一种25-OH-VD检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种25

【技术实现步骤摘要】
一种25
‑
OH
‑
VD检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及25
‑
羟基维生素D检测
，尤其涉及一种25
‑
OH
‑
VD检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]维生素D是维持骨骼健康的主要元素。儿童期维生素D的严重缺乏将导致骨骼畸形，即佝偻病。维生素D是一种类固醇激素，经皮肤光照后产生，维生素D的两种重要形式包括维生素D3(胆钙化醇)和维生素D2(麦角钙化醇)，在人体中，维生素结合蛋白与维生素D3和维生素D2相结合，并将它们转运到肝脏中，在那里这两种形式都被羟基化，生成维生素D，即25
‑
羟基维生素D。25
‑
羟基维生素D是一种代谢产物，可在血清中检出，由于它是人体中维生素D的主要储存形式，能够促进肠道对钙的吸收以及调节钙平衡。25
‑
羟基维生素D浓度降低与骨密度下降有关。结合其它临床资料，通过对血清中25
‑
羟基维生素D对含量进行检测有助于评估骨代谢情况。
[0003]血清中检测出来的95％以上的25
‑
羟基维生素D为25
‑
羟基维生素D3，维生素D缺乏是继发性甲状旁腺机能亢进症的常见病因。提高甲状旁腺激素含量，特别是提高缺乏维生素D的老年人的甲状旁腺激素含量会导致骨软化症，增加了骨转化，降低了骨质量，并有骨折的危险。25
‑
羟基维生素D3含量低还与骨密度低有关。与其他临床数据结合，对25
‑
羟基维生素D3的含量进行检测可作为判定骨代谢的辅助手段。
[0004]目前使用传统检测试剂盒对血清中的25
‑
羟基维生素D进行检测时，存在两方面的不足，一是灵敏度和精密度不够，二是无法完全解离出血清中的25
‑
羟基维生素D，导致测量结果不准确。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是提高对血清中的25
‑
羟基维生素D检测结果的准确性、有效性以及检测效率。
[0006]为了解决上述问题，本专利技术提出以下技术方案：
[0007]一种25
‑
OH
‑
VD检测试剂盒，包括：
[0008]测试纸，所述测试纸包括底板，所述底板上沿其水平方向依次设有首尾连接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述硝酸纤维素膜上沿层析方向依次设有检测线和质控线，所述检测线上包被有25
‑
羟基维生素D抗原，所述质控线上包被有鸡IgY抗原；
[0009]T探针冻干粉，所述T探针冻干粉为量子点荧光标记的鼠抗人25
‑
羟基维生素D单克隆抗体偶联复合物冻干得到；
[0010]C探针冻干粉，所述C探针冻干粉为量子点荧光标记的羊抗鸡IgY单克隆抗体偶联复合物冻干得到。
[0011]优选地，所述底板为PVC底板。
[0012]本专利技术中，量子点是一类以碲化镉、硒化镉、硫化镉等为主要成分的具有电化学发
光和光致发光特性的新型纳米荧光材料，该量子点为现有的量子点，在此不做赘述。
[0013]其进一步地技术方案为，还包括样本处理液，所述样本处理液含有0.3MNa2CO3，0.5MNaCl，1％麦芽糖，0.5％SDS以及0.3％0.5mM EDTA
‑
Na2。
[0014]其进一步地技术方案为，所述T探针冻干粉的制备方法包括以下步骤：
[0015]将EDC和NHS在10
‑
20mM的MES溶液下活化15
‑
20分钟，活化后加入含有50
‑
100μL量子点和30
‑
60μg鼠抗人25
‑
羟基维生素D单克隆抗体的20mM BS缓冲液中，偶联得到T探针；将T探针使用探针稀释液配制到指定用量，冻干，得到T探针冻干粉。
[0016]其进一步地技术方案为，所述C探针冻干粉的制备方法包括以下步骤：
[0017]将EDC和NHS在10
‑
20mM的MES溶液下活化15
‑
20分钟，活化后加入含有50
‑
100μL量子点和10
‑
20μg羊抗鸡IgY单克隆抗体的20mMBS缓冲液中，偶联得到C探针；将C探针使用探针稀释液配制到指定用量，冻干，得到C探针冻干粉。
[0018]优选地，所述MES溶液的pH为6.5
‑
7.0，所述BS缓冲液的pH为7.0。
