一种苏云金芽孢杆菌及其应用制造技术

本申请公开了一种苏云金芽孢杆菌及其应用。本申请的苏云金芽孢杆菌为保藏编号CCTCC NO:M 2022790的苏云金芽孢杆菌MIBE00006。本申请的苏云金芽孢杆菌MIBE00006，能够利用多种廉价碳源作为单一碳源进行聚羟基脂肪酸酯的高效生产，降低了聚羟基脂肪酸酯生产的原料成本；本申请的一种实现方式中，聚羟基脂肪酸酯占细胞干重的比例高达60.7％，为生产替代石油基塑料的天然高分子生物材料提供了一株新的菌株资源，为高效、低原料成本的生产聚羟基脂肪酸酯提供了一种新的方案和途径。脂肪酸酯提供了一种新的方案和途径。脂肪酸酯提供了一种新的方案和途径。

【技术实现步骤摘要】
MIBE00006或其发酵液。
[0011]需要说明的是，本申请的菌剂是指含有活的苏云金芽孢杆菌MIBE00006的活菌制剂。由于本申请的苏云金芽孢杆菌MIBE00006能够高效、低成本的生产 PHA；因此，可以将苏云金芽孢杆菌MIBE00006或其发酵液制成菌剂进行售卖或使用。
[0012]本申请的一种实现方式中，菌剂中含有聚羟基脂肪酸酯，且聚羟基脂肪酸酯占苏云金芽孢杆菌MIBE00006干重的比例大于60％。
[0013]需要说明的是，本申请的苏云金芽孢杆菌MIBE00006，其特点就是能利用多种廉价的单一碳源进行高效的生产PHA，例如以糖蜜为单一碳源的液体培养基中发酵培养2天后，其中累积的PHA比例达到60.7％，以木薯淀粉为单一碳源的液体培养基中发酵培养2天后，其中累积的PHA比例达到62.4％；因此，优选的，本申请的菌剂中含有细胞干重比例大于60％的聚羟基脂肪酸酯。
[0014]本申请的第三方面公开了本申请的苏云金芽孢杆菌MIBE00006，或者本申请的菌剂在聚羟基脂肪酸酯生产中的应用。
[0015]本申请的聚羟基脂肪酸酯尤其包括聚3
‑
羟基丁酸脂。
[0016]本申请的第四方面公开了一种生产聚羟基脂肪酸酯的方法，包括将本申请的苏云金芽孢杆菌MIBE00006，或本申请的菌剂，接种到液体培养基中，培养获得发酵液，从培养的发酵液中分离聚羟基脂肪酸酯。
[0017]需要说明的是，本申请方法由于采用本申请的苏云金芽孢杆菌MIBE00006，或含该菌株的菌剂，能够利用多种廉价碳源高效的生产PHA，例如，本申请的一种实现方式中，发酵液的细胞干重4.5g/L，累积的PHA占细胞干重的比例可以达到60.7％。
[0018]本申请的一种实现方式中，培养获得发酵液的培养条件为25
‑
35℃， 150
‑
220r/min培养1
‑
3天。
[0019]本申请的一种实现方式中，液体培养基为采用葡萄糖、蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠中的任一种作为单一碳源的无机盐培养基。
[0020]需要说明的是，本申请的苏云金芽孢杆菌MIBE00006，其特点之一就是能够利用多种廉价的单一碳源高效生产PHA，例如可以利用廉价的蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油或乙酸钠等，当然也可以利用葡萄糖作为单一碳源。
[0021]还需要说明的是，从碳源的成本价格考虑的话，优选采用蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠中的任一种作为液体培养基的单一碳源。综合考虑碳源成本价格和PHA合成效率，优选采用糖蜜、木薯淀粉和粗甘油中的任一种作为液体培养基的单一碳源；更优选采用糖蜜作为单一碳源。
[0022]本申请的一种实现方式中，液体培养基中还包括氮源。
[0023]本申请的一种实现方式中，氮源为酵母提取物和/或NH4Cl。
[0024]本申请的一种实现方式中，无机盐培养基还包括Na2HPO4、KH2PO4、NaCl、 MgSO4、CaCl2、枸椽酸铁铵、微量元素液；其中，微量元素液中包括ZnSO4、 MnCl2、H3BO3、CoCl2、CuCl2、NiCl2和NaMoO4。
[0025]本申请的一种实现方式中，液体培养基由以下成分组成，
[0026](1)碳源：葡萄糖、蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠中的任一种；
[0027](2)氮源：酵母提取物和NH4Cl；
[0028](3)其它营养成分：Na2HPO4、KH2PO4、NaCl、MgSO4、CaCl2、枸椽酸铁铵和微量元素液，微量元素液由ZnSO4、MnCl2、H3BO3、CoCl2、CuCl2、NiCl2和NaMoO4组成。
[0029]本申请的一种实现方式中，液体培养基中碳源的浓度为30g/L，氮源中酵母提取物的浓度为1g/L，NH4Cl的浓度为1g/L，其它营养成分由9g/L的Na2HPO4、 1.5g/L的KH2PO4、30g/L的NaCl、0.2g/L的MgSO4、0.02g/L的CaCl2、0.0012g/L 的枸椽酸铁铵和100μL的微量元素液组成，微量元素液由1g/L ZnSO4、0.3g/L MnCl2、3g/L H3BO3、2g/L CoCl2、0.1g/L CuCl2、0.2g/L NiCl2和0.3g/L NaMoO4组成。
