉籽壳作为畜产品的重要饲料，其化学污染物残留情况与畜产品质量安全密切相关，其中燕麦、苜蓿属于干草料，青贮玉米属于青贮料，棉籽壳属于蛋白质型饲料，其含油量高，适合与其他饲草一同发酵。这些动物饲草中农药残留分析难点在于基质经提取后，大量共萃物，例如蛋白质、色素、油脂会随之进入提取液，进而造成很强的基质干扰，影响检测结果，即便成分简单的饲草也要比水果蔬菜基质含有更多的共萃物，因此选择一种适合的样品前处理技术对于复杂基质给出可靠结果是至关重要的。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种饲草中多农残的分析方法，其前处理方法适用于高色素、高油饲草复杂基质，结合气相/液相高分辨质谱能够实现饲草中多达324种农药残留的高灵敏度检测分析。
[0005]本专利技术提供的饲草中多农残的分析方法，包括如下步骤：
[0006](1)提取：将待测饲草粉碎后与水和乙酸酸化乙腈混合，经提取后均质加入陶瓷均质子和萃取盐，经震荡后进行低温冷冻，离心后取上清液Ⅰ；
[0007](2)净化：将所述上清液与净化剂混合进行净化，经震荡离心后取上清液Ⅱ；
[0008](3)色谱质谱检测：采用GC
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Q
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TOF/MS或LC
‑
Q
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TOF/MS对所述上清液Ⅱ中的农药残留进行检测，即得到饲草中的农药残留含量。
[0009]本专利技术方法适用于分析的饲草包括燕麦、苜蓿、青贮玉米和棉籽壳中至少一种。
[0010]上述的分析方法中，步骤(1)中，所述水可为超纯水，其用量为：2g饲草：2～10ml水，其目的是浸润干燥饲草，扩大孔隙率，使标准工作液更易与基质充分混合；
[0011]所述乙酸酸化乙腈中乙酸的体积含量为1％～5％，优选1％，其用量为：2g饲草：10～30ml乙酸酸化乙腈。
[0012]上述的分析方法中，其特征在于：步骤(1)中，所述萃取盐为无水硫酸镁、氯化钠、乙酸钠、柠檬酸二氢钠和柠檬酸三钠中的至少一种；
[0013]加入所述陶瓷均质子的目的是防止加入所述萃取盐后结块，从而提高农药的萃取效率，优选加入量为1颗；
[0014]所述萃取盐的用量为：2g饲草：0.5～4g萃取盐，如：4g无水硫酸镁，1g氯化钠，0.5g柠檬酸二氢钠，1g柠檬酸三钠；
[0015]所述萃取盐中，所述无水硫酸镁可以有效去除提取液中残存的水分，柠檬酸盐可以形成柠檬酸缓冲体系，更加利于碱敏感性农药的萃取；
[0016]所述低温冷冻的条件为：温度为0～
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20℃，时间为0.5～2h，其目的是进一步去除脂质、油脂等杂质干扰。
[0017]上述的分析方法中，步骤(2)中，所述净化剂可为乙二胺
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N
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丙基硅烷(PSA)、十八烷基硅烷键合硅胶(C18)、石墨化碳黑(GCB)、二氧化锆胶(Z
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Sep)、多壁碳纳米(Cleaner NANO
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carb)和增强型脂质去除剂(EMR
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Lipid)中至少一种；
[0018]优选为所述乙二胺
‑
N
‑
丙基硅烷、所述十八烷基硅烷键合硅胶与所述石墨化碳黑的混合物，质量比为30～80：30～80：15～100，如30～50：30～50：15或30：50：15，适用于燕麦和苜蓿；
[0019]优选为所述乙二胺
‑
N
‑
丙基硅烷、所述十八烷基硅烷键合硅胶与所述二氧化锆胶的混合物，质量比为30～80：30～80：15～100，如30：50：50，适用于棉籽壳；
[0020]优选为所述乙二胺
‑
N
‑
丙基硅烷与所述十八烷基硅烷键合硅胶的混合物，质量比为30～80：30～80，如30：50，适用于青贮玉米。
[0021]所述净化剂中，所述乙二胺
‑
N
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丙基硅烷可以吸附基质中的碳水化合物、脂肪酸、有机酸、酚类和少量的色素，所述十八烷基硅烷键合硅胶可以去除脂肪和脂质等非极性干扰物，所述石墨化碳黑可以去除色素、甾醇类和非极性干扰物；所述二氧化锆胶是一种在硅胶基质表面进行改性处理的颗粒，对甘油酯和磷脂具有很强的吸附力；通过各净化剂的合理组合，可以有效降低复杂基质中基质效应的干扰，增加待测物检测灵敏度。
[0022]上述的分析方法中，步骤(3)中，所述GC
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Q
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TOF/MS中气相色谱检测条件为：
[0023]色谱柱：HP
‑
5MS UI(30m
×
0.25mm，0.25μm)；
[0024]升温程序为：初始温度为40℃，保持1min，以30℃/min程序升温至130℃，再以5℃/min升温至250℃，再以10℃/min升温至300℃，保持7min；
[0025]载气：氦气；
[0026]流速：1.2mL/min；
[0027]进样口温度：270℃；
[0028]进样量：1.0μL；
[0029]进样方式：不分流进样，1min打开吹扫阀；
[0030]所述GC/MS中质谱条件为：
[0031]离子化模式：电子轰击；
[0032]离子源电压：70eV；
[0033]离子源温度：280℃；
[0034]四极杆温度：180℃；
[0035]溶剂延迟：3min；
[0036]离子监测模式：全扫描；
[0037]扫描范围：m/z 45～550；
[0038]扫描速率：5Hz。
[0039]上述的分析方法中，步骤(3)中，所述LC
‑
Q
‑
TOF/MS中液相色谱检测条件为：
[0040]色谱柱：反相色谱柱；
