【技术实现步骤摘要】
本专利技术属基因工程，涉及一种电转缓冲液、电转化方法及其应用。
技术介绍
1、2020年，通过系统发育学和比较基因组分析对17个不同的芽孢杆菌属进行进一步的划分，普里斯特氏菌(priestia)属成为了芽孢杆菌科新属。在最新的分类表中普里斯特氏菌属下划分有10个子类群，其中巨大普里斯特氏菌(priestia megaterium)便是其中之一。巨大普里斯特氏菌，是一种好氧革兰氏阳性菌，具有对环境友好、对粮食作物安全、对人畜无害等优点，广泛应用于解磷固氮、生物防治、水体净化等领域，是极具应用价值的微生物资源。巨大普里斯特氏菌生长迅速、生物合成及代谢途径丰富，可作为细胞工厂进行生物发酵，表现出良好的生产潜力。
2、用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的细菌类细胞株系一般称为“工程菌”(基因工程菌)。通过这种改造，得到的“工程菌”在实际使用领域具有更大应用价值。但这种改造根据不同的改造菌种(受体细菌，受体菌)而呈现出不同的难度。细菌转化是构建“工程菌”的重要方式。受体细菌通过直接吸收来自供体细菌或人工重组的含有特定基因的dna片段，从而获得了相应遗传性状，这种现象称为细菌转化。常用的转化细菌的方法包括化学转化、电转化、热激转化等。其中，电转化则是利用电场作用，使dna分子穿过细胞膜进入细胞内。这一技术能够大大提高细胞对外源dna的吸收效率，是常用的细胞转染方法之一。在实际操作中，首先将目标细胞与外源dna置于缓冲液中，然后施加脉冲电场，使细胞膜暂时变得通透，从而促进dna进入细胞。
3、目前，现有技术中普里
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术在对普里斯特氏菌及其电转化方法的深入研究和探索中，得到了一种全新的电转缓冲液，以及基于该电转缓冲液的电转化方法及其应用。
2、第一方面，本专利技术提供了一种电转缓冲液，该电转缓冲液的主要成分包括：可溶性糖和ph值大于等于4且小于等于6的无机盐。
3、进一步的，该电转缓冲液还包括甘油。
4、第二方面，本专利技术提供了一种电转化方法，该电转化方法中采用第一方面的电转缓冲液。
5、第三方面，本专利技术提供了第一方面的电转缓冲液和第二方面的电转化方法在工程菌制备中的应用。
6、在本专利技术的一种具体实施方式中，上述工程菌为普里斯特氏菌。
7、第四方面，本专利技术提供了一种普里斯特氏菌电转化方法，包括：取普里斯特氏菌感受态细胞，加入质粒dna，冰浴后加入第一方面提供的电转化缓冲液，冰浴后转入预冷的电击杯中进行电击。
8、进一步的，在本专利技术的一种具体实施方式中，上述普里斯特氏菌感受态细胞的制备包括以下步骤：a、将普里斯特氏菌在固体培养基平板上划线培养；b、挑取单克隆接种于液体培养基，置于37℃摇床过夜培养；c、转接过夜培养物至液体培养基，置于37℃摇床培养；d、分装培养物至无菌离心管，冰浴后4℃离心收集菌体；e、将d步骤后收集的菌体用无菌水进行重悬，再冰浴离心收集菌体，此步骤重复若干次；f、将e步骤后收集的菌体用甘油溶液进行重悬，冰浴后离心收集菌体，此步骤重复若干次；g、将f步骤后收集的菌体用甘油溶液进行重悬，分装保存，得到普里斯特氏菌感受态细胞。
9、在本专利技术的一种具体实施方式中，上述普里斯特氏菌电转化方法中，在电击后，迅速于电击杯中加入液体培养基，充分混匀后转移至无菌离心管，置于37℃摇床孵育；将孵育后的转化细胞培养液涂布于含载体抗性的抗生素筛选平板上，37℃倒置培养。
10、第五方面，本专利技术提供了一种通过上述方法制备得到的工程菌，该工程菌为包含有噬菌体裂解系统基因的巨大普里斯特氏菌。
11、本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的电转化缓冲液不同于现有技术中常见的电转缓冲液，该缓冲液在电击时能最大限度降低细胞死亡率，同时确保高效的核酸递送，尤其是在普里斯特氏菌的电转化中使转化效率增长22倍，解决了现有技术中普里斯特氏菌转化困难的问题。
12、本专利技术提供的电转缓冲液、电转化方法，为菌种改造提供了全新的技术支持，将其应用于工程菌领域所获得的菌体能够应用于例如噬菌体裂解酶等外源基因诱导表达等研究，大大拓展普里斯特氏菌的生物学应用。
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1.一种电转缓冲液，其特征在于，所述电转缓冲液包括：可溶性糖和pH值大于等于4且小于等于6的无机盐。
2.根据权利要求1所述的电转缓冲液，其特征在于，所述可溶性糖包括单糖和双糖中的至少一种；
3.根据权利要求1所述的电转缓冲液，其特征在于，所述无机盐为磷酸的酸式盐；
4.根据权利要求1所述的电转缓冲液，其特征在于，所述电转缓冲液还包括甘油。
5.一种电转化方法，其特征在于，所述电转化方法中采用如权利要求1-4中任一项所述的电转缓冲液。
6.如权利要求1-4所述的电转缓冲液或如权利要求5所述的电转化方法在工程菌制备中的应用。
7.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述工程菌为普里斯特氏菌；
8.一种普里斯特氏菌电转化方法，包括：取普里斯特氏菌感受态细胞，加入质粒DNA，冰浴后加入如权利要求1-4中任一项所述的电转化缓冲液，冰浴后转入预冷的电击杯中进行电击。
9.如权利要求8所述的电转化方法，其特征在于，所述感受态细胞的制备包括以下步骤：a、将普里斯特氏菌在固体培养基平板上划线培养；b、
10.一种通过如权利要求5或8所述的电转化方法制备得到的工程菌，所述工程菌为包含有噬菌体裂解系统基因的巨大普里斯特氏菌。
...【技术特征摘要】
1.一种电转缓冲液，其特征在于，所述电转缓冲液包括：可溶性糖和ph值大于等于4且小于等于6的无机盐。
2.根据权利要求1所述的电转缓冲液，其特征在于，所述可溶性糖包括单糖和双糖中的至少一种；
3.根据权利要求1所述的电转缓冲液，其特征在于，所述无机盐为磷酸的酸式盐；
4.根据权利要求1所述的电转缓冲液，其特征在于，所述电转缓冲液还包括甘油。
5.一种电转化方法，其特征在于，所述电转化方法中采用如权利要求1-4中任一项所述的电转缓冲液。
6.如权利要求1-4所述的电转缓冲液或如权利要求5所述的电转化方法在工程菌制备中的应用。
7.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述工程菌为普里斯特氏菌；
8.一种普里斯特氏菌电转化方法，包括：取普里斯特氏菌感受态细胞，加入质粒dna，冰...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄艺，白歆奕，张广豹，张梦君，
申请(专利权)人：北京大学深圳研究院，
类型：发明
国别省市：
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