[0019]其进一步地技术方案为，所述T探针冻干粉的用量为0.05652
±
0.01立方厘米；所述C探针冻干粉的用量为0.05652
±
0.01立方厘米。
[0020]上述T探针冻干粉和C探针冻干粉采用冻干技术制得之后为疏松饼状，因此其用量用体积表示，上述用量能使试剂的灵敏度维持在较高水平。
[0021]在一个具体实施方案中，T探针冻干粉和C探针冻干粉是通过以下方式制备得到：按照T探针，C探针调试的用量，使用探针稀释液配制到指定用量，再将加入探针的稀释液放入冻干杯中，使用冻干机冻干，干燥完使用自封袋先包装起来，再用铝箔袋包装，在铝箔袋放置一定量的干燥剂，热封机封口备用。
[0022]在一个具体实施方案中，吸水纸通过以下方式制得：把采购到的吸水纸，放置50
‑
55℃烤箱干燥42
‑
48小时，把处理过的吸水纸裁成指定的大小备用。使用自封袋先包装起来，再用铝箔袋包装，在铝箔袋放置一定量的干燥剂，热封机封口备用。
[0023]其进一步地技术方案为，所述检测线包被的25
‑
羟基维生素D抗原的浓度为0.3
‑
0.5mg/mL。
[0024]其进一步地技术方案为，所述质控线包被的鸡IgY抗原的浓度为0.3
‑
0.5mg/mL。
[0025]进一步地，所述抗原为采用包被液稀释后的抗原；所述抗原的浓度为0.3
‑
0.5mg/mL。
[0026]进一步地，所述鸡IgY抗原为采用包被液稀释后的鸡IgY抗原；所述鸡IgY抗原的浓度为0.3
‑
0.4mg/mL。
[0027]优选地，上述包被液为现有的包被液。
[0028]本专利技术中，包被液的组成包括：10mM PBS和5％海藻糖。
[0029]本专利技术中，通过喷金划膜仪将检测线和质控线喷在硝酸纤维素膜的指定位置上，置于50
‑
55℃烤箱干燥42
‑
48小时。
[0030]在一个具体实施方案中，使用常规包被液(10mM PBS+5％海藻糖)稀释抗原至0.3
‑
0.5mg/ml，包被液稀释鸡IgY抗体至0.3
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0.5mg/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种25
‑
OH
‑
VD检测试剂盒，其特征在于，包括：测试纸，所述测试纸包括底板，所述底板上沿其水平方向依次设有首尾连接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述硝酸纤维素膜上沿层析方向依次设有检测线和质控线，所述检测线上包被有25
‑
羟基维生素D抗原，所述质控线上包被有鸡IgY抗原；T探针冻干粉，所述T探针冻干粉为量子点荧光标记的鼠抗人25
‑
羟基维生素D单克隆抗体偶联复合物冻干得到；C探针冻干粉，所述C探针冻干粉为量子点荧光标记的羊抗鸡IgY单克隆抗体偶联复合物冻干得到。2.如权利要求1所述的25
‑
OH
‑
VD检测试剂盒，其特征在于，还包括样本处理液，所述样本处理液含有0.3MNa2CO3，0.5MNaCl，1％麦芽糖，0.5％SDS以及0.3％0.5mMEDTA
‑
Na2。3.如权利要求1所述的25
‑
OH
‑
VD检测试剂盒，其特征在于，所述T探针冻干粉的制备方法包括以下步骤：将EDC和NHS在10
‑
20mM的MES溶液下活化15
‑
20分钟，活化后加入含有50
‑
100μL量子点和30
‑
60μg鼠抗人25
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羟基维生素D单克隆抗体的20mM BS缓冲液中，偶联得到T探针；将T探针使用探针稀释液配制到指定用量，冻干，得到T探针冻干粉。4.如权利要求1所述的25
‑
OH
‑
VD检测试剂盒，其特征在于，所述C探针冻干粉的制备方法包括以下步骤：将EDC和NHS在10
‑
20mM的MES溶液下活化15
‑
20分钟，活化后加入含有50
‑
100μL量子点和10
‑
20μg羊抗鸡...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡曦，梁树旺，黎燕，谢建娣，李泓彦，范海艳，
申请(专利权)人：深圳市艾伟迪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：