[0041]流动相：流动相A为5mmol/L的乙酸铵水溶液(含0.1％甲酸)，流动相B为纯乙腈；<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种饲草中多农残的分析方法，包括如下步骤：(1)提取：将待测饲草粉碎后与水和乙酸酸化乙腈混合，经提取后均质加入陶瓷均质子和萃取盐，经震荡后进行低温冷冻，离心后取上清液Ⅰ；(2)净化：将所述上清液与净化剂混合进行净化，经震荡离心后取上清液Ⅱ；(3)色谱质谱检测：采用GC
‑
Q
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TOF/MS或LC
‑
Q
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TOF/MS对所述上清液Ⅱ中的农药残留进行检测，即得到饲草中的农药残留含量。2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述饲草为燕麦、苜蓿、青贮玉米和棉籽壳中至少一种。3.根据权利要求1或2所述的分析方法，其特征在于：步骤(1)中，所述水为超纯水，其用量为：2g饲草：2～10ml水；所述乙酸酸化乙腈中乙酸的体积含量为1％～5％，其用量为：2g饲草：10～30ml乙酸酸化乙腈。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的分析方法，其特征在于：步骤(1)中，所述萃取盐为无水硫酸镁、氯化钠、乙酸钠、柠檬酸二氢钠和柠檬酸三钠中的至少一种；所述萃取盐的用量为：2g饲草：0.5～4g萃取盐；所述低温冷冻的条件为：温度为0～
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20℃，时间为0.5～2h。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的分析方法，其特征在于：步骤(2)中，所述净化剂为乙二胺
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N
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丙基硅烷、十八烷基硅烷键合硅胶、石墨化碳黑、二氧化锆胶、多壁碳纳米和增强型脂质去除剂中至少一种；优选为所述乙二胺
‑
N
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丙基硅烷、所述十八烷基硅烷键合硅胶与所述石墨化碳黑的混合物，质量比为30～80：30～80：15～100。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的分析方法，其特征在于：步骤(3)中，所述GC
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Q
‑
TOF/MS中气相色谱检测条件为：色谱柱：HP
‑
5MS UI；升温程序为：初始温度为40℃，保持1min，以30℃/min程序升温至130℃，再以5℃/min升温至250℃，再以10℃/min升温至300℃，保持7min；载气：氦气；流速：1.2mL/min；进样口温度：270℃；进样量：1.0μL；所述GC/MS中质谱条件为：离子化模式：电子轰击；离子源电压：70eV；离子源温度：280℃；四极杆温度：180℃；溶剂延迟：3min；离子监测模式：全扫描；扫描范围：m/z 45～550；扫描速率：5Hz。
7.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的分析方法，其特征在于：步骤(3)中，所述LC
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Q
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TOF/MS中液相色谱检测条件为：色谱柱：反相色谱柱；流动相：流动相A为5mmol/L的乙酸铵水溶液(含0.1％甲酸)，流动相B为纯乙腈；柱箱温度：40℃；进样体积：10μL；液相洗脱程序：0min，1％B；3min，30％B；6min，40％B；9min，40％B；15min，60％B；19min，90％B；23min，90％B；23.01min，1％B，保持4min，流速设定为0.4mL/min；所述LC
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Q
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TOF/MS中质谱条件为：离子源：双通路喷射流电喷雾电离源ESI
+
；扫描方式：正离子全扫描；毛细管电压：4000V；雾化气体：氮气；雾化气气压：0.14MPa；鞘气流速和温度分别为11.0L/min和375℃；干燥气流速：12.0L/min；干燥气温度：325℃；碎裂电压：145V。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的分析方法，其特征在于：所述农药残留包括2,4
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滴、2，4
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D丁酯、o,p'
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滴滴滴、滴滴伊、p,p'
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滴滴滴、乙酰甲胺磷、啶虫脒、脱甲基啶虫脒、乙草胺、氟丙菊酯、甲草胺、涕灭威、涕灭砜威、涕灭威亚砜、艾氏剂、烯丙菊酯、二丙烯草胺、α
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六六六、莠灭净、环丙嘧啶酸、氯氨吡啶酸、双甲脒、莠去津、阿维菌素B1a、阿维菌素B1b、嘧菌酯、苯霜灵、恶虫威、乙丁氟灵、丙硫克百威、苯菌灵、解草嗪、灭草松、苯并烯氟菌唑、β
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六六六、联苯肼酯、甲羧除草醚、联苯菊酯...

【专利技术属性】
技术研发人员：亢美娟，陈辉，谢瑜杰，冯海玲，仝凯旋，吕肖楠，李铁梅，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：