[0030]需要说明的是，以上具体的液体培养基配方只是本申请的一种实现方式中证实能够利用廉价单一碳源进行高效生产PHA的液体培养基配方，例如采用以上配方，以糖蜜为单一碳源发酵培养2天后，细胞干重为4.5g/L，其中累积的 PHA比例达到60.7％。糖蜜成本低，且获得了较高的PHA产量。可以理解，本申请的苏云金芽孢杆菌MIBE00006，其关键在于可以利用多种廉价的单一碳源进行高效的PHA生产，至于液体培养基中的其他组分，可以根据需求或实际情况进行试验允许的调整，并不仅限于以上具体配方；特别是在确保碳源和氮源的情况下，其它营养成分可以根据实际情况进行删减或替换，其它营养成分中各组分的用量也可以根据实际情况进行调整。
[0031]本申请的第五方面公开了本申请的苏云金芽孢杆菌MIBE00006，或者本申请的菌剂，或者本申请生产聚羟基脂肪酸酯的方法，在制备基于聚羟基脂肪酸酯的生产包装材料、粘合材料、喷涂材料或医用材料中的应用。
[0032]本申请的有益效果在于：
[0033]本申请的苏云金芽孢杆菌MIBE00006，能够利用多种廉价的单一碳源进行聚羟基脂肪酸酯的高效生产，本申请的一种实现方式中，发酵液中细胞干重达到4.5g/L，聚羟基脂肪酸酯占细胞干重的比例高达60.7％，为生产替代石油基塑料的天然高分子生物材料提供了一株新的菌株资源，为高效、低成本的生产聚羟基脂肪酸酯提供了一种新的方案和途径。
附图说明
[0034]图1是本申请实施例1苏云金芽孢杆菌MIBE00006通过聚合酶链式反应 (PCR)扩增phaC合成酶基因，其PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分离后的胶图；
[0035]图2是本申请实施例2苏云金芽孢杆菌MIBE00006的在30℃培养1天的菌落图；
[0036]图3是本申请实施例2苏云金芽孢杆菌MIBE00006的革兰氏染色图；
[0037]图4是本申请实施例2苏云金芽孢杆菌MIBE00006的16S序列构建的系统发育树图；
[0038]图5是本申请实施例3苏云金芽孢杆菌MIBE00006的产PHA测定结果图。
[0039]菌种保藏信息：本申请的苏云金芽孢杆菌MIBE00006已于2022年6月2 日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国武汉武汉大学，邮政编码：430072)，分类命名为Bacillus thuringiensis，保藏编号为CCTCC NO:M 2022790。
具体实施方式
[0040]下面通过具体实施例对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种保藏编号为CCTCCNO:M2022790的苏云金芽孢杆菌MIBE00006。2.一种菌剂，其特征在于：含权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌MIBE00006或其发酵液。3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂中，聚羟基脂肪酸酯占所述苏云金芽孢杆菌MIBE00006干重的比例大于60％。4.权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌MIBE00006，或者权利要求2或3所述的菌剂在聚羟基脂肪酸酯生产中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述聚羟基脂肪酸酯包括聚3
‑
羟基丁酸脂。6.一种生产聚羟基脂肪酸酯的方法，其特征在于：包括将权利要求1所述的苏云金芽孢杆菌MIBE00006，或权利要求2或3所述的菌剂，接种到液体培养基中，培养获得发酵液，从培养的发酵液中分离聚羟基脂肪酸酯。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述培养获得发酵液的培养条件为25
‑
35℃，150
‑
220r/min培养1
‑
3天。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述液体培养基为采用葡萄糖、蔗糖、糖蜜、木薯淀粉、粗甘油和乙酸钠中的任一种作为单一碳源的无机盐培养基。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述液体培养基中还包括氮源；优选的，所述氮源为酵母提取物和/或NH4Cl；优选的，所述无机盐培养基还包括Na2HPO4、KH2PO4、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张梦君，郑维爽，黄艺，翟生强，陆晓娟，
申请(专利权)人：北京大学深圳研究院，
类型：发明
国别省市：