【技术实现步骤摘要】
汗腺细胞的培养获得汗腺类器官的方法及其应用
[0001]本申请为申请日2019年03月08日、申请号201910175914.4、专利技术名称“汗腺细胞的分离和培养获得汗腺类器官的方法及其应用”的分案申请。
[0002]本专利技术属于生物工程
,具体涉及一种汗腺细胞的培养方法,特别是涉及一种汗腺细胞的培养获得汗腺类器官的方法及其在汗腺损伤的皮肤修复中的应用。
技术介绍
[0003]汗腺,作为人体最大器官
‑
皮肤的附属器官,主要在调节体温、平衡体液以及物质代谢等方面发挥重要的作用。汗腺发生于胚胎时期,出生后,当汗腺结构遭遇破坏时,例如轻度烧伤,汗腺可以以其深部未受创的部分为模板完全修复受损的汗腺,而当汗腺结构遭遇完全破坏时,汗腺是无法再生的,例如在严重的深度烧伤后,创面愈合处缺乏汗腺结构,患者无法再恢复其创伤处的发汗功能。尽管随着医疗技术的发展,大面积烧伤的生存率大大提高,但是患者预后还是面临汗腺功能缺失,严重降低患者愈后的生活质量。此外,还存在多种伴有皮肤汗腺发育异常与功能障碍的遗传性疾病,目前无法通过现有治疗手段恢复汗腺的正常结构与功能。因此,促进患处汗腺功能重建已成为皮肤创面愈合过程中欲待解决的一个重要问题。
[0004]近年来,随着干细胞生物学与再生医学研究的深入,干细胞治疗显示出良好的促组织再生能力,干细胞技术为汗腺再生带来了新的希望。应用干细胞技术促进汗腺再生,需要解决两个关键问题。一是细胞的来源,所获得的细胞不但需具有较强的增殖能力,还必须具备分化为汗腺细胞、发挥汗 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1.一种使用汗腺细胞培养汗腺类器官的方法,其特征在于,包括以下步骤:T1:将汗腺细胞用基质胶进行重悬,得到重悬的汗腺细胞;和T2:利用三维培养基对重悬的汗腺细胞进行培养,收集培养后的三维汗腺样结构即为培养的汗腺类器官;其中所述三维培养基的配方包括以下组分:Advanced DMEM/F
‑
12培养基、0.01%
‑
1%白蛋白、0.2%
‑
10%B
‑
27添加剂、1
‑
50mM HEPES、0.1%
‑
10%谷氨酰胺添加剂、10
‑
1000U/mL青霉素和0.01
‑
1mg/mL链霉素。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述三维培养基的配方包括以下组分:Advanced DMEM/F
‑
12培养基、0.1%白蛋白、2%B
‑
27添加剂、10mM HEPES、1%谷氨酰胺添加剂、100U/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素。3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤T1中,所述基质胶为Matrigel或BME;所述基质胶的浓度为6
‑
9mg/mL;所述重悬的汗腺细胞中汗腺细胞的浓度为1
×
102个/mL
‑2×
103个/mL;和/或步骤T2中,所述培养的条件为:37℃、5%CO2培养箱中培养,培养时间为5
‑
12天,其中每3天更换所述三维培养基一次;优选地,所述培养时间为5
‑
7天。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法,其特征在于,所述三维培养基的配方还包括以下组分中的一种或多种:抗氧化剂、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、EDA信号通路激动剂、Sirt1蛋白抑制剂、Wnt信号通路激动剂、TGFβ信号通路抑制剂、腺苷酸环化酶激动剂、BMP4信号通路激动剂;优选地,所述抗氧化剂为N
‑
乙酰基
‑
L
‑
半胱氨酸,浓度为0.1
‑
10mM;所述表皮细胞生长因子为EGF,浓度为5
‑
200ng/mL;所述碱性成纤维细胞生长因子为bFGF,浓度为2
‑
200ng/mL;所述EDA信号通路激动剂为EDA,浓度为2
‑
200ng/mL;所述Sirt1蛋白抑制剂为尼克酰胺,浓度为1
‑
100mM;所述Wnt信号通路激动剂为Wnt3a,浓度为10
‑
1000ng/mL;所述TGFβ信号通路抑制剂为A83
‑
01,浓度为0.1
‑
10μM;所述腺苷酸环化酶激动剂为佛司可林FSK,浓度为1
‑
100μM;所述BMP4信号通路激动剂为BMP4,浓度为2
‑
200ng/mL。5.一种用于权利要求1
‑
4中任一项所述的方法中的三维培养基,其特征在于,所述培养基的配方包括以下组分:Advanced DMEM/F
‑
12培养基、0.01%
‑
1%白蛋白、0.2%
‑
10%B
‑
27添加剂、1
‑
50mM HEPES、0.1%
‑
10%谷氨酰胺添加剂、10
‑
1000U/mL青霉素和0.01
‑
1mg/mL链霉素。6.根据权利要求5所述的三维培养基,其特征在于,所述培养基的配方包括以下组分:Advanced DMEM/F
‑
12培养基、0.1%白蛋白、2%B
技术研发人员:王韫芳,王振军,胡健,刁金美,柳娟,王术勇,王勇,
申请(专利权)人:中国人民解放军军事科学院军事医学研究院,
类型:发明
国别省市:
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