一种抗HbA1c的纳米抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及抗体制备技术领域，尤其涉及一种抗HbA1c的纳米抗体及其制备方法和应用，其制备方法包括以下步骤：S1、构建纳米抗体噬菌体展示文库；S2、基于所述纳米抗体噬菌体展示文库进行HbA1c纳米抗体的筛选以及原核表达验证；步骤S1包括如下步骤：制备高活性免疫抗原并免疫目的动物；分离所述目的动物的外周血淋巴细胞提取RNA，经过反转录获得cDNA；以所述cDNA为模板进行两轮PCR扩增获得纳米抗体片段，再将所述纳米抗体片段与展示载体连接，构建纳米抗体基因文库以及纳米抗体展示文库。本发明专利技术所制得的抗体具有高度特异的抗原识别能力，具有高度的亲和力和独特的抗原决定簇识别位点，能够在HbA1c抗原的免疫检测特别是双抗体夹心法中获得优异的检测效率。体夹心法中获得优异的检测效率。体夹心法中获得优异的检测效率。

【技术实现步骤摘要】
一种抗HbA1c的纳米抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及抗体制备
，尤其涉及一种抗HbA1c的纳米抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]1993年布鲁塞尔自由大学的Hamers
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Casterman等首先报道了骆驼血液中除了传统的IgG抗体外还存在另一种类型的抗体，与传统的哺乳动物抗体IgG分子结构不同，这种抗体既缺失传统抗体的轻链，也缺少重链恒定区的CH1区域，被称为重链抗体(Heavy chain antibody，HcAb)。其抗原结合部位，即可变区，也被称为VHH区，采用分子生物学技术直接克隆并重组表达VHH，可以获得上述可变区片段，被称为单域抗体，通常仅有110
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130个氨基酸组成，分子量仅有12
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15kDa，因此也被称为纳米抗体。纳米抗体远远小于传统完整抗体(150
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160kDa)及其Fab片段(约50kDa)，但却能具备与传统抗体相似或更高的特异性抗原亲和力。单域抗体固有的分子量小、理化特征稳定、亲和力高和易于重组表达制备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗HbA1c的纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、构建纳米抗体噬菌体展示文库；S2、基于所述纳米抗体噬菌体展示文库进行HbA1c纳米抗体的筛选以及原核表达验证；其中，所述步骤S1中，包括如下步骤：A1、制备高活性免疫抗原并免疫目的动物；A2、分离所述目的动物的外周血淋巴细胞提取RNA，经过反转录获得cDNA；A3、以所述cDNA为模板进行两轮PCR扩增获得纳米抗体片段，再将所述纳米抗体片段与展示载体连接，构建纳米抗体基因文库以及纳米抗体展示文库。2.根据权利要求1所述的抗HbA1c的纳米抗体的制备方法，其特征在于：所述高活性免疫抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，基因合成后，如SEQ IDNO.2所示，所述高活性免疫抗原经过合成并构建到哺乳动物表达载体上，通过PEI瞬时转染至293F细胞中表达，再经过His标签纯化抗原。3.根据权利要求1所述的抗HbA1c的纳米抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤A1中，将高活性免疫抗原与弗氏佐剂按照1：1比例混合后，按照0.5mg/次的剂量对所述免疫动物进行背部皮下多点注射的方式免疫，共免疫4次，免疫间隔为2周，所述目的动物为羊驼。4.根据权利要求1所述的抗HbA1c的纳米抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤A3中，以所述cDNA为模板进行两轮PCR扩增获得纳米抗体片段的具体方法如下：取免疫动物外周血10ml，分离PBMC并提取RNA，经过反转录获得cDNA，所用引物为随机引物，如SEQ ID NO.3所示，并以获得的cDNA为模板进行PCR扩增，以获得纳米抗体基因文库，两轮PCR所用引物分别为SEQ ID NO.4与SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.6与SEQ ID NO.7。5.根据权利要求1所述的抗HbA1c的纳米抗体的制备方法，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李泓彦，胡利华，范海艳，赖燕晖，梁树旺，李琦，
申请(专利权)人：深圳市艾伟迪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：